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鼻咽癌组织中NFAT5和IGF1R的表达及临床特征分析

2025-04-10 43 上传者：管理员

摘要：目的:探讨在鼻咽癌组织中NFAT5和IGF1R的表达，分析其表达水平及其与临床特征和预后的相关性。方法:收集2019年1月1日-2019年12月31日由云南省肿瘤医院收治的鼻咽癌组织及癌旁组织标本69例，采用免疫组织化学检测鼻咽癌组织中NFAT5、IGF1R的表达情况，Kaplan-Meier法预测生存时长，Log-Rank法对临床病理学特征展开预后评估。结果:鼻咽癌组织中NFAT5和IGF1R的阳性表达比例分别为87%和84.5%,相较于癌旁的正常组织，它们在鼻咽癌中的表达显著增高(P<0.05),且二者的表达呈正相关(P<0.05),与T分期、N分期、颅底侵犯及颅神经麻痹相关(P<0.05);NFAT5、IGF1R过表达显著影响鼻咽癌患者的生存率，与预后呈负相关(P<0.05)。结论:鼻咽癌组织中NFAT5和IGF1R两者过表达，表达水平呈正相关，与临床特征和预后显著相关，可成为判断鼻咽癌预后的肿瘤生物标志物。

关键词：
NFAT5
恶性肿瘤
活化T细胞核因子5
胰岛素样生长因子1受体
鼻咽肿瘤
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鼻咽癌(nasopahryngealcarcinoma)是头颈部常见的恶性肿瘤之一,发病率具有明显的地域差异,主要集中于东南亚､北非以及中国的南部[1]｡尽管约90%的早期鼻咽癌患者可通过高精度放射线疗法(IMRT)治愈[2],但因早期症状不典型,超过70%的患者在首诊时已为局部晚期｡且30%~40%的晚期鼻咽癌患者因复发和转移导致治疗失败从而降低生存率｡因此,深入研究鼻咽癌发生发展的分子机制为临床诊治提供新策略尤为重要｡

活化T细胞核因子5(nuclearfactorofactivatedT-cells5,NFAT5)也被称为强直反应增强结合蛋白(tonicity-responsiveenhancerbindingprotein,TonEBP),是细胞对环境高渗反应的中枢调节因子[3]｡与NFAT家族中其他蛋白(NFAT1-4)不同,NFAT5不受钙离子的调控,为非钙离子依赖性磷酸酶[4]｡胰岛素样生长因子1受体(insulinlikegrowthfactor1receptor,IGF1R)是一种与细胞膜结合的酪氨酸激酶受体,它能与配体IGF1或IGF2结合,引发自身的磷酸化过程,从而刺激细胞增殖并阻碍细胞自然死亡[5]｡近年来研究发现,NFAT5和IGF1R与多种类型肿瘤的进展有关｡例如,NFAT5通过Wnt/β-catenin信号通路促进乳腺癌的增殖､迁移及侵袭[6]｡而关于NFAT5与鼻咽癌之间的相关性研究,目前国内外较为匮乏｡2020年有研究者发现IGF1R在47.87%的鼻咽癌患者中过表达,且可能是鼻咽癌患者有价值的预后标志物[7]｡然而,NFAT5和IGF1R双基因在鼻咽癌中的作用尚不明确｡本研究旨在分析NFAT5和IGF1R两者的表达水平及其与临床分期､总生存期的相关性,为鼻咽癌预后预测提供新线索｡

1、资料与方法

1.1临床资料

收集2019年1月1日-2019年12月31日由云南省肿瘤医院收治的鼻咽癌组织标本及配对癌旁组织共69例｡其中,男48例,女21例;中位年龄47岁,≤47岁33例,>47岁36例;有7例患者处于早期阶段(均为Ⅱ期),62例患者为局部晚期阶段,其中Ⅲ期29例,ⅣA期21例,ⅣB期12例｡按照肿瘤大小分类,T1期5例,T2期24例,T3期25例,T4期15例;按淋巴结转移情况,N0期8例,N1期18例,N2期38例,N3期5例;按远端转移情况,M0期67例,M1期2例｡纳入标准:①病理学检查确诊为鼻咽癌;②患者均为首次诊断为鼻咽癌,未行放化疗､手术及生物治疗;③患者的临床诊疗档案及后续跟踪信息完整无缺｡排除标准:①伴随其他部位恶性肿瘤;②患有严重的基础性疾病及感染性疾病｡此外,52例患者有颅底受侵情况,48例患者出现颅神经受损症状｡所有患者的资料均在获得其知情同意后,通过了云南省肿瘤医院伦理审查委员会的批准(No:KYLX2025-083)｡

1.2方法

1.2.1免疫组织化学使用二甲苯脱羟处理,乙醇溶液(100%､95%､85%､75%)水合｡将处理后的组织切片置于修复盒内,加入修复液修复抗原｡自来水冲洗修复后的切片,油笔标记待测组织区域,PBS溶液清洗｡清除PBS后,向标记区域添加过氧化氢阻断溶液100μL,室温下静置10min,用PBS冲洗｡根据组织样本的大小,向每张切片上滴加50~100μL的一抗工作溶液,并过夜孵育｡次日,继续在室温下孵育10min,PBS清洗｡去除PBS,加入酶标记二抗100μL,室温孵育后,用PBS清洗｡最终,向样本中加入100μL新配制的DAB显色剂,引发显色反应,自来水冲洗,使用100μL苏木素复染样本,进行脱水､透明化处理,最终完成封片操作｡

1.2.2结果判定本研究采用双评分半定量方法来评估免疫组织化学的阳性结果,其中阳性表达以棕黄色或棕褐色为标志｡在高倍显微镜(×100)下,随机挑选5个视野,统计每个区域内100个细胞的数量｡依据阳性细胞的着色,分为无色(0分)､浅黄色(1分)､棕色(2分)和深褐色(3分)4个等级进行评分;阳性细胞占总细胞<25%､26%~50%､≥51%分别为1､2､3分｡总评分为阳性细胞百分比×染色强度评分,≥4分为阳性,4分为阴性[8]｡

1.3随访

治疗结束后的2年内,患者每3个月复查｡在2~5年间,每6个月复查｡若5年未见复发或转移,则年度复查｡此外,确保患者每年全面体检1次｡随访手段涵盖电话､短信､微信通讯及门诊复查,以持续监测患者的生存状况｡

1.4统计学方法

使用SPSS26.0统计学软件分析数据,Kaplan-Meier法预测生存时长,Pearson��sχ2检验或Fisher��s精确检验对比NFAT5和IGF1R表达在不同组间的分类变量｡同时,应用log-Rank法对临床病理学特征展开预后评估｡

2、结果

2.1NFAT5和IGF1R在鼻咽癌组织及其癌旁组织中的表达情况

NFAT5在癌组织中阳性率为87%(60/69),明显高于癌旁正常组织(11%),差异有统计学意义(P<0.05)｡IGF1R在癌组织中阳性率为84.1%(58/69),明显高于癌旁组织(14.0%),差异有统计学意义(P<0.05)｡见图1｡

图1鼻咽癌组织中NFAT5､IGF1R蛋白阳性表达

2.2NFAT5和IGF1R表达与鼻咽癌临床病理特征的关系

不同年龄､性别､饮酒史､吸烟史､临床分期､M分期的鼻咽癌患者NFAT5的表达差异无统计学意义(P>0.05)｡不同T分期､N分期､颅底侵犯､颅神经麻痹的鼻咽癌患者NFAT5的表达差异有统计学意义(P<0.05)｡见表1｡

不同年龄､性别､饮酒史､吸烟史､M分期的鼻咽癌患者IGF1R的表达差异无统计学意义(P>0.05)｡不同临床分期､T分期､N分期､颅底侵犯､颅神经麻痹的鼻咽癌患者IGF1R的表达差异有统计学意义(P<0.05)｡见表1｡

表1鼻咽癌组织中NFAT5､IGF1R表达与临床病理特征的关系

2.3NFAT5和IGF1R及临床病理学特征与预后的关系

随访69例鼻咽癌患者的总生存期(overallsurvival,OS)为12~125个月,中位生存期(mediansurvivaltime,mOS)为40个月,3年生存率为64.5%,5年生存率为35.2%(图1)｡Log-Rank分析显示,NFAT5和IGF1R在T分期以及是否有颅底侵犯对鼻咽癌的预后有影响,差异有统计学意义(P<0.05)｡年龄､性别､饮酒史､吸烟史､临床分期､N分期､M分期､是否有颅神经麻痹对鼻咽癌的预后差异无统计学意义(P>0.05)｡NFAT5阳性组5年生存率为28.1%,高于NFAT5阴性组(41.7%)｡IGF1R阳性组5年生存率27.6%,高于IGF1R阴性组(74.4%)｡见表2,图2｡

表2NFAT5和IGF1R及临床病理学特征与预后的关系

图2NFAT5和IGF1R及临床病理学特征对预后的影响

2.4鼻咽癌中NFAT5和IGF1R蛋白表达的关系60例NFAT5阳性病例中IGF1R蛋白阳性率为91.6%(55/60),9例NAFT5阴性病例中IGF1R蛋白阳性率为33.3%(3/9),P<0.05,鼻咽癌中NFAT5和IGF1R蛋白的阳性表达呈显著正相关｡NFAT5与IGF1R表达呈正相关(P<0.001)｡

3、讨论

近年来,放化疗联合疗法已提升了鼻咽癌患者的存活率,但仍有约30%的患者存在复发或转移的风险[9]｡因此,探寻与鼻咽癌增殖､侵袭有关的生物标志物及治疗靶点,对鼻咽癌的临床治疗具有重要意义｡

NFAT5在人体正常组织中表达,如脑､肾､胸腺､心脏､骨骼肌和肺[10]｡越来越多的证据表明,NFAT5对多种实体瘤发挥促癌作用,NFAT5促使表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)从内质网移动到内膜系统,从而加速口腔鳞状细胞癌的侵袭和转移过程[11],NFAT5在胰腺导管腺癌中高表达,通过调节磷酸甘油酸激酶1影响胰腺导管腺癌细胞的糖酵解,进而推动肿瘤发展,并与患者预后不良相关联[12]｡在肺腺癌中,NFAT5的表达水平与细胞对顺铂的耐药性以及迁移能力密切相关[13]｡NFAT5上调AQP5促进恶性细胞存活并激活p38MAPK通路,加速了慢性淋巴细胞白血病的进展[14]｡本研究使用免疫组织化学方法检测NFAT5在鼻咽癌组织及其癌旁组织中的表达情况,发现NFAT5在癌旁组织中阳性率低于癌组织(P<0.05),且与T分期､N分期､颅底侵犯､颅神经麻痹相关(P<0.05)｡此外,相比NFAT5阴性的鼻咽癌患者,阳性患者的3年和5年生存率更低｡这一结果可能与NFAT5表达阳性的鼻咽癌细胞在迁移､增殖及侵袭能力上的增强有关｡

IGF1R作为一种免疫调节剂,成为癌症治疗领域中一个极具吸引力的药物作用靶点[15]｡IGF1R在肿瘤微环境(tumormicroenvironment,TME)中作为促癌因子,促进肺癌转移,可能是早期预测非小细胞肺癌的预测指标｡IGF1R作为非小细胞肺癌中miR-30a-3p的功能基因激活PI3K/AKT/mTOR信号通路导致患者对奥希替尼耐药,影响药物治疗效果[16]｡另外,研究表明IGF1R与三阴性乳腺癌的不良预后存在关联[17]｡已有研究指出,IGF1R表达升高与鼻咽癌骨转移增加相关[18]｡本研究中,鼻咽癌组织中IGF1R阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05),且临床分期､T分期､N分期､颅底侵犯､颅神经麻痹与IGF1R的表达差异有统计学意义(P<0.05)｡此外,IGF1R阳性的鼻咽癌患者3年和5年生存率低于阴性患者,因此,IGF1R可作为鼻咽癌预后不良的重要标志｡

在本研究中,60例NFAT5阳性病例中有55例IGF1R表达呈阳性,9例NFAT5阴性病例中有3例IGF1R表达呈阳性,两者在鼻咽癌中的表达呈正相关(P<0.05),且均在癌组织中高表达,提示在鼻咽癌发生､发展过程中NFAT5与IGF1R起协同作用,具体机制有待进一步研究｡

尽管我们揭示了NFAT5和IGF1R对鼻咽癌患者的病理生理过程､诊断､治疗和预后方面具有重要作用,但仍停留于临床层面,尚未深入研究NFAT5和IGF1R的内在分子机制,还需要进一步行酶联免疫吸附试验､高效液相色谱法､Northern印迹法､实时荧光定量PCR或免疫荧光等实验来巩固结论｡创新点在于发现NFAT5和IGF1R表达水平与鼻咽癌生存率具有相关性｡但由于本研究纳入的病例数较少,后期需多中心联合研究扩大样本量,减少结果偏移｡

综上所述,相比于癌旁正常组织,NFAT5和IGF1R在鼻咽癌组织中显著表达,二者表达呈正相关性｡NFAT5和IGF1R过表达的鼻咽癌患者较阴性患者生存率降低,与鼻咽癌的预后呈负相关,且与T分期､N分期､颅底侵犯及颅神经麻痹相关｡因此,本研究有望为鼻咽癌的治疗提供新思路､开辟新途径｡

文章来源:杨洁,王清,林福生,等.鼻咽癌组织中NFAT5和IGF1R的表达及临床特征分析[J].临床耳鼻咽喉头颈外科杂志,2025,39(04):333-337+343.