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苍耳子油滴剂对鼻炎小鼠行为学症状及血清IL-5水平的影响

2024-03-01 16 上传者：管理员

摘要：目的观察中医验方苍耳子油滴剂对变应性鼻炎(AR)小鼠行为学症状和血清白细胞介素-5(IL-5)水平的影响。方法将SPF级BALB/c雄性小鼠32只，随机分为正常组、模型组、对照组、实验组，每组8只。除正常组外，其余三组采用卵清蛋白致敏法建立变应性鼻炎小鼠模型。造模成功后，实验组用苍耳子油滴剂滴鼻，对照组用盐酸西替利嗪滴剂滴鼻，其余两组用生理盐水滴鼻，疗程9 d。治疗结束后，对小鼠鼻部行为学症状进行评分，ELISA法检测血清炎症细胞因子IL-5水平。结果与模型组比较，对照组小鼠行为学评分略升高(P<0.05),实验组小鼠行为学评分降低(P<0.05),对照组、实验组小鼠血清IL-5水平均降低(P<0.01);与对照组比较，实验组小鼠行为学评分降低(P<0.05),血清IL-5水平亦降低(P>0.05)。结论苍耳子油滴剂可以改善变应性鼻炎小鼠的鼻部行为学症状，并降低其血清IL-5水平。

关键词：
AR
变应性鼻炎
白细胞介素-5
苍耳子油滴剂
行为学症状
过敏性鼻炎
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变应性鼻炎(allergic rhinitis, AR)又称过敏性鼻炎，是以阵发性喷嚏、清水样涕、鼻痒和鼻塞等症状为主的一种鼻黏膜非感染性炎性疾病。AR是耳鼻咽喉科的常见病、多发病，可发生于各年龄阶段，且不易根治。流行病学研究显示，AR的国际中位发病率为18.1%[1],呈逐年上升趋势[2]。AR对患者生活、工作和学习都有明显影响，特别是对睡眠、记忆和情绪方面。更重要的是，患者由AR发展为哮喘的危险性为正常人的3倍。合并有AR的哮喘患者其症状的发作或加剧常因AR导致，给患者带来更大的痛苦和经济负担。我国AR患者群体庞大，对准确诊治的要求也日益提高。中医药治疗本病历史悠久，且具有很好的临床疗效[3]。苍耳子油滴剂是民间广泛用于治疗AR的中医验方[4],但其作用机制尚不明确，值得进一步研究。本研究建立AR小鼠模型，初步探讨了苍耳子油滴剂治疗AR的作用机制，为其临床推广应用提供科学依据。

1、材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 动物及分组

SPF级BALB/c雄性小鼠32只，4周龄，体质量20 g左右。购于济南朋悦实验动物繁育有限公司[生产许可证号为SYXK(鲁)20180029]。采用随机数字表法随机分为正常组、模型组、对照组、实验组，每组8只。饲养于滨州医学院SPF级动物实验室。

1.1.2 药物及试剂

苍耳子油滴剂(民间验方，药物组成为苍耳子、辛夷花、鹅不食草、白芷、防风、薄荷、柴胡、甘草、芝麻油),盐酸西替利嗪滴剂(澳美制药厂生产，注册证号HC20181013),A5253卵清蛋白OVA(上海伊卡生物技术有限公司),4%氢氧化铝凝胶(陕西中晖赫彩生物医药科技有限公司),3%戊巴比妥钠，生理盐水，小鼠IL-5 ELISA试剂盒(上海易泽生物科技有限公司)等。

1.2 实验方法

1.2.1 模型制备

除正常组外，其余3组采用卵清蛋白致敏建模法构建AR模型[5],包括基础致敏和鼻腔激发2个步骤。基础致敏方法如下：50 μg OVA加入4% AL(OH)3 0.1 mL,溶于0.1 mL生理盐水，腹腔注射，隔日1次，共7次。鼻腔激发方法如下：5% OVA生理盐水滴鼻20 μL/侧，每日1次，连续7次。造模共计21 d。正常组均用生理盐水代替以上步骤。

1.2.2 模型评价

观察小鼠鼻部行为学症状(挠鼻、喷嚏次数)判断造模是否成功。末次鼻腔激发15 min后，用数码摄像机连续拍摄小鼠行为学症状1 min, 对小鼠挠鼻和打喷嚏进行计数评分，采用叠加法计算总分，总分>5分表示造模成功[6]。评分标准见表1。

表1 小鼠行为学评分标准

1.2.3 分组给药

建模成功后，实验组用苍耳子油滴剂滴鼻，对照组用盐酸西替利嗪滴剂滴鼻，模型组、正常组用生理盐水滴鼻。给药剂量根据小鼠体质量进行换算。换算公式为dB=dA×KB/KA(dB为小鼠每天每kg灌药量，单位为mL;dA为成人每天每kg用药量，单位为mL;成人体质量按70 kg计算，KA=0.11为常数；KB为小鼠体质量，单位为kg),每天给药1次，连续给药9 d。盐酸西替利嗪滴剂成人每天用量1 mL,苍耳子油滴剂是民间验方，实验期间也按照成人每天用量1 mL换算使用。根据小鼠体质量不同，小鼠每天用量大概在3 μL左右。

1.2.4 指标检测

给药结束后，选取宏观和微观指标进行观察。宏观检测为：末次给药15 min后，用数码摄像机拍摄小鼠行为学症状，对小鼠挠鼻、喷嚏次数进行计数评分，评分标准见表1。微观检测为：末次给药结束24 h后，用3%的戊巴比妥钠麻醉后，摘取小鼠眼球取血约3 mL,室温下静置后使用台式离心机10 000 rpm离心15 min, 取上层血清，运用ELISA法检测血清IL-5水平。

1.3 统计学方法

用SPSS 26.0软件对实验数据进行统计分析。定量资料采用t检验，组间比较采用方差分析，以表示。P<0.05表示差异有统计学意义，P<0.01表示差异有显著统计学意义。

2、结果

2.1 造模、治疗前后小鼠一般状态

实验过程中小鼠共死亡4只，治疗结束后正常组8只，模型组6只，实验组7只，对照组7只。正常组小鼠神志正常，反应敏捷，进食、活动均正常，毛发整齐顺滑、有光泽。模型组在造模第10天后开始出现精神状态较差、甚至萎靡不振，进食、活动均明显减少，毛发不顺滑、缺少光泽，容易出现挠鼻和打喷嚏行为。对照组造模期间症状同模型组，盐酸西替利嗪具有刺激性气味，给小鼠滴鼻时其挠鼻反应较明显。从滴鼻给药第3天起，部分小鼠挠鼻和打喷嚏行为开始减轻，精神状态好转，进食量、活动量有所增加，毛发较整齐但没有光泽。实验结束时，仍有小部分小鼠有挠鼻和打喷嚏行为。实验组造模期间症状同模型组，苍耳子油滴剂没有刺激性气味，给小鼠滴鼻时其更容易接受，从滴鼻给药第3天起，部分小鼠挠鼻和打喷嚏行为减轻明显，精神状态好转，进食量、活动量增加明显。实验结束时，小鼠基本没有挠鼻和打喷嚏行为。

2.2 治疗前后小鼠体质量变化的比较

治疗前组间比较，体质量变化差异均不具有统计学意义；治疗后组间比较，体质量变化差异亦均不具有统计学意义。治疗前后组内比较，实验组治疗后体质量较治疗前有所增长，且差异具有统计学意义(P<0.05),其余各组治疗前后体质量变化差异均不具有统计学意义。见表2。

表2 治疗前后小鼠体质量变化比较

2.3 造模后、治疗后小鼠行为学评分的比较

造模后，末次鼻腔激发15 min后，与正常组比较，模型组、对照组、实验组小鼠行为学评分均升高，其中对照组、实验组差异均具有显著统计学意义(P<0.01),说明造模成功。治疗后，末次给药15 min内，与模型组比较，实验组评分降低，但对照组评分略升高，差异均具有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较，实验组小鼠行为学评分降低，且差异具有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 造模后、治疗后小鼠行为学评分比较

2.4 治疗后小鼠血清IL-5水平的比较

治疗后，与正常组比较，模型组、对照组、实验组小鼠血清IL-5水平变化差异均具有统计学意义(P<0.05),其中模型组、对照组小鼠血清IL-5水平比较，差异具有显著统计学意义(P<0.01)。与模型组比较，对照组、实验组小鼠血清IL-5水平均降低，且差异均具有显著统计学意义(P<0.01)。与对照组比较，实验组小鼠血清IL-5水平降低，但差异不具有统计学意义。见表4。

表4 治疗后小鼠血清IL-5水平比较(pg/mL,

3、讨论

AR作为一种鼻黏膜慢性炎症，发病率高，发病机制复杂。AR 是一种由人体接触变应原引起的、特异性免疫球蛋白E(immunoglobin E, IgE)介导的Th2 类型鼻黏膜慢性非感染性炎症反应，临床表现为鼻痒、喷嚏、流涕和鼻塞等[7]。Th2细胞以分泌IL-5、IL-4等细胞因子为主要特征，可以活化B细胞，促进其分泌变应原特异性的IgE,Th2反应失调导致产生特异性的IgE是AR发病的关键环节[8]。AR患者的IL-5 mRNA表达及其蛋白表达明显升高，IL-5 mRNA表达与其甲基化程度呈负相关[9]。IL-5在AR患者血清中的表达水平可为AR的临床诊断与疗效判定提供免疫学基础[10],并有望成为判断患者治疗后症状改善的客观指标[11]。

中医一般称AR为鼻鼽、鼽嚏或鼻窒。鼽指鼻出清涕，嚏指鼻痒气喷作声，窒指鼻塞，或时轻时重，或双侧鼻窍交替堵塞，以上症状反复发作，经久不愈，甚至嗅觉失灵，形成AR。中医认为AR的病因包括内因和外因，风邪、寒邪、湿邪、热邪是主要外因，内因与患者的体质和经脉失调等情况相关。病机上除肺气虚寒、脾气虚弱、肾阳不足、热伏肺经外，还有毒邪致病理论、络病致病以及由痰致病等[12,13]。

苍耳子油滴剂来自民间验方，其药物组成有苍耳子、辛夷花、鹅不食草、白芷、防风、薄荷、柴胡、甘草、芝麻油，其中苍耳子是主要药物。苍耳子具有散风除湿、宣通鼻窍的功能，诸多临床研究表明以苍耳子为主药的方剂内服、外用治疗AR可以取得较好的疗效[14,15,16,17,18]。此外，苍耳子亦多与辛夷相须配伍治疗AR,且疗效显著[19]。苍耳子水提物及正丁醇部位能降低AR大鼠鼻部行为学症状积分，改善鼻黏膜病理变化，降低AR大鼠血清IL-5水平[20,21]。本研究发现，苍耳子油滴剂可以改善变应性鼻炎小鼠的鼻部行为学症状，并降低其血清IL-5水平。

本研究结果显示，实验组治疗后体质量较治疗前有所增长，且差异具有统计学意义(P<0.05)。苍耳子油滴剂药性温和，对小鼠的一般状态改善较明显，进食量增加较明显，所以体质量增长较明显。与模型组比较，对照组小鼠行为学评分略升高，实验组小鼠行为学评分降低，差异均具有统计学意义(P<0.05),实验组与对照组差异亦具有统计学意义(P<0.05)。这说明，苍耳子油滴剂可以明显改善小鼠的挠鼻、打喷嚏等行为学症状，效果优于盐酸西替利嗪滴剂。苍耳子油滴剂气味温和，而盐酸西替利嗪具有刺激性气味，可能对小鼠行为学评分产生影响。与模型组比较，对照组、实验组小鼠血清IL-5水平均降低，且差异均具有显著统计学意义(P<0.01);与对照组比较，实验组血清IL-5水平降低更为明显，两组差异虽不具有统计学意义，但也提示苍耳子油滴剂能降低小鼠血清IL-5水平。其治疗AR的作用机制是否与降低血清IL-5水平相关，还有待进一步研究证实。本研究是对中医验方苍耳子油滴剂治疗AR效果的初步探索，今后将继续深入研究，为其临床推广应用提供更有说服力的科学依据。

参考文献:

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