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青砖茶水提物对大鼠便秘型肠易激综合征的治疗作用研究

2025-01-16 95 上传者：管理员

摘要：目的探究青砖茶水提物对大鼠便秘型肠易激综合征的作用。方法 9年青砖茶经粉碎、浸提、旋蒸、冻干得到青砖茶水提物。雌性SD大鼠随机分为对照组（Control组）、模型组（Model组）和青砖茶水提物组（QDT组，50mg/kg）,每组6只，采用14d冰水灌胃法建立便秘型肠易激综合征大鼠模型。造模完成后，QDT组灌胃给予青砖茶水提物治疗14d, Control和Model组给予等体积蒸馏水。观察并记录大鼠体质量、粪便粒数、粪便含水量，炭末推进实验检测大鼠肠道传输功能，HE染色观察结肠组织病理变化，检测大鼠血清5-羟色胺（5-HT）、结肠组织5-羟色胺3受体（5-HT3R）的表达。结果与Control组相比，Model组大鼠体质量增幅降低，粪便粒数、粪便含水量、肠动力降低，HE染色显示结肠组织无器质性病变，5-HT水平升高，5-HT3R水平降低；与Model组相比，QDT组大鼠体质量增幅、粪便粒数有升高趋势，粪便含水量、肠动力显著升高，结肠炎性浸润程度降低，5-HT水平降低。结论青砖茶水提物对大鼠便秘型肠易激综合征具有治疗作用，可能与作用于5-HT信号通路，降低5-HT水平，诱导结肠5-HT3R表达上调等有关。

关键词：
5-羟色胺
5-羟色胺3受体
便秘型肠易激综合征
青砖茶
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肠易激综合征(irritable bowel syndrome, IBS)是一组持续或间歇发作，以腹痛、腹胀、排便习惯和(或)大便性状改变为临床表现，而缺乏胃肠道结构和生化异常的肠道功能紊乱性疾病。IBS在世界范围内常见，全球发病率高达20%,我国IBS总体患病率为1.4%～11.5%,以中青年为主要发病人群，女性患病率略高于男性[1]。便秘型肠易激综合征(constipation-typeirritable bowel syndrome, IBS-C)是IBS的亚型之一，约占IBS的三分之一，以腹痛、排便不尽、排便习惯改变等为主要表现，虽不造成任何器质性病变和生化指标异常，但会严重影响患者的生活质量和工作效率[2]。当前IBS-C常用药物仅限于对症治疗，患者使用利那洛肽改善症状，但极易引起腹泻的副作用[3],因此，有必要开发副作用小的IBS-C新型天然治疗药物。

青砖茶(Qingzhuan Dark Tea)又称“老青茶”,属深度发酵黑茶，主产于鄂南和鄂西南地区。青砖茶因其减肥降脂、调理肠道、抑菌、抗氧化等保健功效越来越受到大众关注[4],促胃肠道功能、减肥降脂、保肝护肝等传统药用价值也已逐渐得到现代药理学证实[5-6],有较大的研究和应用前景。本研究通过建立大鼠IBS-C模型，探究青砖茶水提物对大鼠IBS-C治疗作用以及可能机制，为青砖茶药食两用型产品的应用开发提供科学依据。

1、材料与方法

1.1实验动物

SPF级雌性SD大鼠，体质量180～220g,购自湖北省实验动物研究中心，许可证号SCXK(鄂)2020-0018。

1.2主要试剂与仪器

多聚甲醛(上海麦克林生化科技有限公司);DAB显色试剂盒(2005289,江苏世泰实验器材有限公司);5-羟色胺(5-HT)酶联免疫吸附检测试剂盒(上海酶联，批号YJ059511);5-HT抗体、5-羟色胺3受体(5-HT3R)抗体和5-羟色胺4受体(5-HT4R)抗体均购自爱必信上海生物科技有限公司；ME204E型电子天平(梅特勒公司);UPR-Ⅱ-10T型超纯水机(成都优普超纯科技有限公司);TGL-20M型超速离心机(沪康公司);DZ-1BC型真空烘箱(泰斯特公司);N-1300型旋转蒸发仪[东京理化器械(株)独资工厂];FD-1A-50型冷冻干燥机(上海旻泉仪器公司);JJ-12J脱水机(武汉俊杰电子有限公司);JB-P5包埋机(武汉俊杰电子有限公司);RM2016病理切片机(上海徕卡仪器有限公司);ELX800型酶标检测仪(美国Bio-Tek公司)。

1.3实验方法

1.3.1青砖茶水提物的制备

参考王丽丽[7]的水提物制备方法，取9年青砖茶(湖北省赵李桥茶厂有限责任公司，1.7kg/块)切块、粉碎后，按照1∶15茶水比熬煮30min,冷却后过滤离心，上清液旋转蒸发浓缩，冷冻干燥，密封保存备用。

1.3.2 IBS-C大鼠模型的建立、分组及药物干预

SD大鼠随机分为对照组(Control组)、模型组(Model组)和青砖茶水提物组(QDT组),每组6只。采用冰水混合物灌胃法建立IBS-C大鼠模型[8],每日准时给予大鼠0～4℃冰水混合物2mL灌胃一次，连续灌胃14d。若见大鼠粪便质硬、形状缩小、含水量减少，大鼠性易激惹，可认为造模成功。造模成功后，QDT组给予青砖茶水提物(50mg/kg)灌胃，Control组及Model组给予等体积蒸馏水灌胃，1次/d,连续14d。

1.3.3大鼠排便情况测定

收集每组大鼠灌胃24h后的粪便，记录粪便颗粒数。使用电子天平称量粪便湿质，于50℃烘箱中烘干至恒重后称量粪便干重，计算粪便含水量，粪便含水量=(粪便湿重-粪便干重)/粪便湿重×100%。

1.3.4炭末推进实验与样本采集

大鼠末次给药后禁食不禁水24h,灌胃活性炭混悬液2mL,30min后腹腔注射20%乌拉坦溶液麻醉，常规消毒后用手术剪刀沿腹正中线剪开腹腔，棉签推开腹腔脏器，于腹腔底部暴露腹主动脉，右手持穿刺针针尖斜面朝下入针角度约25°～30°向心端方向刺入，深度5mm左右，抽吸血液于促凝管中静置，采集大鼠近端结肠组织(盲肠之下约2cm)置于4%多聚甲醛液中固定。分离肠系膜，剪取幽门至回盲部的肠管，置于盘中拉直，测量肠管长度为小肠总长度，测量幽门至炭末前沿的距离为炭末在小肠中的推进距离，计算炭末推进率，活性炭混悬液推进百分率(%)=[炭末在小肠中的推进距离(cm)/小肠总长度(cm)]×100%。大鼠血液经高速3000rpm下离心15min,取上清液，按照ELISA试剂盒说明书检测结肠组织5-HT水平。

1.3.5大鼠结肠组织病理学检查

收集大鼠结肠，用生理盐水清洗，置于4%多聚甲醛液中固定24h,经梯度乙醇脱水、石蜡包埋、均匀连续切片等操作后，采用苏木精和伊红(HE)染色进行组织学分析，镜检观察结肠组织病理变化。

1.3.6免疫组化分析

结肠组织石蜡切片脱蜡至水，抗原修复后，滴加3% BSA室温孵育30min封闭，甩掉封闭液滴加PBS及一抗，4℃孵育过夜，洗涤后滴加二抗，室温孵育，DAB显色完全后，苏木素复染细胞核，脱水封片，显微镜观察并照相。采用Image J进行半定量分析。

1.4统计学方法

采用Prism 8.0.2软件对数据进行分析，计量资料以表示，两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA),以P<0.05表示差异具有统计学意义。

2、结果

2.1青砖茶水提物对IBS-C大鼠体质量的影响

各组大鼠体质量呈增长趋势。与Control组相比，造模后Model组、QDT组大鼠体质量增长幅度降低(P<0.05);与Model组相比，给药后QDT组大鼠体质量有增长，差异无统计学意义(P>0.05),见表1。

表1各组大鼠体质量的比较

2.2青砖茶水提物对IBS-C大鼠排便粒数、粪便含水量的影响

与Control组相比，给药前、后Model组大鼠排便粒数减少、粪便含水量降低(P<0.01);与Model组相比，给药后QDT组大鼠粪便含水量升高(P<0.05),粪便粒数增加但不显著，便秘症状缓解，见图1。

图1青砖茶水提物对IBS-C大鼠排便粒数和粪便含水量的影响

与Control组比较，**P<0.01;与Model组比较，#P<0.05,n=6。

2.3青砖茶水提物对IBS-C大鼠肠道推进率的影响

与Control组相比，Model组大鼠肠动力显著下降(P<0.01);与Model组相比，QDT组大鼠肠动力明显增加(P<0.05),见图2。

图2青砖茶水提物对IBS-C大鼠肠道推进率的影响

与Control组比较，**P<0.01;与Model组比较，#P<0.05,n=6。

2.4青砖茶水提物对IBS-C大鼠结肠组织大体及病理的影响

各组大鼠结肠组织黏膜结构完整，无结构性损伤。与Control组相比，Model组大鼠结肠黏膜和固有层形态基本完整，肌层厚度适中，存在小范围炎性细胞浸润；与Model组相比，QDT组结肠组织炎性细胞浸润程度略有改善，见图3。

图3青砖茶水提物对IBS-C大鼠结肠组织大体及病理的影响

与Control组比较，**P<0.01;与Model组比较，#P<0.05,n=6。

2.5青砖茶水提物对IBS-C大鼠血清5-HT的影响

与Control组相比，Model组5-HT水平显著升高(P<0.05);与Model组相比，QDT组5-HT水平有所降低(P<0.05),见图4。

图4青砖茶水提物对IBS-C大鼠血清5-HT水平的影响

与Control组比较，*P<0.05;与Model组比较，#P<0.05,n=6。

2.6青砖茶水提物对IBS-C大鼠结肠组织5-HT3R、5-HT4R表达情况影响

5-HT3R、5-HT4R在结肠组织中广泛染色，黄染部分即为阳性表达，见图5。与Control组相比，Model组大鼠5-HT3R水平降低(P<0.05),5-HT4R水平无明显变化(P>0.05);与Model组相比，QDT组大鼠5-HT3R、5-HT4R水平变化差异无显著性(P>0.05),见表2。

图5大鼠结肠组织的5-HT3R、5-HT4R免疫组化染色(标尺：20μm)

表2各组大鼠结肠组织5-HT3R、5-HT4R表达情况

3、讨论

IBS-C是以便秘、腹痛、排便不尽等为主要表现，无器质性病变的肠道功能紊乱疾病。本研究采用冰水灌胃法建立IBS-C大鼠模型，给予青砖茶水提物治疗，观察发现给药大鼠体质量增幅、粪便粒数提高，粪便含水量显著增加，小肠炭末推进率显著升高，结肠炎性细胞浸润减少，提示青砖茶水提物可以缓解症状，表现出对大鼠IBS-C的治疗作用。

研究表明，胃肠道功能与胃肠道5-HT信号系统有密切联系[9]。5-HT是一种在肠嗜铬细胞中储存、在胃肠道合成的神经递质，当胃肠道受到机械或化学刺激时，5-HT水平变化以调节胃肠道与中枢神经系统之间的感觉传递。5-HT主要通过与受体结合来发挥肠道调节效应，5-HT受体有7个类型，主要位于胃肠道的分型为5-HT3受体和5-HT4受体。5-HT3R属于配体门控阳离子通道受体，主要分布于肠黏膜下神经丛和肌间神经丛的神经元上，临床上5-HT3R也是IBS-C的治疗的靶点之一[10]。本研究结果显示，IBS-C模型组大鼠与对照组大鼠在结肠组织中的5-HT水平显著升高、5-HT3R表达下调，青砖茶水提物给药可以改善以上情况。

综上所述，青砖茶水提物摄入后，对大鼠IBS-C粪便粒数、粪便含水量、肠道传输功能以及结肠组织炎性浸润有所改善，表现出对大鼠IBS-C的治疗作用，机制可能是作用于5-HT信号通路，降低5-HT、上调结肠5-HT3R水平，该药效可能与青砖茶中水溶性的成分有关，具体有效成分以及作用机制有待进一步研究。

参考文献:

[4]卢素芳,郑鹏程,刘盼盼,等.青砖茶研究进展[J].茶叶学报,2018,59(3):162

[5]唐飞,艾于杰,张善明,等.不同年份青砖茶改善小鼠胃肠道功能的研究[J].华中农业大学学报,2018,37(1):82

[6]许佳乐,汪聪,杨艳鸿,等.黑茶的药理作用研究进展[J].茶叶通讯,2022,49(1):12

[7]王丽丽.黑茶调节脂质代谢的作用研究[D].长沙:湖南农业大学,2012

[8]彭丽华,杨云生,孙刚,等.便秘型肠易激综合征新概念模型的建立[J].世界华人消化杂志,2004(1):118

文章来源:王乐,熊方,王自瑶,等.青砖茶水提物对大鼠便秘型肠易激综合征的治疗作用研究[J].湖北科技学院学报(医学版),2025,39(01):10-13+28.