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复方补脾组合物对大鼠溃疡性结肠炎的改善作用

2024-10-24 48 上传者：管理员

摘要：目的研究复方补脾组合物治疗由葡聚糖硫酸钠(DSS)引起的大鼠溃疡性结肠炎(UC)的疗效及其作用机制。方法将大鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组[5-氨基水杨酸(ASA)]、复方补脾组合物高、中、低剂量组、石油醚提取组、氯仿提取组、乙酸乙酯提取组、正丁醇提取组，每组8只。除正常组外，其余各组自由饮用4%DSS溶液7 d,构建大鼠UC模型。给药干预结束后，观察一般状态，采用苏木素-伊红(HE)染色法观察结肠组织病理变化，测定结肠组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量，考察生化指标的变化。结果与模型组比较，复方补脾组合物高、中剂量组、乙酸乙酯提取组、正丁醇提取组可明显降低MPO、MDA含量，而明显增加SOD、GSH-PX活性(P<0.05,P<0.01)。结论复方补脾组合物能够有效改善大鼠肠黏膜损害，调节氧化应激指标，从而对UC大鼠起到治疗的作用。

关键词：
氧化应激
溃疡性结肠炎
肠蠕动减弱
葡聚糖硫酸钠
黏液脓血
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溃疡性结肠炎(UC)典型表现包括持续性的疼痛、肠蠕动减弱、黏液脓血便等。近年来，由于人们的日常生活习惯及营养摄入的改变，其发病率也在逐年升高，严重威胁生命健康[1]。目前糖皮质激素、氨基水杨酸及免疫抑制剂等是治疗UC的常见药物，这些药物能缓解症状，但是不能完全治愈疾病，且毒副作用大[2～4]。近年来，众多的研究成果表明，传统的中医药治疗对于改善UC患者症状、提升日常生活质量、降低治疗相关不良反应等方面有显著优势，采取中医药治疗已成为一种有效选择[5]。

复方中药补脾组合物以党参、白术、茯苓为君药，以益气健脾渗湿；白头翁、蒲公英为臣药，期归大肠与肝经，且味苦性寒，能入血分，以清热解毒、凉血止痢；地榆、白及为佐药，使其归肝、胃及大肠经，以取其解毒凉血收敛止血之功；甘草甘温，益气和中，调和诸药为使药。该复方组合物具有益气健脾渗湿、凉血解毒、止血止痢之功效[6～9]。适用于补脾益胃、脾虚气滞、下痢泄泻、大便泄泻、肠风下血等症。尤其是脾虚夹湿兼热毒证的泄泻、痢疾、脾虚夹湿型UC。本研究探讨复方补脾组合物治疗由葡聚糖硫酸钠(DSS)引起的大鼠UC的疗效及其作用机制。

1、材料与方法

1.1动物、试剂及仪器

药品与试剂符合实验要求SD大鼠[许可证号：SCXK(辽) 2020-0001],体质量200～230 g,雌雄各半，购自辽宁长生生物技术股份有限公司。UV-3200S型光度计(上海美谱达仪器有限公司);CP225D微量电子天平(北京赛多利斯仪器有限公司);RE-52旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);TDL-5B离心机(上海菲恰尔分析仪器有限公司)。蒲公英、茯苓、地榆、党参、白术、白头翁、甘草饮片(河北楚风中药饮片有限公司);白及(吉林省北药中药制药集团有限公司);经中国人民解放军联勤保障部队第九六四医院药剂科孙国才主任中药师鉴定，均符合《中国药典》规定；DSS(MW=5 000,上海源叶生物科技有限公司);超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)试剂盒(南京建成生物工程研究所)。

1.2动物分组与给药

取SD大鼠80只，经5 d适应性饲养后，随机分为正常组、模型组、阳性对照组[5-氨基水杨酸(ASA),0.2 g/kg]、复方补脾组合物高、中、低剂量组(生药剂量4.0、2.0、1.0 g/kg)、不同提取物组(石油醚提取组、氯仿提取组、乙酸乙酯提取组、正丁醇提取组，生药剂量4.0 g/kg),每组各8只。除正常组饮用蒸馏水作为对照，其余各组均饮用4%DSS溶液7 d造模。构建模型成功后，正常组和模型组灌胃相同体积纯化水，各实验组接受相应药物干预，灌胃容积均为5 ml/kg。阳性对照组灌胃给予5-ASA混悬液，其余各组分别灌胃给予不同浓度的复方补脾组合物及不同溶剂提取物，每组每天灌胃给药1次，连续给药10 d。

1.3一般状况的观察

监测各组行为表现、精神状态、毛发光泽度及粪便性状，观察是否有脓血便，同时记录其体质量变化和进食量等。采用疾病活动指数(DAI)对大鼠情况进行评定，评分准则依据文献[10]。

1.4标本采集及处理

末次给药后，禁食不禁水24 h,采用腹腔注射10%水合氯醛(0.3 g/kg)麻醉，迅速剖取结肠，沿纵轴剪开，生理盐水漂洗，固定后，肉眼观察炎症及溃疡情况。在距回盲部1 cm处取结肠0.5 cm,以4%甲醛溶液固定，进行苏木素-伊红(HE)染色，在镜下进行检查分析。其余组织先用冰生理盐水冲洗，并迅速冻于液氮中，再转至-80℃保存，用于SOD、MDA、MPO及GSH-PX检测。具体操作参照按试剂盒说明书。

1.5统计学处理

采用SPSS24.0软件进行t检验。

2、结果

2.1复方补脾组合物及各提取组对UC大鼠结肠组织病理形态的影响

通过HE染色观察可见，正常组结肠黏膜结构完好，腺体排列整齐、未见炎性细胞浸润及溃疡出现；模型组结肠结构被破坏，黏膜受损，腺体凌乱，伴有大面积的黏膜坏死脱落及溃疡出现。阳性组、复方补脾组合物高、中剂量组、乙酸乙酯提取组及正丁醇提取组结肠黏膜趋向正常组结构。复方补脾组合物低剂量组、氯仿提取组、石油醚提取组与模型组比较无明显差异，对结肠黏膜的修复作用很弱。见图1。

图1各组结肠组织(HE染色，×200)

2.2一般状况DAI的评估

正常组饮水、食物摄取正常，并未出现明显的体质量减轻，亦未观察到腹泻、便血等异常变化。模型组DAI评分显著高于正常组(P<0.01),呈现体质量减轻，排黏液或脓血便，并伴食欲减退、消瘦、毛色失去原有光泽等。经药物治疗的各试验组中，阳性组、复方补脾组合物高、中剂量组、乙酸乙酯提取组、正丁醇提取组评分明显低于模型组(P<0.05,P<0.01),复方补脾组合物低剂量组、氯仿提取组、石油醚提取组虽有一定改善，但无显著差异(P>0.05)。见表1。

2.3复方补脾组合物及各提取组对大鼠结肠氧化应激指标的影响

与正常组比较，模型组结肠组织中MPO、MDA明显升高，SOD、GSH-PX活力明显降低(P<0.01)。与模型组比较，阳性组、复方补脾组合物高、中剂量组、乙酸乙酯提取组、正丁醇提取组MPO、MDA明显降低，SOD、GSH-PX活力明显升高(P<0.05,P<0.01)。见表1。

表1各组结肠组织氧化应激指标

3、讨论

采用一定浓度的DSS溶液让大鼠自主饮用来建立UC模型，已成为最常见且可靠的建模方法，该方法所诱发的动物模型与人类溃疡性结肠炎在症状方面高度类似，尤其是上皮细胞的损伤方面[11,12]。DSS溶液可破坏肠的屏障，引起炎细胞浸润，激活异常免疫应答和炎性反应诱导发病[13]。在以往通常将免疫和炎症因素作为UC重要研究内容，近年研究发现，在UC致病过程中氧化应激起到关键作用，通过调节氧化应激水平，可达到治疗UC的作用[14～16]。在人体健康状态时，氧化应激与抗氧化防御之间会维持动态平衡，当人体抗氧化防御能力下降或活性氧自由基分泌异常增多，则会使得氧化应激水平提高。氧化应激可以通过多种方式损害肠黏膜上皮细胞，影响肠上皮细胞的正常功能，引发或加重UC的发生与发展[17]。研究发现，MPO、MDA、SOD、GSH-PX等细胞因子的水平能够反映UC患者的抗氧化能力，因此通过调控这些细胞因子活性，提高UC患者的抗氧化能力，为溃疡性结肠炎的治疗提供了一种有效方法[18]。本实验结果表明，复方补脾组合物浓度越高，疗效越好，高、中剂量组产生了理想的治疗效果。

综上，复方补脾组合物可以通过降低大鼠结肠组织中MPO、MDA的水平，增加GSH-PX、SOD活性，减缓UC大鼠受氧化应激造成的损害，进而有助于肠道黏膜的修复。

参考文献:

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