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妊娠期妇女孕中晚期胆汁酸亚型参考区间的建立

2025-06-09 49 上传者：管理员

摘要：作为特殊的生理阶段的孕期,体内多种物质均与非孕期存在较大差异。雌激素、孕酮及其代谢物会影响妊娠期胆汁酸代谢[1]。胆汁酸作为关键的代谢调节剂,与妊娠中期和晚期的妊娠相关疾病有关,如肝内胆汁淤积症（ICP）、妊娠期糖尿病和妊娠期高脂血症等。因此,准确监测妊娠期胆汁酸代谢的水平对于妊娠期相关疾病的早期诊断和治疗监测具有重要意义。但不同地区、不同人群等的胆汁酸水平可能存在差异。因此,有必要建立适合于妊娠期中、晚期妇女的参考区间。本研究拟通过LC-MS/MS技术检测血清中的15种胆汁酸亚型,为临沂地区妊娠女性建立孕中期和孕晚期15种胆汁酸亚型的参考区间。

关键词：
参考区间
孕产妇
液相色谱串联质谱
生理阶段
胆汁酸谱
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作为特殊的生理阶段的孕期,体内多种物质均与非孕期存在较大差异。雌激素、孕酮及其代谢物会影响妊娠期胆汁酸代谢[1]。胆汁酸作为关键的代谢调节剂,与妊娠中期和晚期的妊娠相关疾病有关,如肝内胆汁淤积症(ICP)、妊娠期糖尿病和妊娠期高脂血症等。因此,准确监测妊娠期胆汁酸代谢的水平对于妊娠期相关疾病的早期诊断和治疗监测具有重要意义。但不同地区、不同人群等的胆汁酸水平可能存在差异。因此,有必要建立适合于妊娠期中、晚期妇女的参考区间。本研究拟通过LC-MS/MS技术检测血清中的15种胆汁酸亚型,为临沂地区妊娠女性建立孕中期和孕晚期15种胆汁酸亚型的参考区间。

1、资料与方法

1.1研究对象

从本院“千天计划”生物样本库中筛选2019年7月—2020年8月健康孕妇的生物样本。纳入标准:单胎;自然妊娠;月经周期正常;无流产、早产及围产期胎儿死亡史。排除标准:体重指数异常;有高血压、高脂血症、肾病、心血管疾病史及内分泌疾病者;妊娠期高血压、糖尿病;个人或家族ICP发病史;肝病史;服用影响胆汁酸分泌的药物。选取孕中期、孕晚期样本各120例。年龄20~38岁,平均(28.42±3.95)岁;孕中期:孕周13~27周,平均(20.25±5.14);孕晚期:孕周28~39周,平均(34.23±2.69)。本研究经临沂市妇幼保健院伦理委员会批准,并获得所有受试者的知情同意。

1.2方法

(1)仪器与试剂。YSEXACT9900MD液相色谱串联质谱仪、15种胆汁酸测定试剂盒、校准品和C18色谱柱(均来自山东英盛生物技术有限公司)。(2)标本采集。受试者隔夜空腹8~14h,静脉采集全血放置在有分离胶的负压真空采血管中,待血液标本凝固后1h内以3000r/min离心15min分离血清,样本外观无溶血、黄疸和脂血,保存于-80℃冰箱待测。(3)仪器参数设置。液相条件:流速0.3mL/min,柱温40℃;梯度洗脱条件:参考试剂说明书;质谱条件:离子源温度350℃,喷雾电压3500V(+)、3000V(-),离子传输管温度350℃,鞘气50arb,辅助气5arb;采用MRM模式采集数据,条件参考试剂说明书。(4)质量保证。依据液相色谱串联质谱临床检测方法的开发与验证[2]、液相色谱-质谱临床应用建议[3]、生物样品定量分析方法验证指导原则、WS/T420-2013临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证对英盛超高效液相色谱-串联质谱法胆汁酸亚型检测系统进行性能验证。验证内容包括定量下限(LLMI)、线性范围、精密度、准确度、携带污染。经验证,15种胆汁酸亚型的定量下限(LLMI)实测值与规定值最高偏差均小于15%,线性范围测得理论浓度与实测浓度相关系数(r)均大于0.99,最低检出限三次测量浓度点偏差均在±20%以内,测量重复性批内精密度CV≤13%,中间精密度CV≤15%,准确度实验均满足回收率在85%~115%;携带污染实验中,高-低值转换样本均值与低-低值转换样本均值的差小于低-低值转化样本均值的3SD。

1.3数据处理

采用SPSS25.0处理数据,GraphPadPrism9软件进行绘图。计量资料采用Kolmogorov-Smirnov检验做正态性检验,非正态分布的计量资料以[M(P25,P75)]表示,以双侧95%百分位数计算生物参考区间。采用非参数统计建立参考区间的上下限,使用Bootstrap方法计算参考限的90%置信区间。孕中、晚期不同亚型胆汁酸的中位数比较采用Mann-WhitneyU检验,配对资料使用Wilcoxonsigned-rank检验。

2、结果

2.1孕妇

15种胆汁酸亚型的参考区间妊娠期女性15种胆汁酸亚型血清含量均不符合正态分布;两组CDCA、GCA、LCA、TCA、UDCA的血清检测值差异有统计学意义,分别建立参考区间。其他10种胆汁酸亚型血清含量比较无统计学意义,两组合并建立参考区间。经过剔除离群值后,取参考值分布的中间95%作为其参考区间。结果见表1、2。

表1两组15种胆汁酸亚型水平的比较

表2孕期15种胆汁酸亚型95%CI

2.2不同孕期胆汁酸代谢特征

分类汇总结果显示,孕中期与孕晚期不同类型的胆汁酸之间差异无统计学意义,见表3。进一步分析发现,不同类型的胆汁酸在孕妇体内含量不同。结合型胆汁酸为主要的胆汁酸形式,其中甘氨酸结合型胆汁酸含量更高,约占总胆汁酸含量的45%(其中初级甘氨酸结合型胆汁酸约占31%,次级甘氨酸结合型胆汁酸约占14%),牛磺酸结合型胆汁酸约占19%(其中初级牛磺酸结合型胆汁酸约占14%,次级牛磺酸结合型胆汁酸约占5%);游离型胆汁酸约占36%(其中初级游离型胆汁酸为13%,次级游离型胆汁酸为23%)。

表3两组不同类型胆汁酸浓度的比较

3、讨论

目前,在ICP的诊断和治疗中,多采用循环酶法检测血清中总胆汁酸来反映胆汁代谢的水平[4],但其对ICP的诊断效能有限。有报道胆汁酸亚型在肝胆疾病中的诊断中具有重要价值,然而不同实验室报道的参考范围并不完全一致。在ICP的研究中发现,孕妇血清胆汁酸水平有助于区分ICP的亚型,而黄疸型ICP可能是ICP不良妊娠结局的重要预测因素。因此,多个实验室建立了自己的孕期胆汁酸亚型参考区间。然而,由于检测方法、研究人群或诊断时的胎龄不同,文献中提供的参考区间存在一定差异。而临沂地区尚无相应的研究数据。本研究统计了孕中、晚期各120例孕产妇血液中胆汁酸亚型的水平,其中CDCA、GCA、LCA、TCA、UDCA水平在两组存在含量差异,这与黄雅清等[5-7]研究结果并不一致。更重要的是,本研究中15种胆汁酸亚型的参考水平较先前文献报道的孕期数据均偏低[5-7],较先前报道的成人胆汁酸亚型的参考水平也偏低。考虑不同地区人群基因差异、饮食结构以及年龄等均对其数值有一定的影响。此外,本研究还显示,孕期胆汁酸中以结合型胆汁酸为主,其中甘氨酸结合型胆汁酸平均百分比较牛磺酸结合型胆汁酸平均百分比更高,这与黄雅清[5]的报道一致。按照初级胆汁酸、次级胆汁酸、游离型胆汁酸、甘氨酸结合型胆汁酸、牛磺酸结合型胆汁酸分类进行孕中期与孕晚期的比较,发现差异无统计学意义。但Zhu[6]的研究显示孕中期胆汁酸代谢以非结合胆汁酸为主、孕晚期胆汁酸以结合胆汁酸为主,尤其是牛磺酸结合胆汁酸。这与本研究结果并不一致。考虑到文献报道为随机对照研究,而本研究结果来源于自身对照组的计算,标本数量相对较少,可能是造成结果差异的原因。

优思弗(UDCA)是治疗ICP常用的药物,普通的循环酶法检测总胆汁酸对于优思弗的用药监测缺乏敏感性。本研究发现,本地区不同孕期产妇UDCA的水平具有差异。建立针对该地区不同孕期的UDCA参考水平,帮助临床治疗ICP的用药进行动态监测,对于总胆汁酸下降并不明显的患者,可能起到更好的疗效观察作用。

综上所述,本研究采用液相色谱串联质谱法在本院实验室基础上建立了临沂地区孕产妇不同孕期的15种胆汁酸亚型参考范围,并分析了孕期胆汁酸类型组成,为临床诊疗、用药监测提供了实验室依据,有助于探索胆汁酸代谢在孕期肝胆疾病早期诊断中的作用,为疾病发生、发展的相关机制研究提供参考。

参考文献:

[2]曹正,李水军,沈敏,等.液相色谱串联质谱临床检测方法的开发与验证[J].检验医学,2019,34(3):189.

[3]液相色谱-质谱临床应用建议[J].中华检验医学杂志,2017,40(10):770.

[4]妊娠期肝内胆汁淤积症临床诊治和管理指南(2024版)[J].中华妇产科杂志,2024,59(2):97.

[5]黄雅青,袁小芬,赵珏,等.浙江地区健康孕妇中孕期和晚孕期胆汁酸谱特征及院内参考区间建立[J].中华检验医学杂志,2021,44(12):1176.

[7]陈辰,陈亚军,蒋翠莲,等.串联质谱技术检测孕妇胆汁酸谱的性能评估及其参考区间建立[J].国际检验医学杂志,2021,42(16):1966.

基金资助:临沂市重点研发计划(医学类)项目(No.2023YX0144);

文章来源:杨向荣,谷兆琪,王春愿,等.妊娠期妇女孕中晚期胆汁酸亚型参考区间的建立[J].山东医学高等专科学校学报,2025,47(03):71-74.