首页 >
论文范文 >
医药卫生论文 >
内科论文 >
白血病论文 >
METTL14在初诊急性髓系白血病患者中的表达及其临床意义
摘要：目的:通过检测RNA甲基转移酶样14(METTL14)在初诊急性髓系白血病(AML)患者骨髓中的表达水平，探讨METTL14表达在初诊AML患者中的临床与预后意义。方法:收集100例初诊AML患者骨髓标本作为AML组，60例缺铁性贫血(IDA)患者骨髓标本作为对照组，并收集AML患者的临床资料。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测METTL14在两组患者骨髓中的表达水平，并分析AML患者的METTL14表达水平高低与其临床病理特征及预后的关系。采用Kaplan-Meier曲线分析METTL14对AML患者总体生存时间(OS)的影响。通过Cox风险回归模型分析影响AML患者的预后因素。结果:与对照组相比，METTL14在AML患者中表达明显升高(P<0.05)。与低表达组比较，METTL14高表达组患者表现出高龄、高骨髓细胞数、疗效差及预后不良，差异具有统计学意义(P<0.05)。METTL14高表达组的OS较低表达组显著缩短(P<0.05)。METTL14高表达是影响AML预后的独立危险因素。结论:METTL14在AML患者中明显高表达，与较差的临床病理特征及不良预后相关，可作为判断AML患者预后的指标和潜在的治疗靶点。
加入收藏
急性髓系白血病(AML)是造血系统最常见的恶性肿瘤，其特点是高度异质的造血干细胞和前体细胞的恶性克隆增殖，约占成人急性白血病的70%[1,2]。虽然随着临床诊断和治疗方法的不断改进，AML的预后已得到明显改善，但仍有约70%的患者确诊后生存不超过5年[3]。因此，寻找与AML的发生、发展及预后相关的生物标志物对AML患者的治疗具有重要意义。文献报道，N6-甲基腺苷 (m6A)修饰在多种癌症的发展中发挥多种作用，并参与其发病机制[4,5,6],METTL14 是 m6A 的“编写者”,目前有关 METTL14 在白血病中的研究很少。研究表明，METTL14在正常造血干细胞/祖细胞 (HSPC) 和 AML中表达水平增高，下调METTL14的表达可以促进 HSPC 和 AML 细胞的分化[7]。因此，本研究选择了100例初诊AML患者作为AML组，60名IDA患者作为对照组，分析METTL14在初诊AML中的表达以及其与患者临床特征和预后的相关性，从而明确METTL14能否作为AML的监测及治疗靶点。
一、材料和方法
病例资料
收集2018年12月至2021年12月蚌埠医学院第一附属医院血液内科100例AML患者和60例IDA患者的骨髓标本，所有AML均接受一个周期以上的化疗，且经过骨髓细胞学检测评估疗效。收集初诊AML的详细临床资料，如性别、年龄、白细胞计数、血红蛋白、血小板计数、骨髓原始细胞比例、FAB分型、核型、基因突变、化疗方案、疗效判断和预后分层等。所有患者均签署了知情同意书，且本研究经蚌埠医学院第一附属人民医院伦理审查委员会批准。
试剂与仪器
TRIzol试剂、M-MuLV第一链cDNA合成试剂盒、2X SG Fast qPCR预混液(低Rox)试剂盒及引物均购自上海生物工程公司。Applied Biosystems PCR仪购自赛默飞世尔科技公司。
RNA提取
骨髓血标本2 ml置于EDTa_K2管中，用2倍红细胞裂解液(NH4C1+NaHC03+EDTA-Na2O加蒸馏水再用标准酸碱调至pH 7.4)裂解红细胞，洗涤、离心2-3次，提取单个核细胞，保存在-80°C冰箱；将提取的单个核细胞解冻离心，加入200 μl TRIzol试剂、40 μl氯仿、100 μl异丙醇等提取总RNA,使用超微量分光光度计SMA1000测量总RNA的纯度与浓度，并收集OD260/280比值在1.8-2.0之间且浓度在30-70 ng/μl之间的总RNA样本。
METTL14表达水平的实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测
按照M-MuLV第一链cDNA合成试剂盒(上海生物工程公司)说明书反转录出cDNA,反应体系：2X SG Fast qPCR Master Mix (Low Rox) 10 μl, Forward Primer(10 μM) 0.4 μl, Reverse Primer(10 μM) 0.4 μl, 样本cDNA 5 μl, DNF Buffer 2 μl, PCR-grade water 2 μl; 采用 SYBR green荧光染料法按照2X SG Fast qPCR预混液(低Rox)试剂盒(上海生物工程公司)说明书在PCR仪上扩增特定DNA片段，扩增条件：94 ℃ 10 min; 94 ℃ 20 s, 60 ℃ 20 s, 72 ℃ 20 s, 40个循环。每个样本均设置3个复孔进行对照，计算其均值，以β-actin作为内参基因，采用2-△△Ct 法计算METTL14基因的相对表达水平。各目的基因引物如下：METTL14上游引物：5’-GAGTGTGTTTACGAAAATGGGGT-3’,下游引物：5’-CCGTCTGTGCTACGCTTCA-3’; β-actin上游引物：5’-AGCGAGCATCCCCCAAAGTT-3’,下游引物：5’-AGGGCA-CGAAGGCTCATCATT-3’。
基因突变检测方法
将患者骨髓标本低温保存快速送至金域医学检验实验室，采用二代测序对AML 30个基因进行全外显子区域测序，包括单核苷酸变异、小片段插入/缺失，平均测序深度为2000×,测序仪为Illumina HiSeq X Ten测序仪(美国Illumina公司),主要包括以下环节：标本进行DNA提取，Rapid DNA Lib Prep Kit for Illumina(武汉爱博泰克公司)试剂盒构建含目标基因的全基因组文库制备、Illumina HiSeq X Ten测序仪进行靶向NGS测序，最后进行生信结果分析。
染色体检查方法
将骨髓标本送至合肥金域医学检验实验室进行染色体检查，方法为细胞培养G显带。具体操作：骨髓细胞经过 24 h 培养后收集细胞常规制片，将制好的染色体标本烤干后放入胰酶溶液中消化。然后置于Giemsa染液中染色，自来水冲洗干净，晾干后，即可阅片。镜检：在显微镜高倍目镜下检查显带标本，在染色体上若出现清晰的深浅相间的带型，即为可取标本。
疗效评定及随访
本研究中AML患者的诊断、分类、治疗方案及疗效评估均参照2021年中国AML治疗指南[8]。所有AML患者出院后均随访，末次随访时间为2022年12月31日。总生存期(OS)定义为AML患者从确诊日至随访终点的时间。
统计学分析
应用SPSS 22.0 软件进行统计学分析。计量资料组间比较采用单样本t检验。为了分析METTL14与临床病理特征的相关性，根据所有AML患者的METTL14相对表达量的中位数，将患者分为METTL14高表达组和METTL14低表达组，高、低表达组的临床特征比较采用卡方(χ[2])检验或者Fisher精确检验。采用Kaplan-Meier法评估METTL14对患者总体生存时间(OS)的影响，采用Cox比例风险模型分析影响AML的预后因素，P<0.05为差异有统计学意义。
二、结果
AML患者中METTL14的表达情况
通过qRT-PCR法检测METTL14在AML患者和IDA患者中的表达情况。结果显示，METTL14在AML组患者中的表达较对照组明显增高，差异具有统计学意义(t=7.568, P<0.01)(图1)。
METTL14的表达与AML患者临床病理特征之间的关系
分析METTL14与AML临床病理特征(性别、年龄、初诊白细胞计数、血红蛋白计数、血小板计数、骨髓原始细胞数、FAB分型)之间的相关性。结果显示，METTL14高表达组中年龄≥60岁患者明显多于低表达组(P=0.043),METTL14高表达组中高骨髓原始细胞数患者明显多于低表达组(P=0.046);而两组在性别、WBC计数、HB、PLT、白血病FAB分型上差异均无统计学意义(P>0.05)(表1)。
AML患者<60岁患者选择伊达比星+阿糖胞苷(IA)方案化疗，部分50岁以上且小于60岁患者体能状态较差(ECOG>2分)也可选择去甲基化药物(HMA)±含Ara-C的联合方案；≥60岁患者选择使用去甲基化药物(HMA)±含Ara-C的联合方案，去甲基药物包括地西他滨(D)及阿扎胞苷(A);含Ara-C的方案包括D+HAG(高三尖杉酯碱+Ara-C+粒细胞刺激因子),A+HAG,D+Ara-C,A+Ara-C;其中接受IA方案有49例，接受HMA±Ara-C联合方案有51例。根据临床疗效评判标准，获完全缓解(CR)31例，部分缓解(PR)28例，未缓解(NR)41例。统计结果显示，METTL14高表达组NR病例数明显高于低表达组，差异具有统计学意义(P<0.05),而在化疗方案上差异无统计学意义(P>0.05)(表2)。
AML患者中，核型正常患者56例，核型异常患者44例，包括数目异常和结构异常；伴有CEBPA、NPM1、FLT3-ITD、NARS 或 KAR、DNMT3A、IDH1/2、ASXL1、SRSF2、TP53等基因突变的患者25例，其中8例患者存在≥3个基因同时突变，8例患者存在2个基因同时突变，4例患者单基因突变，无基因突变的患者75例。根据急性髓系白血病诊疗指南将患者分为预后良好组10例，预后中等组51例，预后不良组39例，结果显示：METTL14高表达组预后不良患者明显增多，较低表达组具有统计学差异(P<0.05),而在染色体核型及基因突变上差异均无统计学意义(P>0.05)(表3)。
METTL14表达水平与AML患者预后的关系
为了阐明METTL14表达水平与AML患者预后的关系，采用Kaplan-Meier生存曲线分析100例AML患者的OS。结果显示，METTL14高表达患者的总体生存时间较低表达组明显缩短，差异具有统计学意义(P<0.05)(图2) 。提示，METTL14高表达可作为判断患者预后不良的潜在指标。
影响AML患者预后的多因素分析
将AML患者的临床资料如性别、年龄、FAB分型、骨髓原始细胞计数、WBC计数、Hb计数、PLT计数、化疗方案、染色体核型、预后风险分层及METTL14表达量等因素纳入多因素Cox风险回归模型中进行分析，结果显示：骨髓原始细胞数、WBC计数、PLT计数、预后分组及METTL14表达量是影响AML患者预后的独立危险因素(P<0.05)(表4)。
三、讨论
AML是一种高度异质性和致命性的肿瘤，由于复发率高，预后较差[9]。在真核生物中，m6A 是最常见的 mRNA 修饰形式[10];m6A修饰及其调节蛋白在各种癌症中发挥重要作用，包括白血病 [11,12]、脑肿瘤[13]、乳腺癌[14]和肺癌[15]。近年来关于m6A修饰模式在AML中作用的研究报道不少[16,17,18]。METTL14是m6A甲基化转移酶复合物的核心成分，参与m6A修饰的动态可逆过程。近年来METTL14在人类恶性肿瘤中的生物学功能受到越来越多人的关注。已有研究表明使用小分子METTL3抑制剂可以有效治疗AML[19]。最新研究也表明，METTL14与AML免疫浸润相关[20],有望成为AML的免疫治疗新靶点。
本研究结果显示，METTL14在AML中高表达，且METTL14高表达的患者总生存期(OS)明显缩短，与国外研究报道结果相同。本研究中METTL14在年龄≥60岁、高骨髓细胞数的AML中高表达，与其他研究中报道不同，可能与国内外关于METTL14在AML中的作用研究较少，或纳入病例数少相关。本研究结果还显示，AML患者表现出复杂染色体核型，且出现2个以上基因突变；且METTL14高表达的患者治疗后未缓解及预后不良比例高，较低表达患者有显著统计学意义(P=0.003,P=0.001),表明METTL14高表达的患者易出现化疗耐药性，疗效差，预后不良。多因素Cox回归分析结果显示，较高的骨髓原始细胞比例、发病时高WBC计数、低PLT计数、预后分组及METTL14表达量的高低是影响AML患者预后的风险因素。提示METTL14可用于预测AML的预后。
本研究也存在一定的局限性。首先，AML的FAB分型中M6及M7发病率极低，该研究未能纳入上述病例，应该收集更多的病例数进行对比，并增加不同亚型的病例数，为METTL14在不同亚型中的表达提供更有价值的参考信息。其次，此次纳入的患者大部分为老年患者，均未接受异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)治疗，因此无法评估allo-HSCT是否能够敲除METTL14高表达的不良预后。因此，需要更多的AML样本量及纳入接受allo-HSCT治疗的患者进一步研究证实。
总之，本研究结果表明，METTL14 在AML患者中高表达，高水平的METTL14 与较短的生存期相关，METTL14高表达是AML患者预后不良的危险因素，可以作为临床上判断AML预后的指标，并有望探索其靶向治疗。
参考文献:
[8]中华医学会血液学分会白血病淋巴瘤学组.中国成人急性髓系白血病(非急性早幼粒细胞白血病)诊疗指南(2021年版).中华血液学杂志,2021,42(8):617-623.
基金资助:安徽省自然科学基金青年项目(2108085QH324);安徽省卫生健康科研重点项目(AHWJ2023A10059);
文章来源:李佳佳,伍燕平,张孟孟,等.METTL14在初诊急性髓系白血病患者中的表达及其临床意义[J].中国实验血液学杂志,2024,32(02):376-381.
分享：
儿童急性淋巴细胞白血病作为儿童发病率最高的恶性疾病,约占儿童恶性肿瘤的25%左右，主要治疗手段仍以联合化疗为主。根据中国儿童肿瘤专业委员会2015年启动的ALL临床研究方案大样本7 577例总结，5年长期总体生存率为91%,无事件生存率为81%,说明目前的治疗方案能为患儿带来理想的治疗效果，为患儿的生存提供有力保障。
2024-04-29
急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)是一种血液细胞恶性克隆性疾病，具有髓系细胞异常增殖且分化受阻的特点，导致患者造血功能异常，功能性血液细胞数量减少，进而危及患者生命，全球每年因为急性髓系白血病死亡的人数超过8万[1]。MLL1基因的染色体易位会导致不同的白血病亚型，其中MLL重组型急性髓系白血病和淋系白血病，约占白血病的5-10%[2,3]。
2024-04-26
儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia, ALL)作为儿童发病率最高的恶性疾病[1],约占儿童恶性肿瘤的25%左右，主要治疗手段仍以联合化疗为主。根据中国儿童肿瘤专业委员会2015年启动的ALL临床研究方案(CCCG-ALL-2015)大样本7 577例总结，5年长期总体生存率为91%,无事件生存率为81%,说明目前的治疗方案能为患儿带来理想的治疗效果，为患儿的生存提供有力保障[2]。
2024-04-26
急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia, ALL)是临床儿科常见的恶性肿瘤疾病，是B淋巴细胞、T淋巴细胞前体或成熟B淋巴细胞异常增殖所致，目前临床对于ALL的临床治疗主要采用化疗、干细胞移植、免疫治疗及分子靶向治疗等[1]。
2024-04-26
急性单核细胞白血病(acute monocytic leukemia, AML-M5)属于急性髓细胞白血病中的M5型，以鼻、牙龈与皮肤出血为主要临床特征，具有缓解率低、易复发等特点[1,2]。目前，该病发病机制较为复杂，临床通常认为可能与遗传、化学等因素联系紧密[3,4]。针对AML-M5患者，临床多以化疗方案为主，且近些年伴随化疗方案的不断改进，使得AML-M5的临床疗效得到明显提升。
2024-04-12
急性髓系白血病(AML)是髓系造血/干祖细胞恶性克隆性增殖性疾病,儿童AML占儿童急性白血病的20%。随着多药联合化疗方案及异基因造血干细胞移植技术不断改进、新型靶向药物的不断研发，儿童AML总体诱导缓解率约为85%-95%,5年总生存(OS)率可达65%-75%,但仍低于儿童急性淋巴细胞白血病。
2024-04-07
急性髓系白血病是一种异质性恶性疾病，尽管诱导治疗、大剂量化疗效果得到提升，但患者的总生存率仅30%-40%，复发率仍较高[1]。因此，仍然需要探究更优越的治疗方案。沙利度胺可抑制血管生成，单药治疗急性髓系白血病可改善输血依赖，但有效率不足30%[2]。姜黄素是草本植物的产物，具有抗癌、抗氧化、抗炎作用，既往研究表明其可抑制细胞浸润、逆转耐药，还可上调凋亡蛋白表达，诱导急性髓系白血病KG-1细胞凋亡[3]。
2024-04-03
微小RNA(miR)是一类长度约为22个核苷酸的内源性非编码单链小RNA,在机体中发挥着重要作用，既可以调节mRNA的翻译和稳定性，也参与控制与细胞周期相关的基因，如细胞增殖或凋亡[1]。在多种肿瘤发现miR上调或低表达展现出miR作为肿瘤抑制因子或致癌因子发挥作用。
2024-04-03
急性髓系白血病(AML)是髓系原始细胞克隆性恶性增殖性疾病，是成人最常见的白血病类型[1]。据美国国家癌症研究所的数据显示，2023年美国预计将有20 380例新增AML患者，2013-2019年AML患者的5年生存率仅为31.7%。随着对该疾病的深入研究，目前的治疗手段在阿糖胞苷联合柔红霉素的“7+3”传统方案基础上，辅之以各类分子靶向药物、造血干细胞移植(allo-HSCT)等新技术，使该疾病的治疗取得了较为满意的结果。
2024-04-03
急性髓系白血病(AML)是一种髓系恶性疾病，其特征是髓系造血干祖细胞不受控制的克隆增殖[1],AML在基因水平上具有高度异质性，且存在多种与AML预后相关的异常基因表达及突变。近年来，随着人们对AML的突变和表观遗传学基因的深入研究，为精准医学的生物学靶点奠定了基础，其中值得关注的发现是识别异柠檬酸脱氢酶(IDH)基因中的突变热点，IDH基因的体细胞突变在胶质瘤、结肠癌、软骨肉瘤等实体瘤和血液系统恶性肿瘤中都有描述。
2024-04-03
人气：18274
人气：16752
人气：14144
人气：14083
人气：13250
我要评论
期刊名称：白血病•淋巴瘤
期刊人气：1423
主管单位：国家卫生健康委员会
主办单位：中华医学会,山西省肿瘤研究所,陕西省肿瘤医院
出版地方：山西
专业分类：医学
国际刊号：1009-9921
国内刊号：11-5356/R
邮发代号：22-107
创刊时间：1992年
发行周期：月刊
期刊开本：大16开
见刊时间：7-9个月
影响因子：1.474
影响因子：2.876
影响因子：0.899
影响因子：0.000
影响因子：2.153
学术期刊咨询、科普杂志阅读、专利申请方案、课题研究设计、专著挂名咨询、论文下载、文献查询、原创文章检测、SCI实验设计方案等多项服务。
服务热线
您的论文已提交，我们会尽快联系您，请耐心等待！
你的密码已发送到您的邮箱，请查看！
2024-04-02
9
上传者：管理员
