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小儿治哮灵片对幼年大鼠哮喘的干预作用
摘要：目的：研究小儿治哮灵片对幼年大鼠哮喘模型的干预作用及机制。方法：36只雄性Wistar幼年大鼠随机分为6组：对照组、模型组、醋酸地塞米松(阳性药,1mg/kg)组和小儿治哮灵片低、中、高剂量(0.32、0.64、1.28g/kg)组。除对照组外,其余各组以卵清蛋白(OVA)致敏、激发制备幼年大鼠哮喘模型。造模第8天开始ig给药,每天给药1次,给药至造模3周,对照组和模型组ig给予蒸馏水。记录各组大鼠引喘潜伏期并进行行为学评分；检测肺脏器指数；酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组幼年大鼠血清中白细胞介素(IL)-4、IL-5、IL-6、免疫球蛋白E(IgE)、γ-干扰素(IFN-γ)、核转录因子(NF-κB)的水平以及肺泡灌洗液中IFN-γ水平。结果：与模型组比较,小儿治哮灵片高、中、低剂量组引喘潜伏期及哮喘行为评分均显著下降(P<0.05、0.01)；肺脏器指数显著下降(P<0.05)；血清IL-4、IL-5、IL-6、IgE、NF-κB水平均显著下降(P<0.01)；血清与肺泡灌洗液中IFN-γ水平显著升高(P<0.01)。结论：小儿治哮灵片抗哮喘作用可能与降低炎性细胞因子分泌有关。
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支气管哮喘是世界上最常见的慢性病之一，是以咳嗽、喘息、胸闷和气促反复发作为主要临床表现的慢性气道炎症和气道高反应性特征的异质性疾病，常在夜间和清晨发作或加剧，呼吸道症状的具体表现形式和严重程度随时间变化而改变，并常伴有可逆性呼气气流受限[1]。
我国哮喘发病人数逐年上升，特别是儿童患者。儿童免疫力低，当外界环境剧烈变化时，易感受外邪从而引发哮喘。小儿哮喘是儿科的常见病、多发病，常反复发作，很难完全治愈。如果儿童期不能得到有效地治疗，很容易发展为成人哮喘，对小儿身体健康及生长发育有很大影响。调查显示，我国儿童哮喘的总患病率已达3%以上，哮喘已成为危害中国儿童健康成长的主要慢性疾病之一[2]。
小儿治哮灵片具有止哮、平喘、镇咳、化痰、强肺、脱敏等功效，用于小儿哮、咳、喘等症的治疗，多年来临床治疗小儿哮喘具有较好的疗效[3]。本实验采用幼年大鼠作为研究对象，对小儿治哮灵片作用机制进行探讨，为提高药品质量和保障患者用药安全，提供理论依据。
1、材料
1.1动物
健康雄性4周龄幼年大鼠，36只，体质量（85±5)g，购于长春市亿斯实验动物有限公司，实验动物生产许可证号SCXK（吉）-2018-0003。
1.2主要试剂
小儿治哮灵片（吉林敖东延边药业股份有限公司，批号1010001，规格0.1g/片）；醋酸地塞米松片（遂成药业股份有限公司，批号H41021038，规格0.75mg/片）；卵清蛋白（OVA,Sigma，货号SLBS6919）；氯化钠注射液（吉林省都邦药业股份有限公司，批号H22023069），白细胞介素（IL)-4、IL-5、IL-6、免疫球蛋白E(IgE）、核转录因子（NF-κB）和γ-干扰素（IFN-γ）酶联免疫试剂盒（江苏酶免实业有限公司）。
1.3主要仪器
JSC-202超声雾化器（辽宁鞍山电子医疗仪器厂）；电子分析天平（上海越平科学仪器有限公司）；WP-UP-III-40精密型超体纯水机（四川沃特尔科技发展有限公司）；4℃低温离心机（Cerrtrifuge5810R）；恒温培养箱（EYEL4SLI-700，上海爱朗仪器有限公司）；MultiskanFC型酶标仪（赛默飞世尔（上海）仪器有限公司）。
2、方法
2.1分组及给药[4]
将36只幼年大鼠随机分为6组：对照组、模型组、醋酸地塞米松（1mg/kg，阳性药）组和小儿治哮灵片低、中、高剂量（0.32、0.64、1.28g/kg）组，每组6只。自造模第8天开始ig给药，给药体积10mL/kg，对照组和模型组给予等体积蒸馏水，给药至造模第3周。
2.2哮喘模型的制备[5,6]
除对照组外，大鼠适应性饲养1周后开始造模，于第1天ip1mL10%OVA溶液（含100mgOVA）致敏，在第4、7天再次ip10%OVA溶液1mL，以加强致敏；第8天开始将大鼠置于自制的雾化箱给予5%OVA溶液雾化激发，每天1次，每次30min，共激发3周。对照组致敏时ip相同剂量生理盐水，激发时则采用相同剂量蒸馏水雾化激发。
2.3行为学评价
将5%OVA溶液放入雾化器内，打开雾化器开关，同时开始计时，记录各组大鼠引喘潜伏期。参照文献建立评分标准[7,8,9]:(1)无明显呼吸急促，0分；呼吸频率加快，未见鼻翼扇动，腹式呼吸，0.5分。(2)呼吸困难（鼻翼扇动、腹式呼吸），1.0分；呼吸困难伴轻咳，1.5分。(3)呼吸困难，并出现咳嗽、哮鸣（少于3次/min),2.0分；呼吸困难、频繁咳嗽（大于3次/min),2.5分。(4)张口呼吸，或深长呼吸，呼吸暂停伴眼、耳、唇紫绀，3.0分；站立不稳，3.5分。(5)休克、跌倒不起、猝死，4.0分。
2.4血清的采集
第28天最后1次雾化后，ip3%戊巴比妥钠（40mg/kg）进行麻醉。去除下腹部皮毛，剪开皮肤，用棉花分离暴露血管，左手用镊子夹住近心端血管，右手持5mL1次性注射器插入腹主动脉取血（如果抽吸过程中，抽动困难，转动注射器使空气进入可继续抽动），放入5mL离心管中，3500r/min离心10min，取上清液分装冻存于-20℃冰箱，待用[10]。
2.5肺泡灌洗液的采集及肺脏指数的检测
去除颈部皮毛，剪开皮肤，钝性分离气管（注意避开颈部血管），于接近头端的气管剪一切口，左手大拇指压住头部，食指压住胸部，剩余3指从下拖住颈部。右手持带有灌胃针的2.5mL注射器，缓慢注入PBS缓冲液1mL，静置10s后，轻轻按压胸部，将缓冲液回抽，置于5mL离心管中，重复操作6次（回收率大于80%），肺泡灌洗液以3500r/min离心10min，取上清液分装冻存于-20℃冰箱，待用[11]。取大鼠肺脏，称质量，计算肺脏指数。
2.6酶联免疫吸附法检测
酶联免疫吸附法检测血清中IL-4、IL-5、IL-6、IgE、IFN-γ、NF-κB水平以及肺泡灌洗液中IFN-γ水平。以上检测操作均严格按照酶联免疫试剂盒说明书进行。
2.7统计学方法
应用SPSS20.0统计软件对数据进行分析，计量资料以±s表示，比较采用t检验。
3、结果
3.1小儿治哮灵片对大鼠哮喘行为的影响
造模后，与对照组比较，模型组大鼠哮喘行为评分均显著升高（P<0.01）；给药后，与模型组比较，阳性药和小儿治哮灵片高、中、低剂量组引喘潜伏期显著延长，哮喘行为评分显著下降（P<0.05、0.01）。结果见表1。
表1小儿治哮灵片对大鼠哮喘行为的影响
3.2小儿治哮灵片对大鼠肺脏指数的影响
与对照组比较，模型组大鼠肺脏指数显著升高（P<0.05）；与模型组比较，阳性药和小儿治哮灵片高、中、低剂量组肺脏器指数显著下降（P<0.05）。提示小儿治哮灵片能够改善OVA造成的哮喘模型大鼠气道炎症引发的肺部炎症反应，缓解肺损伤的作用。结果见表2。
表2小儿治哮灵片对大鼠肺脏器指数的影响
3.3小儿治哮灵片对大鼠血清和肺泡灌洗液中炎性因子水平的影响
与对照组比较，模型组血清中IL-4、IL-5、IL-6、IgE、IFN-γ、NF-κB的水平均显著升高（P<0.01），血清和灌洗液中IFN-γ水平显著降低（P<0.01）；与模型组比较，阳性药和小儿治哮灵片高、中、低剂量组血清中IL-4、IL-5、IL-6、IgE、NF-κB的水平均显著降低（P<0.01），血清和灌洗液中IFN-γ水平均显著升高（P<0.01）。结果见表3和4。
4、讨论
儿童哮喘已成为儿童三大慢性疾病之一，儿童患者因年龄较小，脾肾不足，难以生成和运化水津；肺脏娇弱，肺之宗气不足难以通调水道以散布水津。水津运化失常，于肺中内湿为痰。痰浊反作用影响肺的宣发肃降，宗气难以走息道以司呼吸，气促发为哮喘，哮喘治疗当以祛痰、散寒、温肺3步入手。难根治、易复发的哮喘特点严重影响了儿童的身心健康发展。如果治疗不及时，易成为伴随一生的疾病。小儿治哮灵片具有燥湿以祛内因之痰、解表以散外因之寒、温肺以助肺之宗气的作用，适用于小儿哮、咳、喘等症的治疗[12,13,14]。
表3小儿治哮灵片对大鼠血清中炎性因子的影响
表4小儿治哮灵片对大鼠肺泡灌洗液中IFN-γ的影响
现代医学认为哮喘的发病机制为辅助性T淋巴细胞1(Th1）功能不足，机体出现以辅助性T淋巴细胞2(Th2）占主导的Th1/Th2失衡，产生大量的IL-4、IL-5、IL-6，并进一步促进IgE的活化和聚集，IgE大量增加后通过与效应细胞相应受体结合后，刺激效应细胞产生能使支气管平滑肌收缩的白三烯等炎症介素，最终诱发以气道炎症和气道高反应性为特征的哮喘。Th1细胞主要分泌IFN-γ等细胞因子，哮喘患者体内IgE合成过多的主要原因是IFN-γ分泌减少，其中IFN-γ具有加强宿主防御和参与免疫调节的作用。IFN-γ是IgE的负调节因子，能抑制由IgE引起的炎症反应，在机体中作为保护因子。而哮喘患者IFN-γ分泌减少的主要原因则是由NF-κB信号通路过度激活引起，外部刺激使无活性状态的NF-κB从细胞质中进入细胞核活化，促进基因转录，从而增加下游炎性细胞因子水平，加速了哮喘发生与发展[10,15,16,17,18]。本实验采用IL-4、IL-5、IL-6、IgE、IFN-γ、NF-κB作为检测指，以探讨小儿治哮灵片对幼年大鼠哮喘模型的干预机制。实验结果表明，哮喘大鼠模型血清中IL-4、IL-5、IL-6、IgE、NF-κB较对照组显著增高，血清和肺泡灌洗液中IFN-γ较对照组显著降低。提示血清中IL-4、IL-5、IL-6、IgE、IFN-γ、NF-κB以及肺泡灌洗液中IFN-γ与OVA诱导的哮喘大鼠密切相关。大鼠哮喘模型的发作机制可能是OVA诱导NF-κB信号通路激活，导致下游炎性细胞因子过度分泌，IgE合成增加，从而引起炎症级联反应。经过小儿治哮灵片干预后，各给药组的IL-4、IL-5、IL-6、IgE、NF-κB水平较模型组均显著降低，IFN-γ较模型组均显著升高。结果表明，小儿治哮灵片干预后能够改善哮喘症状，其作用机制可能为抑制哮喘大鼠肺组织中NF-κB活化通路，调节下游炎性细胞因子水平的分泌，还原Th1/Th2正常比值，进而降低炎性反应的进程，从而起到治疗哮喘的作用[19,20,21]。
小儿治哮灵对幼年大鼠哮喘模型具有较好治疗作用。儿童哮喘作为儿科的主要慢性疾病之一，严重影响了儿童的健康成长。而中医药治疗儿童哮喘具有很好的疗效，本实验为儿童患者用药安全提供了理论依据，同时为防止儿童哮喘提供了新的思路。
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咳嗽变异性哮喘(coughvariantasthma,CVA)是一种特殊类型的哮喘,其主要临床表现为刺激性干咳,尤其在夜间及凌晨多发,而无明显喘息､气促等症状或体征[1⁃2]｡由于该疾病症状不典型,极易造成误诊或漏诊,导致无法得到对症治疗,伴随病情发展,可演变为典型哮喘,严重影响患者生活质量[3]｡
2025-09-03
支气管哮喘极容易引起机体发生气道高反应性,从而出现多变的､广泛的可逆性气流受限症状,造成胸闷､咳嗽､喘息和气急等症状的反复发作,患者的症状常在凌晨发作或夜间发作,给身心健康造成较大的负面影响[1-2]｡因此,必须及时对支气管哮喘患者进行有效的治疗护理｡
2025-09-02
相关领域研究显示,烟曲霉致敏性哮喘患者病情进一步发展,最终成为变态反应性支气管肺曲霉病(ABPA)的可能性较大,属于变应性支气管肺曲霉病的前期阶段病变[1]｡因此,对于烟曲霉致敏性哮喘,在早期阶段,实施准确诊断和有效治疗,对于ABPA的预防,具有积极意义[2]｡
2025-09-02
支气管哮喘是常见的呼吸道慢性炎症疾病,严重时可威胁生命[1]｡全球约3亿人患此病,每年约45万人死亡,经济损失超过500亿美元[2],在中国成年人患病人数超过4000万[3]｡该病的发生与多种因素相关,肺炎支原体(mycoplasmapneumonia,MP)感染是重要诱因[4]｡研究表明,支气管哮喘合并MP感染会加重哮喘病情､促进复发[5]｡
2025-08-26
传统护理模式往往侧重于症状缓解与药物治疗的辅助,而忽视了患儿个体差异及心理社会因素的综合影响｡而分层护理作为一种新型护理模式,能依据患儿病情严重程度､年龄､心态等,制定个性化方案｡该模式不仅关注患儿身体状况,还注重其心理调适､家庭支持及社会适应能力的全面提升｡
2025-08-15
咳嗽变异性哮喘(coughvariantasthma,CVA)是哮喘的一种特殊类型,以慢性咳嗽为主要或唯一症状,通常不伴有典型的喘息或呼吸困难[1]｡根据其临床特征,将咳嗽变异性哮喘归于中医咳嗽､哮病或者风咳之范畴｡2023年10月至2024年11月,笔者采用痉咳静片治疗成人咳嗽变异性哮喘,现报道如下｡
2025-07-17
现代医学对哮喘急性发作的治疗用药主要有支气管舒张剂､糖皮质激素､茶碱类平喘药物等,辅以中药治疗的中西医结合模式不但可缩短发作期的病程,还可加快伴随症状的缓解,减少西药用药剂量和时间,减少其副作用[5]｡寒邪侵袭是导致儿童哮喘发病的重要病因[6],支气管哮喘急性发作期以冷哮证最多见[7]｡
2025-07-08
支气管哮喘是呼吸内科的常见疾病,其发病主要受到环境､免疫､遗传等因素的影响[1]｡该疾病以气道慢性炎症为主要的病理特征,疾病发作时会引起咳嗽､咳痰､喘息等症状,严重时可导致呼吸困难,引起缺氧,危及患者生命安全[2]｡此外,呼吸道长期炎症病变还可能导致气道变异反应,最终对肺功能造成不可逆损害｡
2025-06-27
当前对难治性哮喘常采用支气管热成形术进行救治,该治疗技术是将体外射频控制器产生的能量通过导管电极传递到气管壁,转换为热能,作用于支气管平滑肌[2],明显减少支气管平滑肌细胞,对于缓解气道痉挛以及炎症效果显著｡
2025-06-23
对于此类患儿而言,其病情反复发作,如未引起足够重视,则会存在较大的几率诱发支气管哮喘,对患儿的健康构成严重威胁[1,2]｡以往针对此类患儿主要通过予以其抗生素进行干预,但所取得的效果有限,且会出现耐药情况｡现阶段认为,小儿咳嗽变异性哮喘的发病与炎症细胞诱发的气道炎症存在密切联系,其中白三烯在此类疾病的发展过程中起到了重要作用,其直接参与疾病的进展｡
2025-06-20
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