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细菌性阴道病患者微生物群特征与临床症状的相关性分析

2024-03-25 116 上传者：管理员

摘要：目的探讨不细菌性阴道病患者微生物群特征与临床症状的相关性分析。方法纳入2022年1月—2022年10月宣城市中心医院治疗的80例细菌性阴道病(BV)患者(BV组)和80例健康受试者(对照组)。比较两组患者阴道关键菌群、形态学检验结果、临床症状评分、Nugent评分及阴道关键菌群与临床症状的相关性。结果 BV组患者加德纳菌、普雷沃菌、阿托波菌及乳酸杆菌相对丰度分别为(0.07±0.02)%、(0.09±0.02)%、(0.05±0.01)%、(0.10±0.05)%,对照组以上菌种相对丰度分别为(0.05±0.01)%、(0.02±0.01)%、(0.02±0.01)%、(0.69±0.18)%,BV组患者加德纳菌、普雷沃菌及阿托波菌相对丰度高于对照组(P<0.05),乳酸杆菌相对丰度低于对照组(P<0.05);BV组患者阴道pH值、线索细胞阳性率分别为4.92±0.50和81.25%,对照组以上值分别为别为4.66±0.43、52.50%,BV组阴道pH值、线索细胞阳性率高于对照组(P<0.05);BV组阴道Nugent评分、临床症状评分分别为(7.73±0.81)分、(3.99±0.74)分，对照组以上分值分别为(4.13±0.86)分、(2.00±0.69)分，BV组Nugent评分、临床症状评分高于对照组(P<0.05);乳酸杆菌与pH、Nugent评分、临床症状评分呈负相关(r=-0.318,-0.830,-0.755,P<0.05),加德纳菌、普雷沃菌、阿托波菌与pH、Nugent评分及临床症状评分呈正相关(加德纳菌：r=0.169,0.512,0.424;普雷沃菌：r=0.234,0.873,0.789;阿托波菌：r=0.243,0.728,0.712,P<0.05)。结论 BV患者阴道主要的微生物群为加德纳菌、普雷沃菌及阿托波菌，乳酸杆菌分布较少，阴道微生物群与BV患者的临床症状具有相关性。

关键词：
BV
临床症状
微生物群
感染性疾病
细菌性阴道病
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细菌性阴道病(BV)是一种育龄期女性常见的阴道感染性疾病，我国健康体检妇女BV患病率约为11%,在妇科门诊中可达36%～60%,而该病可导致患者早产、不孕或引发其他阴道疾病，需及时就医治疗[1]。BV常见临床表现为白带异常、外阴瘙痒及分泌物恶臭等，但部分患者也可能无明显临床症状[2]。目前BV具体发病原因尚未阐明，但多数学者认为该病的发生与阴道内微生物群结构密切相关[3,4,5]。女性阴道内分布着多种微生物群，不同的微生物相互拮抗共生，以维持女性生殖道的生理功能[6]。最近一项BV病菌群结构分析显示[7],女性健康阴道的菌群以乳酸杆菌为主，而BV患者阴道内该类菌群减少，导致其他致病菌，如加德纳菌等细菌生长过度，使得阴道内环境发生改变，同时引发炎症。既往研究也表明，阴道内微生物的多样性低更有利于保持阴道健康[8]。基于此，本研究通过对比BV患者与健康体检者的微生物群分布情况、形态学检验结果等，分析BV患者微生物群特征与其临床症状的相关性。

1、资料与方法

1.1 资料来源

纳入2022年1月—2022年10月在宣城市中心医院治疗的80例BV患者和80例健康受试者，将其分为BV组和对照组各80例。对照组年龄(41.59±3.33)岁、BMI(23.28±6.60)kg/m2、病程(6.35±1.31)年，BV组年龄(42.16±3.35)岁、BMI(22.64±6.70)kg/m2、病程(6.38±1.45)年，两组患者年龄、BMI、病程比较差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。纳入标准：①符合《妇产科学》(第6版)[9]中有关BV诊断的患者；②无其他妇科传染性疾病的BV患者；③无阴道、生殖道损伤者；④经妇科检查无妇科疾病的健康者；⑤48 h内无性生活者；⑥各项检查完善且治疗记录完整，并签署知情书。排除标准：①处于经期、妊娠及哺乳期者；②近2周内使用抗菌药或微生物调节剂者；③合并肝肾功能障碍者；④合并精神障碍无法配合本研究者。本研究获得医学伦理委员会审批通过。

1.2 方法

1.2.1 研究方法

两组患者均于入院后进行阴道后穹隆部分分泌物样本采集，经生理盐水稀释后进行阴道细菌群检测、形态学检验、临床症状评分、Nugent评分及相关性分析。

1.2.2 检测指标

1.2.2.1 阴道关键菌群比较

两组患者均于入院后使用无菌阴道拭子采集阴道中段分泌物，15 min内存于-80 ℃冰箱，随后进行细菌基因组DNA提取，并存于-20 ℃冰箱待测。采用PCR检测仪(ABI 7900HT)利用SYBR Green荧光染料法检测乳酸杆菌、加德纳菌、普雷沃菌及阿托波菌分布情况。以上操作均严格按照说明进行。

1.2.2.2 形态学检验比较

①pH值：将两组患者阴道分泌物样本经生理盐水稀释后，取1滴滴至pH试纸，根据试纸颜色变化读取pH值。正常范围为3.8～4.2;②线索细胞检测：将分泌物稀释液均匀涂片后，首先经结晶紫染色，洗净载玻片，经卢戈氏碘液染色，酒精脱色、洗净后，经稀释石碳酸复红液染色，最后洗净、干燥，置于油镜下观察，以上不同染液染色时间均为1 min。线索细胞阳性判定：阴道鳞状上皮细胞边缘不整、表面粗糙且有颗粒及斑点状。

1.2.2.3 临床症状评分、Nugent评分比较

①症状评分：统计并记录患者白带量、白带异味、阴道瘙痒及黏膜充血症状，无症状、轻度及中重度分别为0、1、2、3分；②Nugent评分[10]:乳酸杆菌经染色在油镜下显示为两端深，根据乳酸杆菌数量进行评分。乳杆菌数>30且无其他杂菌为0分；乳杆菌数>30但伴有极少量杂菌为1分；乳杆菌数>30但伴有少量杂菌为2分；乳杆菌数<30但伴有少量杂菌为3分；革兰染色阳性球菌为主为4分；少量乳杆菌及其他杂菌为5分；少量乳酸杆菌和大多数革兰染色阴性杆菌为6分；多数革兰染色阳性球菌、革兰染色阴性杆菌、白细胞及5～6个乳酸杆菌为7分；无乳杆菌，大量革兰染色阴性杆菌为8分。

1.2.2.4 阴道关键菌群与临床症状相关性

采用皮尔逊(Pearson)[11]相关系数对阴道关键菌群和患者临床症状进行相关性分析。r值范围为-1～1,r为正值则二者正相关，r为负值则二者负相关，r为则二者无相关性。r的绝对值越大，二者相关性越强。

1.3 统计学分析

用SPSS 20.0进行统计分析，计数资料采用χ2检验进行比较，计量资料采用均数±标准差表示，两组间比较采用独立样本t检验，采用Pearson法进行相关性分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1 两组阴道关键菌群比较

BV组患者加德纳菌、普雷沃菌及阿托波菌相对丰度分类显著高于对照组(P<0.05),乳酸杆菌显著低于对照组(P<0.05)。见表1。

表1 两组阴道关键菌群比较

2.2 两组形态学检验比较

BV组患者阴道pH值、线索细胞阳性率显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 两组形态学比较

2.3 两组患者临床症状评分、Nugent评分比较

BV组阴道Nugent评分值、临床症状评分高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

2.4 阴道关键菌群与临床症状的相关性

乳酸杆菌与pH、Nugent评分及临床症状评分呈负相关(P<0.05,r=-0.318,-0.830,-0.755),加德纳菌、普雷沃菌及阿托波菌与pH、Nugent评分、临床症状评分呈正相关(加德纳菌：r=0.169,0.512,0.424;普雷沃菌：r=0.234,0.873,0.789;阿托波菌：r=0.243,0.728,0.712)。

表3 两组临床症状评分、Nugent评分比较

3、讨论

女性阴道内存在乳酸杆菌等多种不同的微生物群，共同维持阴道内环境，以保证女性生理健康。BV患者阴道内的优势菌群乳酸杆菌减少，而其他厌氧菌过度增殖时，阴道内微生物群平衡被打破，引起阴道内环境紊乱，进而引发多种并发症[12,13]。最近的一项流行病学研究调查结果也表明，可根据BV患者阴道分泌物病原菌检测进行对症治疗[14]。故而阐明BV患者阴道关键菌群分布以及其与BV临床症状的相关性对于该病的治疗具有重要意义。

乳酸杆菌作为女性阴道的优势菌，在健康阴道内的构成比可达95%以上，其作用包括分泌过氧化氢对其他病原菌进行杀灭；促使阴道上皮的糖原分解，维持阴道PH;发挥竞争黏附作用，抑制其他菌种的生长和繁殖[15]。加德纳菌、普雷沃菌及阿托波菌是阴道常见的致病菌，以上菌种存在将导致大量胺类物质产生，引起阴道内pH值的改变，影响阴道的正常生理功能[16]。阴道脱落的附着大量厌氧菌的鳞状上皮细胞被称为线索细胞。研究显示，线索细胞检测作为一种新型的检测方式具有较高的特异性，其阳性率可作为判断阴道感染的依据[17]。本研究对BV患者和健康受试者的阴道分泌物进行样本采集，并检测其关键菌群分布、阴道pH值和线索细胞，结果显示，BV组患者加德纳菌、普雷沃菌、阿托波菌相对丰度分类显著高于对照组，乳酸杆菌显著低于对照组；BV组患者阴道pH值、线索细胞阳性率显著高于对照组。表明BV患者阴道主要微生物为加德纳菌、普雷沃菌及阿托波菌，乳酸杆菌分布则较少，且BV患者阴道环境相较于正常阴道已发生改变。Saraf等[18]的报道称，阴道微生物群的平衡与女性生殖健康之间存在密切联系，乳酸杆菌减丰度少或厌氧菌增加均可导致BV的发生。Chen等[19]对比BV患者与健康女性阴道微生物组发现，加德纳菌、普雷沃菌及阿托波菌是BV患者阴道内常见的微生物。Numanovic等[20]的实时定量PCR测定结果显示，健康阴道中加德纳菌和阿托波菌占总菌群的0.1%,乳酸杆菌占比为99.3%,BV患者阴道中加德纳菌和阿托波菌占总菌群的34.4%,而乳酸杆菌仅占21.6%,可见BV患者阴道菌群失衡。以上研究结果皆与本研究结果具有一致性。

相关研究[16,21]表明，BV患者阴道厌氧菌数量增多，阴道内蛋白质被降解产生胺类物质，将产生异味；加德纳菌等致病菌在阴道内定植后可建立细菌生物膜，逃脱机体的免疫系统，引发阴道炎症反应。Nugent评分是世界卫生组织推荐的诊断BV的金标准，该方法以细胞涂片染色为基础，在显微镜下对菌群的分布和占比情况进行观察，经评分后对BV进行诊断，具有较高的准确性，可有效降低BV的漏诊率[13,22]。本研究结果显示，BV组阴道Nugent评分值、临床症状评分高于对照组。加德纳菌在阴道内可通过分子间力和疏水性粘附于阴道壁，并形成胞外聚合物(EPS,与多糖、脂质等聚合而成),促使普雷沃菌、阿托波菌与之紧密排列，最终形成微生物细胞膜以免受多种负面刺激，从而长久依附于阴道壁，并产生大量唾液酸酶、丁二酸，二者可破坏阴道黏膜，引发炎症，同时也可增加加德纳菌等细菌的粘附力，加重其对阴道壁的损伤[23]。Morrill等[24]对人和动物模型研究的回顾性报告结果也显示，加德纳菌具有多种亚型并可共同存在于BV患者的阴道中，引发BV患者不同的临床表现。乳酸杆菌则具有抗生物膜的作用，可用于维持阴道健康[25]。乳酸杆菌可通过产生有机酸抑制致病菌的生长和繁殖，但当其菌群优势下降时，将难以维持对阴道的保护作用，使得BV患者临床症状加重[26]。进一步分析阴道关键菌群与BV患者临床症状的相关性，结果显示乳酸杆菌与pH、Nugent评分及临床症状评分呈负相关，加德纳菌、普雷沃菌及阿托波菌则呈正相关。提示对BV患者进行乳酸杆菌补充可能有助于减少加德纳菌等厌氧菌的数量，改善BV患者的临床症状。

综上所述，BV患者阴道主要的微生物群为加德纳菌、普雷沃菌及阿托波菌，乳酸杆菌分布较少，且加德纳菌、普雷沃菌及阿托波菌与患者临床症状呈正相关，乳酸杆菌则呈负相关。因此本研究推断临床可通过补充乳酸杆菌、减少加德纳菌、普雷沃菌及阿托波菌以减轻BV患者的临床症状。此外，本次研究时间较短，未确认补充乳酸杆菌对改善BV患者临床症状的确切疗效，日后将继续对此部分进行深入研究。

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