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血清抑癌基因超甲基化检测对胃癌患者的临床价值研究

2020-08-24 318 上传者：管理员

摘要：目的:探讨胃癌患者血清中抑癌基因超甲基化检测的临床意义。方法:收集于2019年1月2019年12月在我院检测的高危胃癌患者78例进行研究，其中21例胃癌患者为A组，29例萎缩性胃炎为B组，28例健康者为对照组。分别检测各组的CDKN2A、CDH1、DAPK1抑癌基因的甲基化水平。以病理诊断作为金标准，比较血清中抑癌基因超甲基化的阳性率及诊断敏感性、特异性。结果:A组CDKN2A、CDH1、DAPK1基因启动子甲基化的阳性率明显高于B组和对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。联合检测的诊断灵敏度、特异性明显高于单独检测。结论:联合检测血清CDKN2A、CDH1、DAPK1抑癌基因甲基化水平对胃癌疾病诊断的灵敏度及特异性较高，可作为胃癌疾病评估的标志物。

关键词：
抑癌基因
标志物
疾病评估
胃癌
超甲基化
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胃癌是一种临床常见的消化系统肿瘤，早期胃癌可行根治性手术治疗，而晚期胃癌治疗后的预后较差，且生存率较低，因此应做好胃癌疾病的早期诊断和筛查，以改善患者的预后。血清抑癌基因甲基化在胃癌患者中是一个较普遍的情况，血清抑癌基因发生失活的主要原因为抑癌基因启动子超甲基化，最终形成癌症[1]。因此，血清抑癌基因甲基化检测可作为胃癌疾病早期诊断的依据。研究显示，血清抑癌基因甲基化与胃癌患者不同疾病严重程度密切相关，且是胃组织出现癌变前的早期事件[2]。细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2A(CDKN2A)的基因产物是一种肿瘤抑制因子，能够参与细胞周期调控，延缓肿瘤细胞的增殖[3]。上皮钙黏素基因(cadherin1,CDH1)是一种细胞粘附相关抑癌基因，该基因启动子的甲基化与多种肿瘤发生发展相关。死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因启动子甲基化和肿瘤的发生发展密切相关。鉴于此，本研究旨在探讨胃癌患者血清中CDKN2A、CDH1、DAPK1抑癌基因超甲基化检测的临床意义。

1、资料与方法

1.1基本资料

收集于2019年1月2019年12月在我院检测的高危胃癌患者78例进行研究，其中21例胃癌患者为A组，29例萎缩性胃炎为B组，28例健康者为对照组。A组中，男性14例，女性7例;最小年龄为32岁，最大年龄为75岁，平均年龄(50.52±8.15)岁。B组中，男性19例，女性10例;最小年龄为31岁，最大年龄为75岁，平均年龄(50.61±8.17)岁。对照组中，男性18例，女性10例;最小年龄为32岁，最大年龄为76岁，平均年龄(50.58±8.18)岁。本研究经医院伦理委员会批准并通过，且患者及其家属均签署了知情同意书。研究组与对照组的基本资料经比较后无显著差异(P>0.05)。

纳入标准:(1)年龄≥18周岁;(2)知情本研究者。排除标准:(1)出凝血异常者;(2)合并严重心肝肺等功能障碍者;(3)合并精神障碍者;(4)合并其他部位肿瘤者。

1.2方法

(1)取受试者清晨5mL空腹外周静脉血，置于离心管中进行离心，设置离心温度为4℃，设置转速为2500r/min，离心时间为10min，留取上层血清待测。

(2)DNA提取与测定方法:全基因组DNA提取需严格按照试剂盒的说明书进行，使用分光光度计测定DNA浓度。将提取的DNA置于-20℃条件下保存备用。

(3)基因组DNA的亚硫酸氢盐修饰:使用试剂盒对已经提取的DNA行亚硫酸氢盐修饰。得到基因组DNA中未出现甲基化的C转化为T，已经出现甲基化的C和其他碱基序列保持不变。

(4)血清CDKN2A、CDH1、DAPK1基因甲基化水平测定:将修饰过的DNA行qMSP扩增，扩增反应应于LightCycler480中进行。反应体系20μL，其中包括SYBRGreenIMaste10μL，修饰过的DNA1μL，双蒸水8μL，上游引物0.5μL，下游引物0.5μL。反应条件为:在95℃条件下进行预变性，时间为10min;再行45次循环，其中包括于95℃下进行变性，时间为20s;于58℃下进行退火，时间为20s;于72℃下进行延伸，时间为30s;经熔融曲线进行分析，于95℃下变性15s,60℃下退火1min;最后;在40℃下延伸，时间为10min。

1.3观察指标

比较各组血清中抑癌基因超甲基化的阳性率及联合检测与单独检测的敏感性、特异性。敏感性=真阳性例数/(真阳性例数+假阴性例数);特异性=真阴性例数/(真阴性例数+假阳性例数)。

1.4统计学分析

以SPSS20.0软件行数据分析，定性资料以[n(%)]形式显示，再行x2检验获得统计值;计量资料以(±s)形式显示，再行t检验获得统计值;P<0.05时为组间数据对比存在显著差异。

2、结果

2.1各组的血清CDKN2A、CDH1、DAPK1抑癌基因甲基化阳性率比较

A组血清CDKN2A、CDH1、DAPK1基因启动子超甲基化的阳性率分别为38.09%,23.81%,33.33%;B组血清CDKN2A、CDH1、DAPK1基因启动子超甲基化的阳性率分别为6.89%,10.34%,10.34%;对照组CDKN2A基因启动子甲基化的阳性率为3.57%。A组CDKN2A、CDH1、DAPK1基因启动子甲基化阳性率明显高于B组和对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1各组的血清CDKN2A、CDH1、DAPK1抑癌基因甲基化阳性率比较

2.2联合检测与单独检测的诊断性能比较

血清CDKN2A、CDH1、DAPK1单个基因启动子超甲基化对胃癌的诊断灵敏度为28.13%～40.62%;特异性为61.23%～70.21%。血清CDKN2A、CDH1、DAPK1联合检测的诊断灵敏度、特异性明显高于单独检测，见表2。

表2联合检测与单独检测的诊断性能比较

3、讨论

胃癌是一种常见的恶性肿瘤，发病率呈逐年升高的趋势，严重影响着人们的生命健康。目前，临床上对于胃癌疾病发生的机制尚不明确，但多项研究数据显示，胃癌疾病的发生会伴随着血清抑癌基因启动子超甲基化，且早于病理学改变[4]。

在多种肿瘤的发生发展中，血清抑癌基因超甲基化是一种早期频发事件，甲基化会使血清抑癌基因发生失活，且表达水平降低，与肿瘤的发生发展密切相关。抑癌基因甲基化及表达缺失可能是某些肿瘤的发生机制。研究显示，血清抑癌基因CDKN2A、CDH1、DAPK1等的超甲基化与胃癌疾病发生、发展有关，其在胃癌患者肿瘤组织内的阳性率更高，有助于对胃癌疾病进行判断[5]。CDKN2A基因可对肿瘤细胞生长产生抑制，促进肿瘤细胞凋亡及衰老。CDH1基因表达下降或缺失均可降低肿瘤细胞间的粘附能力，进而使肿瘤细胞更容易扩撒、转移。DAPK1基因表达下降能够使肿瘤细胞进行无限制的增殖，从而引发癌症。因此，本研究对胃癌患者血清中CDKN2A、CDH1、DAPK1抑癌基因超甲基化进行检测。

本次研究结果显示，A组的CDKN2A、CDH1、DAPK1基因启动子甲基化的阳性率明显高于B组和对照组(P<0.05);联合检测CDKN2A、CDH1、DAPK1基因的诊断灵敏度、特异性明显高于单独检测。结果说明:血清抑癌基因甲基化有助于判断胃癌患者病情严重程度。考虑原因可能为:(1)肿瘤相关基因突变可通过使肿瘤细胞出现凋亡释放或被释放至外周血，进而可在胃癌患者血清中检测出肿瘤相关的基因DNA[6]。(2)萎缩性胃炎患者血清中血清抑癌基因的检出率较低，考虑可能与抑癌基因超甲基化量较少有关[7]。(3)肿瘤细胞凋亡的速度较快，且由于肿瘤细胞可随着血液进入到血循环中，使血液中DNA释放量增多[8];而血清中抑癌基因甲基化的检测水平会受到肿瘤细胞DNA释放量的影响[9]。

综上所述，联合检测胃癌患者血清CDKN2A、CDH1、DAPK1基因启动子超甲基化的灵敏度及特异性较高，可作为胃癌疾病诊断的分子标志物，为胃癌疾病的早期诊治及预后评估提供了有力的依据。

参考文献：

[1]张丹杰,李少民,姜建涛,等.胃癌中PCDH8基因启动子甲基化状态及其临床意义[J].现代肿瘤医学,2018,249(15):110-114.

[2]贺娜,冯巩,钱美睿,等.血浆甲基化Septin9基因在胃癌患者中的表达和临床意义[J].中华消化杂志,2019,39(11):741-745.

[3]闫琦,张筠.血清8个抑癌基因启动子CpG岛甲基化的联合检测非小细胞肺癌及意义[J].中华肿瘤防治杂志,2018,25(S2):16-18.

[4]李颖,易默,何小勤.抑癌基因Reprimo启动子区甲基化在胃癌中表达及其临床意义[J].陕西医学杂志,2015,44(3):272-275.

[5]张良,周进学,肖腾,等.肝细胞癌患者血清中SOX1和VIM启动子的甲基化检测及其临床意义[J].癌症进展,2018,16(11):106-110.

[6]刘洁,彭微,龚宗跃,等.胃癌患者血清中RUNX3､P16基因甲基化检测与化疗疗效的关系[J].医学理论与实践,2019,32(08):18-20+27.

[7]周天宇.胃癌组织和外周血ctDNA抑癌基因RASSF1A,RUNX3启动子区DNA甲基化状态及其一致性分析[D].2019.

[8]张丹杰,李少民,姜建涛,等.胃癌中PCDH8基因启动子甲基化状态及其临床意义[J].现代肿瘤医学,2018,12(1):2417-2421.

[9]李慧,宫为大.TSC1在胃癌组织中的表达及其意义[J].泰山医学院学报,2018,039(001):59-60.

肖凤祥,杨南胜.胃癌患者血清中抑癌基因超甲基化检测的临床意义分析[J].黑龙江医药,2020,33(04):776-778.