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HPLC法测定活力苏口服液中的成分研究

2020-10-28 442 上传者：管理员

摘要：目的建立高效液相色谱法同时测定活力苏口服液中迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、淫羊藿苷、宝藿苷I、二苯乙烯苷和虎杖苷。方法采用AgilentEclipseXDB-C18色谱柱（250mm×4.6mm,5μm），流动相为乙腈–0.1%磷酸溶液，梯度洗脱，检测波长280nm，体积流量1.0mL/min，柱温30℃，进样量10μL。结果迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、淫羊藿苷、宝藿苷I、二苯乙烯苷和虎杖苷分别在0.59～14.75、0.81～20.25、5.07～126.75、1.86～46.50、1.18～29.50、8.79～219.75、2.07～51.75μg/mL线性关系良好（r≥0.9991）；各成分平均加样回收率分别为96.95%、97.80%、99.43%、98.53%、99.19%、100.01%、98.77%,RSD值分别为1.13%、1.28%、0.91%、0.88%、0.97%、0.62%、1.33%。结论所建立的方法操作便捷，结果准确，为全面评价活力苏口服液的内在产品质量提供了科学依据。

关键词：
活力苏口服液
紫草酸
药学
药师
迷迭香酸
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活力苏口服液由丹参、淫羊藿、制何首乌、黄精、黄芪和枸杞子6味中药加工而成，具有益气补血、滋养肝肾的功效，临床上主要用于年老体弱、精神萎靡、失眠健忘、眼花耳聋、脱发或头发早白等病症属气血不足、肝肾亏虚患者的治疗[1,2]。研究表明，活力苏口服液抗衰老[2]，可改善肝肾精血亏虚型神经衰弱[3]、治疗抑郁症[4]和斑秃[5,6]，还可用于顽固性失眠、中老年失眠[7,8,9]、脂溢性脱发[10]、老年糖尿病骨质疏松[11]。活力苏口服液现收载于《中国药典》2015年版一部，标准中仅对该制剂所含淫羊藿苷进行定量检测[1]，难以全面反映活力苏口服液的整体质量。本实验采用高效液相色谱法对活力苏口服液中主要成分迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、淫羊藿苷、宝藿苷I、二苯乙烯苷和虎杖苷进行同时检测，建立该制剂中多指标成分质量控制模式，有利于药品生产企业不断优化制剂生产过程控制参数，完善制剂生产所用原药材的质量控制，从源头上和生产过程中确保活力苏口服液产品质量和临床疗效的一致性，为进一步科学全面评价活力苏口服液的整体质量提供数据。

1、仪器与试药

Agilent1260型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；LC-20AT型高效液相色谱仪（日本Shimadzu公司）；ME36S型电子天平（德国Sartorius公司）。

丹酚酸B（批号111562-201917）、迷迭香酸（批号111871-201706）、淫羊藿苷（批号110737-201516）、宝藿苷I（批号111852-201603）、二苯乙烯苷（批号110844-201915）和虎杖苷（批号111575-201603）对照品均来源于中国食品药品检定研究院；紫草酸（批号PRF8060642）对照品来源于成都普瑞法科技开发有限公司；乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯；活力苏口服液购于成都地奥集团天府药业股份有限公司，规格10mL/支，批号191105、191207、191213。

2、方法与结果

2.1溶液制备

2.1.1对照品储备液的制备

精密称取迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、淫羊藿苷、宝藿苷I、二苯乙烯苷和虎杖苷对照品各适量，用75%甲醇溶液制成质量浓度分别为0.118、0.162、1.014、0.372、0.236、1.758、0.414mg/mL的混合对照品储备液。

2.1.2混合对照品溶液的制备

精密量取混合对照品储备液2.5mL，用75%甲醇溶液稀释至50mL，制成混合对照品溶液（含迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、淫羊藿苷、宝藿苷I、二苯乙烯苷和虎杖苷5.9、8.1、50.7、18.6、I11.8、87.9、20.7μg/mL）。

2.1.3供试品溶液和阴性样品溶液的制备

取活力苏口服液样品适量，精密量取0.6mL，置25mL量瓶中，用75%甲醇溶液稀释至刻度，即得。按活力苏口服液质量标准项下处方比例和工艺，分别制备缺丹参、缺淫羊藿、缺制何首乌的阴性样品，再按上述方法制成阴性样品溶液。

2.2色谱条件

AgilentEclipseXDB-C18色谱柱（250mm×4.6mm,5μm），流动相A为乙腈，B为0.1%磷酸溶液，梯度洗脱（0～10min,26%A;10～21min,26%→34%A;21～35min,34%→47%A;35～46min,47%→52%A;46～55min,52%→26%A），检测波长280nm[12,13,14,15,16]，体积流量1.0mL/min，柱温30℃，进样量10μL。

2.3方法学考察

2.3.1专属性试验

分别精密吸取各溶液各10μL，依法进样测定，结果7种目标成分迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、淫羊藿苷、宝藿苷I、二苯乙烯苷和虎杖苷峰形对称，分离度均>1.5，理论塔板数按各成分色谱峰计均≥4500，阴性样品对活力苏口服液中化合物的测定无干扰，色谱图见图1。

2.3.2线性关系考察

精密量取混合对照品储备液0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL，分别用75%甲醇溶液定容至20mL，制成系列质量浓度的混合对照品溶液，进样测定，记录峰面积。以峰面积与质量浓度进行回归，得回归方程，见表1。

2.3.3精密度试验

取混合对照品溶液，连续进样6次，测定峰面积，计算得迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、淫羊藿苷、宝藿苷I、二苯乙烯苷和虎杖苷峰面积的RSD值分别为1.05%、0.98%、0.72%、0.93%、0.76%、0.55%、0.89%。

2.3.4重复性试验

取批号191105活力苏口服液样品6份，制备供试品溶液，依法进样测定，记录迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、淫羊藿苷、宝藿苷I、二苯乙烯苷和虎杖苷的峰面积，计算7种成分的质量浓度，结果其RSD值分别为1.81%、1.74%、0.97%、1.39%、1.52%、0.93%、1.40%。

2.3.5稳定性试验

取批号191105活力苏口服液样品，制备供试品溶液，于0、3、6、12、18、24h依法进样，测定峰面积值，结果迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、淫羊藿苷、宝藿苷I、二苯乙烯苷和虎杖苷峰面积的RSD值分别为1.08%、1.01%、0.69%、0.88%、0.86%、0.57%、0.94%，表明活力苏口服液供试品溶液24h内稳定。

图1混合对照品（A）、活力苏口服液（B）、缺丹参阴性样品（C）、缺淫羊藿阴性样品（D）和缺制何首乌阴性样品（E）的HPLC色谱图

表17种成分回归方程和线性范围

2.3.6回收率试验

取批号191105活力苏口服液样品9份，每份精密量取0.3mL，分别精密加入混合对照品溶液（含迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、淫羊藿苷、宝藿苷I、二苯乙烯苷、虎杖苷0.043、0.057、0.389、0.131、0.083、0.648、0.139mg/mL)1.0、2.0、3.0mL各3份，制备供试品溶液，进行测定，计算得迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、淫羊藿苷、宝藿苷I、二苯乙烯苷和虎杖苷的平均加样回收率分别为96.95%、97.80%、99.43%、98.53%、99.19%、100.01%、98.77%,RSD值分别为1.13%、1.28%、0.91%、0.88%、0.97%、0.62%、1.33%。

2.4样品测定

取3批活力苏口服液样品，每批平行制备3份供试品溶液，依法进样测定迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、淫羊藿苷、宝藿苷I、二苯乙烯苷和虎杖苷的峰面积，采用外标法计算7种成分的质量浓度，结果见表2。

3、讨论

3.1检测指标的选择

活力苏口服液由丹参、淫羊藿、制何首乌、黄精、黄芪和枸杞子6味中药组成。方中制何首乌补肝肾、益精血、乌须发，为君药；淫羊藿补肾阳、强筋骨，助阳益精，为臣药；丹参活血凉血、清心除烦，黄精补气养阴、健脾益肾，枸杞子滋补肝肾、益精明目，黄芪补气升阳、生津养血，合为佐使药。全方共奏益气补血、滋养肝肾之功效。本实验选取制何首乌中活性成分二苯乙烯苷和虎杖苷，淫羊藿所含特征成分淫羊藿苷、宝藿苷I，丹参中活性成分迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B为检测指标，为更加全面地评价活力苏口服液整体质量提供参考。

表2活力苏口服液中迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、淫羊藿苷、宝藿苷I、二苯乙烯苷和虎杖苷的测定结果（n=3)

3.2色谱条件的优化

本实验在优化考察色谱条件时，参考相关文献首先采用乙腈–水为流动相进行梯度洗脱检测，结果部分色谱峰出现拖尾现象，造成待测目标成分分离不完全，影响测定结果。考虑加入酸类溶液加以改善，遂又对乙腈–0.1%磷酸[12,13,14]、乙腈–0.1%甲酸[17]和乙腈–0.1%冰醋酸[18,19]进行对比，最终以乙腈–0.1%磷酸溶液为流动相，进行梯度洗脱时，基线平稳，各目标成分分离度良好，峰形对称。

本实验采用高效液相色谱法对活力苏口服液中迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、淫羊藿苷、宝藿苷I、二苯乙烯苷和虎杖苷进行同时测定，建立了活力苏口服液中多指标成分质量评价模式，所建立的方法操作便捷，结果准确，为全面评价活力苏口服液的内在产品质量提供了科学依据。

参考文献：

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