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子宫内膜样腺癌组织中Twist的表达及其与雌激素受体α的关系研究

2020-08-06 116 上传者：管理员

摘要：目的:研究扭曲蛋白(Twist)、雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)在子宫内膜样腺癌、不典型子宫内膜增生、正常子宫内膜组织中的表达。方法:应用免疫组化检测90例子宫内膜样腺癌、40例不典型子宫内膜增生、20例正常子宫内膜组织中Twist、ERα的表达。结果:在子宫内膜样腺癌、不典型子宫内膜增生和正常子宫内膜组织中Twist、ERα阳性率分别为56.7%、42.5%、5%和53.3%、62.5%、90%。Twist在子宫内膜样腺癌和不典型子宫内膜增生中的表达均高于正常子宫内膜组,差异有统计学意义(P<0.05)。子宫内膜样腺癌中,Twist与组织学分级、肿瘤浸润深度和淋巴结转移相关,差异有统计学意义(P<0.05)。Twist和ERα呈负相关(r=-0.279,P=0.008)。结论:Twist高表达、ERα低表达及两者的负相关关系暗示了它们在子宫内膜样腺癌发生发展中的重要作用。

关键词：
Twist
侵袭
妇科肿瘤
子宫内膜样腺癌
转移
雌激素受体α
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子宫内膜癌通常被归类为雌激素依赖型(I型)和雌激素非依赖型(II型)[1]。子宫内膜组织对类固醇激素敏感。雌激素通过雌激素受体(estrogen receptors,ERs)促进子宫内膜细胞的发生和生长,孕酮通过孕酮受体(progesterone receptors,PRs)刺激子宫内膜细胞的分化,抑制细胞增殖。子宫内膜样腺癌(endometrioid adenocarcinoma)的特征是各种ER亚型(α和β)和PR亚型(A和B)的表达改变,从而改变子宫内膜细胞的增殖和分化[1,2]。Twist蛋白是上皮-间质转换(epithelial mesenchymal transition,EMT)过程中关键调节因子,早期研究认为在乳腺癌中ERs在调节参与EMT的转录因子起着重要的作用。Tan R等[3]认为在乳腺癌细胞株和组织中Twist表达异常增高和ER表达降低,两者可能参与了乳腺癌细胞的侵袭和转移。本研究探讨子宫内膜样腺癌的发生发展中雌激素受体α与Twist的表达情况及两者相关性,以观察它们在肿瘤发生中的作用。

1、资料和方法

1.1一般资料

收集广西壮族自治区民族医院病理科2015年1月至2019年6月已确诊存档蜡块子宫内膜癌组织85例和崇左市人民医院2015年1月至2019年6月已确诊存档蜡块子宫内膜癌组织20例、不典型子宫内膜增生40例,20例正常子宫内膜组织。正常子宫内膜、不典型子宫内膜增生均采用门诊刮宫标本,所有105例子宫内膜癌标本均为手术切除标本,患者年龄35～72岁,平均年龄(45±10.3)岁。纳入标准:①病理资料与临床资料完整;②接受了经腹或腹腔镜子宫切除术;③本研究方案经广西壮族自治区民族医院伦理委员会和崇左市人民医院伦理委员会批准,患者了解本次试验并签署知情同意书;④术前均未经过新辅助化疗和其他治疗;⑤采用2014年WHO乳腺和女性生殖系统病理学和遗传学分类标准重新分级,90例I型子宫内膜样腺癌;⑥根据国际妇产科联盟(FIGO,2014年)标准重新分期[4],临床分期I+II期71例,III+IV期19例。排除标准:①病理资料和临床资料不完整;②并发其他妇科恶性肿瘤者[5];③采用2003年WHO乳腺和女性生殖系统病理学和遗传学分类标准,15例II型子宫内膜癌(主要包括浆液性癌和透明细胞癌)。双盲阅片法,分别由两名副高职称医师阅片重新诊断。

1.2方法

1.2.1免疫组织化学方法

对10%中性缓冲福尔马林固定石蜡包埋的子宫内膜样腺癌90例、不典型子宫内膜增生40例、20例正常子宫内膜组织组织切片进行免疫组织化学染色。切片(厚3μm)在二甲苯中脱蜡,梯度乙醇水化,用过氧化物酶阻断试剂室温孵育10 min,PBS液冲洗三次,1 mol/L柠檬酸缓冲液高压修复,冷却后滴加兔多克隆Twist抗体(浓度1∶200)在4℃下孵育过夜。PBS液冲洗三次,去除多余PBS,加适当的二抗,在室温下孵育15 min,PBS冲洗三次,经DAB显色;雌激素受体α(ERα)染色方法按即用型试剂盒说明书步骤进行。显微镜下进行分析染色效果。设置阳性和阴性对照。兔抗人多克隆浓缩型Twist抗体购自美国Santa Cruz生物技术公司;雌激素受体α(ERα)即用型和其他试剂均购自福州迈新生物技术有限公司。

1.2.2结果判定

雌激素受体α(ERα)阳性信号定位于细胞核。当肿瘤细胞核染色≥1%中[6],ER染色为阳性,符合目前临床应用于乳腺癌的阳性率定义。

Twist蛋白阳性信号定位于细胞核,有少数病例在细胞浆和细胞核均可见棕黄色颗粒。本研究认为细胞核或细胞浆的棕色颗粒为阳性表达。采用免疫反应分布和强度积分法(IRS)法评估:IRS=阳性染色程度×阳性细胞百分比。随机选取10个高倍(10×40)视野,每个高倍视野观察100个细胞,按每个高倍视野阳性细胞数的百分比计数。阳性细胞百分比:0分,<5%;1分,5%～25%;2分,26%～50%;3分,51%～75%;4分,>75%。染色强度:浅黄,1分;黄色,2分;棕黄色,3分。IRS在0～12分之间,0为阴性(-),1～4分为弱阳性(+),5～8分为中等阳性(++),9～12分为强阳性(+++)。

1.3统计学方法

应用SPSS 19.0统计学软件进行分析,计数资料(%)采用χ2检验(当样本数量小于5时,用Fisher's精确检验),相关性检验采用Spearman,以P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1 Twist、ERα在子宫内膜样腺癌、不典型子宫内膜增生、正常子宫内膜组织中的表达

Twist在子宫内膜样腺癌、不典型子宫内膜增生和正常子宫内膜中的表达阳性率分别为56.7%[其中7例弱阳性(+)、19例中等阳性(++)、25例强阳性(+++)],42.5%[其中11例弱阳性(+)、6例中等阳性(++)]和5%[其中1例弱强阳(+)]。组间比较结果显示:Twist阳性率在子宫内膜样腺癌组与正常子宫内膜组比较中差异有统计学意义(χ2=17.525,P=0.000)。Twist阳性率在不典型子宫内膜增生与正常子宫内膜组比较中差异有统计学意义(χ2=8.929,P=0.003)。子宫内膜样腺癌和不典型子宫内膜增生组间Twist阳性率比较差异没有统计学意义(χ2=2.228,P=0.136)。

ERα在子宫内膜样腺癌、不典型子宫内膜增生和正常子宫内膜中的表达阳性率分别为53.3%[其中2例弱阳性(+)、14例中等阳性(++)、32例强阳性(+++)],62.5%[其中2例弱阳性(+)、5例中等阳性(++)、18例强阳性(+++)]和90%[其中6例中等阳性(++)、12例强阳性(+++)]。ERα在正常子宫内膜组织与子宫内膜癌、不典型子宫内膜增生组间比较差异有统计学意义(χ2=9.167,P=0.002;χ2=4.966,P=0.026),在不典型子宫内膜增生与子宫内膜癌的组间差异无统计学意义(χ2=0.945,P=0.331)。Twist和ERα在子宫内膜不同病变中的免疫组化表达见图1、2。

图1 Twist在不同子宫内膜组织中的表达

图2 ERα在不同子宫内膜组织中的表达

2.2 Twist与ERα在子宫内膜样腺癌、不典型子宫内膜增生、正常子宫内膜组织中的相关性

Twist、ERα在不典型子宫内膜增生(r=0.076,P=0.732)和正常子宫内膜组织(r=0.039,P=0.810)中无相关性。在子宫内膜样腺癌中的表达,经Spearman分析,两者呈负相关(r=-0.279,P=0.008)。

2.3子宫内膜样腺癌组织中Twist、ERα的表达与临床病理特征的关系

Twist、ERα与子宫内膜样腺癌组织学分级、肿瘤浸润深度和淋巴结转移相关,差异有统计学意义(P<0.05)。ERα与分期相关,差异有统计学意义(P<0.05),见表1。

3、讨论

子宫内膜样腺癌是一种激素调节的肿瘤,雌激素控制各种生理和疾病过程,特别是生殖和妇科肿瘤的发展[7]。早期研究[8]发现在大鼠体内自然发生子宫内膜癌少见,但是在一些大鼠中却可以发生子宫内膜癌,这是由于类固醇激素诱导细胞分化,肿瘤演化过程中,大多数激素依赖性肿瘤缺乏激素的反应性和依赖性,肿瘤细胞不受控制的增殖,且与肿瘤分化高低不相关。Guan J等[9]认为ER丢失对I-II级子宫内膜样腺癌早期患者的生存状况有很强的独立预测作用。本实验中,在90例子宫内膜样腺癌中,ERα的表达水平低于正常子宫内膜组织和不典型增生的子宫内膜,ERα阳性率为53.3%,与王晨等人[10]的研究结果相似。由此可见,从正常子宫内膜到不典型增生发展到癌,ERα表达逐步降低,提示了ERα表达的降低对子宫内膜样腺癌的发生有重要作用。

Twist是上皮-间质转换(EMT)中许多钙黏蛋白的抑制剂,在肿瘤转移过程中,破坏细胞间的黏附连接复合体对促进肿瘤向远处组织的侵袭至关重要。大量的研究证实Twist在多种肿瘤中高表达,使得肿瘤细胞钙黏蛋白的表达降低,促使肿瘤细胞侵袭和转移,而Twist的敲除可降低肿瘤细胞的转移和侵袭能力。在哺乳动物中[11],ER介导的基因组或非基因组信号转导对乳腺癌细胞的增殖和凋亡至关重要,ER通路的失调导致乳腺癌的发生。本研究中,Twist在子宫内膜样腺癌中高表达,与组织学分级、肿瘤浸润深度和淋巴结转移相关,差异有统计学意义,这一结果与Xie X等[12]的研究结果部分一致,造成个别不一致的原因可能与实验标本的地域差异、试剂不同有关。组织学分级、肿瘤浸润深度和淋巴结转移这三个因素与子宫内膜样腺癌不良预后有关,可以推测Twist可能是促进子宫内膜样腺癌侵袭和转移的早期因子。

表1子宫内膜样腺癌中Twist和ERα的表达与临床病理参数的关系

Twist作为一种肿瘤基因,在肿瘤细胞的凋亡、耐药、EMT、血管生成、肿瘤细胞侵袭和转移等方面发挥着作用。早期研究[13]证明乳腺癌中Twist能直接结合ER启动子中的E-box,并能显著降低ER启动子的体外活性;Twist能动员组蛋白脱乙酰基酶1(HDAC 1),HDAC 1通过ER启动子脱乙酰作用而抑制染色质结构形成,达到抑制ER。本实验中,从正常子宫内膜到子宫内膜不典型增生发展到癌ERα表达逐步降低,Twist表达逐步升高,Twist在子宫内膜不典型增生组和子宫内膜样腺癌组中表达均高于正常组织组,ERα在子宫内膜不典型增生组和子宫内膜样腺癌组中表达均低于正常组织组,差异均有统计学意义,提示Twist表达增高、ER表达降低可能是子宫内膜由正常向不典型性增生和由不典型增生向恶性肿瘤过渡的重要标志。

EMT是一个多步骤的过程,参与了生物细胞的发育,导致上皮细胞间黏附消失、间充质特性的获得和迁移表型的形成,并增强了对凋亡的抵抗力、影响肿瘤的进展和转移。ER丢失与磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K/mTOR)信号通路有关,可能使上皮细胞变得更像间充质细胞,让其具有更强的侵袭和抗凋亡能力。Wik E等[14]研究认为ERα阴性子宫内膜癌已被证明与EMT增加和E-cadherin表达降低有关,而Twist是EMT中E-cadherin的抑制剂,Twist高表达从而抑制E-cadherin,ERα低表达或缺失加速上皮细胞转换成间质细胞,促进EMT进程。本研究中,在子宫内膜样腺癌中,Twist高表达,ERα低表达,两者呈负相关关系。这一结果与Senol S等[15]人研究结果一致。说明Twist和ERα可能通过加速EMT过程参与子宫内膜样腺癌侵袭、转移的调控,暗示了两者在子宫内膜样腺癌早期发生发展中的重要作用。

综上所述,在子宫内膜癌的早期病变中,ERα低表达提示细胞有病变进展的可能;Twist高表达、ERα低表达通过EMT使早期病变细胞具有迁移和侵袭性;两者的负相关关系暗示了它们在子宫内膜样腺癌早期发生发展中的重要作用。但仍需要进一步的研究,包括分子遗传分析,以证实Twist和ERα在子宫内膜样腺癌中的早期作用。有助于从假定的低风险人群中识别出高风险患者,以便及时和有针对性地进行个性化治疗。

参考文献：

[10]王晨,孔为民.子宫内膜癌雌激素受体､孕激素受体及原癌蛋白表达状态与临床病例特征关系的研究[J].中国临床医生杂志,2017,45(7):97-100.

梁巧青,杜杨君,赵苑池,梁云彩,黄宏英,莫秋荣.Twist在子宫内膜样腺癌组织中的表达及其与雌激素受体α的关系[J].现代肿瘤医学,2020,28(17):3049-3053.

基金:广西壮族自治区卫健委科研课题(编号:Z20180611);崇左市卫健委科研课题(编号:崇科攻2019023)