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浅析黄连在中国药典中含量测定项下色谱条件的改进建议

2020-01-09 1208 上传者：管理员

摘要：目的:为了更好地了解中国药典中黄连含量测定项下色谱条件，提升其操作可行性。方法:采用C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（v/v,50:50）（每100ml中加入十二烷基硫酸钠0.4g，磷酸0.5ml）为流动相，流速1.0mL·min-1，检测波长345nm，进样量10μL。结果:通过对方法的改进可以准确控制流动相pH值，更简便，适合操作。在这色谱条件下，黄连药材中4种生物碱能得到更好地分离，其保留行为指标符合药典规则，可对于黄连药材的质量得以准确控制，为中国药典中黄连质量标准的修订提供科学依据。

关键词：
生物碱
药典
质量标准
黄连
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黄连为毛茛科植物黄连.、三角叶黄连或云连.的干燥根茎,以上三种分别习称味连、雅连、云连,其中味连是商品黄连的主要来源。味连中主要活性成分为小檗碱、黄连碱、表小檗碱、巴马汀等原小檗碱型生物碱类成分。2010年版中国药典(一部)采用高效液相色谱法并结合一测多评法[1-3]对上述4种生物碱成分进行含量测定以控制黄连质量。实验过程中发现中国药典该方法存在不足,流动相中磷酸加入量不明确,pH值调节方法不具体[4]。本文明确了流动相pH值的调节方法,发现加入确定量的磷酸,方法易于操作,简便、重复性好,并应用于黄连样品的测定,结果完全符合中国药典对4种生物碱相对保留时间的规定,优化后的方法可操作性强、重复性好,可有效控制黄连药材的质量。

1、实验方法和结果

1.1 仪器、试剂和药品

SHIMADZU高效液相色谱仪(LC-10AT泵,LC-10紫外检测器)(日本),N2000色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所)。黄连(味连.)购自山东建联中药店,经本校魏英勤副教授鉴定。盐酸小檗碱(批号110713-201212)、盐酸巴马汀(110732-200005)均购自中国药品生物制品鉴定所。试剂:乙腈、甲醇为色谱纯,磷酸(南京化学试剂有限公司)为分析纯,实验用水均为超纯水,由实验室自制。

1.2 色谱条件

乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(v/v,50:50)(每100ml中加入十二烷基硫酸钠0.4g,再加磷酸0.5ml)为流动相,流速为1.0mL·min-1,检测波长为345nm,进样量10μL。

2、实验方法与结果

2.1 样品溶液的制备

对照品溶液的制备。取盐酸小檗碱对照品适量,精密称定,置10ml量瓶中,加甲醇溶解制成90μgml-1的溶液,摇匀,即得。供试品溶液的制备取黄连药材粉末(过二号筛)约0.2g各2份,精密称定,分别置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇-盐酸(100:1)的混合溶液50ml,密塞,称定重量,超声处理(功率250W,频率40kHz)30min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液2ml,置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

2.2 待测成分峰含量测定

取黄连药材粉末,照2.1项下操作制备供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul,注入液相色谱仪,测定。结果表明,该色谱条件下黄连药材4种生物碱能达到基线分离,色谱图（见图1黄连药材的HPLC色谱图）。用待测成分色谱峰与盐酸小檗碱色谱峰的保留时间之比确定相对保留时间,并结合标准加入法及色谱峰相对保留时间确定色谱峰的归属。4种生物碱的保留行为（见表1黄连药材4种生物碱的保留行为）,小檗碱、表小檗碱、黄连碱和巴马汀的相对保留时间平均值分别为0.71、0.77、0.92、1.00,RSD%<0.2,符合药典规定。以盐酸小檗碱的峰面积作对照,采用外标一点法结合一次多评法定量,分别计算小檗碱、表小檗碱、黄连碱和巴马汀的含量,测定结果（见表2黄连药材4种生物碱含量测定结果(n=2)）,可见4种生物碱含量均符合药典规定。

3、讨论

流动相pH值对黄连中生物碱成分的色谱保留行为有重要影响,曾采用乙腈-水溶液(48:52,每1L含磷酸二氢钾3.4g,十二烷基硫酸钠1.7g)作为流动相,色谱峰形亦不尽理想[5]。实验中发现加入磷酸能显著改善峰形,缩短保留时间,改善分离度。2010版中国药典流动相系以磷酸调节pH值为4.0,磷酸加入量没有明确注明,本文明确了色谱流动相中磷酸加入量,该色谱条件下,黄连药材中4种生物碱能得到良好的分离,4种生物碱的保留行为指标符合药典规定,适于黄连药材中4种生物碱测定。因此建议药典修订时明确色谱流动相中磷酸的加入量。

参考文献：

[1]何国强,易军,张功臣.制药用水系统[M].北京:化学工业出版社, 2012.

[2]钱应璞.制药用水系统设计与实践[M].北京:化学工业出版社, 2001.

[3]医药工艺用水系统设计规范GB50913[S].北京:中国计划出版社, 2013.

吕茂翠.中国药典中黄连含量测定项下色谱条件的改进建议[J].科学技术创新,2019,(27):42-43.