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研究分析复方盐酸二甲双胍/沙格列汀渗透泵控释片的含量测定情况

2020-07-20 491 上传者：管理员

摘要：目的分析高效液相色谱法(HPLC)对复方盐酸二甲双胍(MH)/沙格列汀(SG)渗透泵控释片的有关含量测定结果。方法以UItimateXB-CN作为色谱柱，将0.01mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈(15:85)作为流动相，以208nm作为检测波长，流速设置为1.0mL/min，维持30℃的柱温，进样量为20μL。结果 MH与SG分别在50.0～150.0μg/mL、0.5～1.5μg/mL的浓度范围内与峰面积存在良好的线性关系(r=0.999 8、0.999 2)。MH平均回收率99.5%,RSD为0.57%,SG平均回收率100.2%,RSD为1.19%。生产批号为20150711、20150803、20150806的MH/SG渗透泵片中MH、SG标示含量分别为99.2%、97.1%,99.3%、98.5%,98.7%、97.4%。结论采用HPLC法应用于复方MH/SG渗透泵控释片的有关含量测定中价值较高，结果准确可信，可作为复方MH/SG渗透泵控释片的质量控制有效手段之一。

关键词：
含量
沙格列汀
渗透泵控释片
盐酸二甲双胍
高效液相色谱法
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盐酸二甲双胍(metformin hydrochloride,MH)作为降糖药物之一，主要是通过刺激糖类的无氧酵解，同时提高有关外周组织针对葡萄糖进行的利用，进一步达到降低血糖的作用，属于2型糖尿病患者得救出用药。而沙格列汀(saxagliptin,SG)是一类二肽基肽酶-4(DPP-4)的重要抑制剂，主要作用机制在于抑制内源性的GLP-1发生快速降解，改善活性GLP-1水平，进一步改善胰岛功能障碍[1]。上述两药的作用机制具有互补特点，可发挥协同增效的作用。复方MH/SG渗透泵控释片是近年来所研发的新型降糖药物，其有效成分包括MH与SG[2]。本文通过分析高效液相色谱法(HPLC)对复方MH/SG渗透泵控释片的含量测定结果，旨在为该渗透泵控释片的质控提供有效手段，现作以下报道。

1、仪器和药品

仪器：(1)Agilent HP1220型高效液相色谱仪(购自美国的安捷伦公司)。(2)BY-300A型包衣机以及相关的恒温控制器(购自上海的黄海药检仪器公司)。(3)DP120单冲压片机(购自湖南衡阳的药械设备厂)。(4)BT25S型超微量的电子天平(购自北京的赛多利斯公司)。(5)SDK-I-02渗透泵控释片型激光打孔机(购自天津的仪表研究所)。

药品：(1)MH(购自山东的科源制药公司，纯度为99.5%，生产批号为P030-1411030)。(2)相应对照品(购自我国的食品药品鉴定研究院，纯度为100.0%，生产批号为100664-200602)。(3)聚维酮K90(购自美国亚什兰公司，生产批号为03200290606)。(4)氯化钠(购自江苏的勤奋药业公司，生产批号为20100322)。(5)SG(购自湖北的康宝泰公司，纯度为99.7%，生产批号为LSAX14091)。(6)微晶纤维素(购自日本的旭化成公司，生产批号为K132)。(7)95%乙醇(由湖南九典制药有限提供，生产批号为F12101004)。(8)丙酮(购自天津的富宇公司，生产批号为120221)。其中色谱纯是乙腈和磷酸，二者和试剂均是分析纯，水乃纯化水。MH/SG渗透泵片的比例为500mg:5mg，批号分别是20150713和20150803，以及20150806。

2、方法和结果

2.1色谱条件及系统适应性

以UItimateXB-CN作为色谱柱，将0.01mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈(15:85)作为流动相，以208nm作为检测波长，流速设置为1.0mL/min，维持30℃的柱温，进样量为20μL。于上述色谱的条件之下，有关理论搭板数依照MH峰计算≥7 000，而MH及SG的分离度是16.69，已实现完全分离。

2.2溶液制备

(1)混合对照品相关溶液的制备：制备MH及SG浓度分别为0.5mg/mL、0.005mg/mL的混合储备液。随后量取2.0mL的储备液，置入10mL的两瓶内，采用磷酸二氢钾进行稀释，混匀，既得MH和SG浓度分别是100μg/mL、1.0μg/mL的混合对照品溶液。

2.3线性关系考察

分别取1.0,1.5,2.0,2.5,3.0的混合储备液置入10mL两瓶内，以磷酸盐缓冲液进行稀释，混匀，制备成含有50.0,75.0,100.0,125.0,150.0μg/mL浓度的MH标准溶液，含有0.5,0.75,1.0,1.25,1.50μg/mL浓度的SG标准溶液。根据上述条件实施测定，做好色谱图的记录。将浓度C作横坐标，并以峰面积A作纵坐标，完成标准曲线的绘制，并完成线性回归。最终获得AMH=61.891C+41.179(r=0.999 8)。ASG=22.398C-0.279(r=0.999 2)。表明了MH与SG分别在50.0～150.0μg/mL、0.5～1.5μg/mL的浓度范围内与峰面积存在良好的线性关系，见图1、2。

图1 MH的线性关系图

图2 SG的线性关系图

2.4精密度试验

取2.0mL的混合储备液，置入10mL两瓶内，以磷酸盐缓冲液稀释、混匀，获取MH(浓度为100μg/mL)及SG(浓度为1.0μg/mL)混合对照品溶液，按上述的色谱条件给予5次重复进样，所得RSD分别为0.30%以及1.18%。

2.5重复性试验

选取MH/SG渗透泵片共20片，根据上述2.2的方式进行操作，精密称取6分样品适量，进样20μL测定高峰面积。再取2.2混合对照品溶液按照上述方式测定，根据外标法实施计算，样品中MH的平均标示量是99.3%,RSD为0.75%,SG平均标示量为97.5%,RSD为1.39%。

2.6稳定性试验

取2.2所制备的对照品溶液以及供试品溶液，于上述色谱条件下，分别在0,4,8,12,24h时进样，对各峰面积进行记录，结果显示对照品溶液中MH和SG的RSD为0.22%、1.13%。而供试品溶液中上述两者的RSD分别为0.73%、1.22%。

2.7回收率试验

选取适量MH对照品与SG，根据处方比例添入空白辅料，完成供试品的制备，其中主药含量是80%,100%,120%，上述各浓度均配置3份，根据上述色谱条件进样。并选用2.2混合对照品溶液，以相同的方式测定记为对照，完成回收率的计算。结果显示MH的平均回收率是99.5%,RSD为0.57%,SG平均回收率100.2%,RSD为1.19%。

2.8样品含量检测

根据2.2的方式制备供试品溶液，进样20μL计算峰面积。取混合储备液2.0mL，置入10mL量瓶内，以磷酸二氢钾进行稀释，混匀，既得MH(浓度为100μg/mL)及SG(浓度为1.0μg/mL)混合对照品溶液，以相同的方式进行测定。按外标法经峰面积统计MH和SG含量，见表1。

表1 MH/SG渗透泵片含量检测结果(n=3)

3、讨论

2010年，由阿斯利康公司与百时美施贵宝公司合作研发的MH和SG复方缓释片开始于美国上市，其同时具备MH以及SG的降糖机制，因此相较于单药治疗而言可更有效控制血糖水平，降低低血糖风险，且不会增加患者体质量，具有较高的临床应用价值。然而，国内关于MH/SG渗透泵控释片的研究较为少见，具有较高的研究价值。本文所研究的为复方MH/SG渗透泵控释片，相较于其它剂型而言，存在下述几点优势：(1)可最大程度避免血药浓度的波动，减少毒副反应的发生；(2)技术含量较高，开发周期较短，有利于产业化；(3)在一定时间内可通过相对稳定的速率进行药物的释放，且不会受到胃肠蠕动以及pH值等生理因素的影响；(4)可明显减少患者的服药次数，具有较高的有效性、安全性。

本文在进行复方MH/SG渗透泵控释片质量标准建立过程中发现，临床上传统的C18柱难以有效分离上述两种有效成分，为了保证质量控制的更有效进行，拟用HPLC法对复方MH/SG渗透泵控释片中的两种有效成分含量进行同时检测。且在结果中发现：MH与SG分别在50.0～150.0μg/mL、0.5～1.5μg/mL的浓度范围内与峰面积存在良好的线性关系(r=0.999 8、0.999 2)。MH平均回收率99.5%,RSD为0.57%,SG平均回收率100.2%,RSD为1.19%。这充分说明了将HPLC法应用在复方MH/SG渗透泵控释片的含量检测中的可行性较高，具有结果可靠、操作简便以及可对实施质量控制的优势[3]。此外，本文发现，甲醇可对SG峰型产生一定影响，可能干扰测定结果。而水作溶剂具有稳定性较差等缺陷。而0.01mol/L磷酸二氢钾用作溶剂，虽与流动性制备的样品溶液较为稳定，且和测定要求相符，但以流动相用作溶剂操作的时间较长，加之需使用大量乙腈，不具备经济环保的重要理念。因此，最后决定采用0.01mol/L磷酸二氢钾作为溶剂，且由含量测定分析的方法实施验证，获得的样品溶液较为稳定，峰型及分离度均较好，应用价值较高[4,5,6]。

综上所述，HPLC法能够同时测定复方MH/SG渗透泵控释片中MH以及SG的含量，具有操作简便、结果可靠的优势。

参考文献：

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[2]陆菊明.沙格列汀和二甲双胍缓释片治疗2型糖尿病的研究进展[J].中国糖尿病杂志,2017,25(1):91-94.

[3]谭栀恩,曾佩琴,陀海燕,等.星点设计-效应面法优化复方二甲双胍缓释片的制备工艺[J].中国新药杂志,2019,28(12):1490-1499.

[4]何佩芳,张红,刘辉,等.HPLC法同时测定复方盐酸二甲双胍/沙格列汀渗透泵控释片的含量[J].中国药师,2016,19(1):25-28.

[5]颜文盛.玉泉颗粒联合沙格列汀和二甲双胍治疗2型糖尿病的临床研究[J].现代药物与临床,2017,32(1):76-79.

[6]陆菊明.沙格列汀和二甲双胍缓释片治疗2型糖尿病的研究进展[J].中国糖尿病杂志,2017,25(1):91-94.

张圣杰.复方盐酸二甲双胍/沙格列汀渗透泵控释片的含量测定结果分析[J].临床研究,2020,28(07):17-19.