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HPLC同时监测癫痫患者卡马西平血药浓度及合理用药

2020-10-17 236 上传者：管理员

摘要：目的：建立高效液相色谱法（HPLC）同时监测癫痫患者卡马西平和苯妥英钠的血药浓度，分析血药浓度的影响因素。方法：利用InertSustain-C18(250mm×4.6mm,5μm）色谱柱进行试验，流动相为甲醇水溶液（50∶50），流速为1.0mL/min，紫外检测波长为240nm。对该方法进行方法学考察。按照给药方案将我院168例癫痫患者分为三组，应用HPLC对患者血药浓度进行监测。结果：此色谱条件专属性好，方法学考察均符合要求。联合用药组患者血药卡马西平及苯妥英钠浓度均低于卡马西平组和苯妥英钠组（P<0.01）。青年患者血药卡马西平浓度高于老年患者（P<0.01）。成年患者血药苯妥英钠浓度高于青年和老年患者（P<0.01），老年患者血药苯妥英钠浓度低于青年患者（P<0.05）。结论HPLC的专属性、线性与范围、定量限、提取回收率、精密度及重复性良好，可用于临床血药浓度监测。卡马西平和苯妥英钠联合用药会降低血药浓度；年龄差异对两种药物血药浓度有明显影响。临床可根据有效血药浓度为患者制定个性化的用药方案。

关键词：
癫痫
神经疾病
血药浓度监测
高效液相色谱
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癫痫为常见的神经系统疾病，严重影响患者的身心健康。卡马西平治疗癫痫的效果显著，但其有效浓度范围较窄（4～12μg/mL)[1]，超过有效浓度范围易发生中毒反应；苯妥英钠为临床一线抗癫痫药物，通过抑制异常放电的传导治疗癫痫[2]，但其个体差异大，剂量与疗效、毒性间关系较为复杂，治疗窗窄（10～20μg/mL)[3]。临床常以两种药物联合使用治疗癫痫，两种药物均具有吸收不规则、代谢酶诱导、治疗范围窄等特点，为提高用药的安全性和有效性，在服用卡马西平及苯妥英钠期间应常规监测血药浓度，实施个体化用药，避免发生药品不良反应，保证用药安全。本研究旨在利用高效液相色谱法（HPLC）同时对患者服药后卡马西平及苯妥英钠的血药浓度进行监测，探讨影响两种药物血药浓度的因素。

1、资料与方法

1.1一般资料

选取2016—2019年我院门诊及住院癫痫患者168例，依病情从单一给予卡马西平或苯妥英钠，逐步增加药量或联合用药，参考血药浓度监测结果调整药量，至疗效最佳，确定给药方案。按照给药方案将168例癫痫患者进行分组。联合用药组：同时服用卡马西平与苯妥英钠患者62例，男34例，女28例。卡马西平组：仅服用卡马西平患者50例，男27例，女23例。苯妥英钠组：仅服用苯妥英钠患者56例，男29例，女27例。患者年龄为12～65岁，均为原发性癫痫且不伴有其他疾病，诊断符合国际抗癫痫联盟1993年和2001年制定的癫痫和癫痫综合征的诊断和分类标准[4]。

1.2仪器

分析天平（厂家：上海民桥精密科学仪器有限公司；型号：FA1004N,d=0.01/0.1mg）；离心机（品牌：ThermoFisher；型号：LegendMicro21R）；高效液相色谱仪（厂家：岛津制作所；型号：LC-20A）；高效液相自动进样器（厂家：岛津制作所；型号：SIL-20AC）；检测器（厂家：岛津制作所；型号：SPD-20A）；氮吹仪（厂家：天津市恒奥科技发展有限公司；型号：HGC-12A）；数显恒温水浴锅（厂家：常州欧邦电子有限公司；型号：HH-4）。

1.3药物与试剂

苯妥英钠（中国食品药品检定研究院，100210-201603,99.0%），卡马西平（中国食品药品检定研究院，100412-201605,99.7%）；甲醇为色谱纯，二氯甲烷为分析纯，水为自制纯化水。

1.4方法

1.4.1色谱条件。

色谱柱选择InertSustain-C18(250mm×4.6mm,5μm）；流动相为甲醇∶水=50∶50；流速为1.0mL/min；紫外检测波长为240nm；自动进样器温度为4℃；柱温为25℃[5]。

1.4.2血清样品的采集及处理。

患者清晨空腹采血2mL,3000r/min离心10min，精密量取0.4mL血清，加入1mL二氯甲烷，振荡2min,10000r/min离心5min，取下层有机相，氮气吹干，流动相100μL复溶，10000r/min离心10min，取上清液进样分析。

1.4.3标准品储备液配置。

精密称取干燥至恒重卡马西平对照品10.81mg、苯妥英钠对照品14.06mg，置25mL容量瓶，加甲醇至刻度，浓度分别432.4μg/mL、562.5μg/mL，为储备液。

1.5统计学方法

采用SPSS20.0统计学软件对数据进行处理，计量资料用表示，数据先进行正态性检验，符合正态分布的资料组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析，以P<0.05为差异具有统计学意义。

2、结果

2.1测定方法的方法学考察

2.1.1专属性。

分别将空白血清、加入对照品后的混合标准溶液和待测样品，按“1.4.2”项下方法处理样品；按“1.4.1”项下色谱条件进样分析，记录色谱图（图1）。

图1HPLC色谱图

2.1.2线性与范围。

取标准品储备液0.4、1.5、2.5、3.5、4.5、5.5mL至10mL容量瓶，甲醇定容，得系列浓度溶液；分别取上述溶液40μL至1mL于EP管，40℃氮吹挥干，加空白血清400μL，按“1.4.2”项下方法处理样品；按“1.4.1”项下色谱条件进样分析，以峰面积A对相应药物空白血清溶液C（μg/mL）作回归，得标准曲线方程，卡马西平：A=77810C+9156.5,r=0.9996(n=6），苯妥英钠：A=6950C-3625.2,r=0.9995(n=6）；表明卡马西平1.73～23.78μg/mL，苯妥英钠2.25～30.94μg/mL呈良好的线性。

2.1.3定量限。

取对照品储备液适量，用空白血清逐级稀释后，按“1.4.2”项下方法处理样品；按“1.4.1”项下色谱条件进样分析，以信噪比S/N>5为准，测定出该方法对卡马西平的定量限为1.73μg/mL，苯妥英钠的定量限为2.25μg/mL。

2.1.4提取回收率。

精密移取对照品储备液适量，用空白血清稀释得低、中、高3个浓度的标准样品，按“1.4.2”项下方法处理样品；按“1.4.1”项下色谱条件进样分析，获得对应药物相应峰面积A作为提取回收率的分子；相应浓度的对应药物标准溶液按相同方法获得对应药物相应峰面积B作为提取回收率的分母。卡马西平低、中、高3个浓度的提取回收率分别为79.96%、80.50%和82.43%，苯妥英钠低、中、高3个浓度的提取回收率分别为79.30%、80.95%和82.92%，均>70%，符合生物样品分析方法要求。

2.1.5精密度试验。

精密移取对照品储备液适量，用空白血清稀释得低、中、高3个浓度的标准样品，按“1.4.2”项下方法处理样品；按“1.4.1”项下色谱条件进样分析，连续测定5次得日内精密度，卡马西平低、中、高浓度的样品峰面积RSD分别为1.94%、0.68%和0.32%，苯妥英钠低、中、高浓度的样品峰面积RSD分别为1.47%、0.48%和0.24%,RSD值均<5%；连续测定5天得日间精密度，卡马西平低、中、高浓度的样品实测浓度RSD分别为2.38%、2.26%和2.75%，苯妥英钠低、中、高浓度的样品实测浓度RSD分别为1.26%、2.29%和1.57%,RSD值均<5%，符合生物样品分析方法要求。

2.1.6重复性。

精密移取对照品储备液适量，用空白血清稀释得低、中、高3个浓度的标准样品，按“1.4.2”项下方法处理样品；按“1.4.1”项下色谱条件进样分析，得峰面积A，考察重复性，卡马西平低、中、高浓度的RSD分别为0.85%、0.40%和0.85%，苯妥英钠低、中、高浓度的RSD分别为0.28%、0.49%和0.27%;RSD值均<10%，符合生物样品分析方法要求。

2.2样品测定结果

2.2.1不同治疗方案与患者血药浓度的关系。

联合用药组患者血药卡马西平及苯妥英钠浓度均低于卡马西平组和苯妥英钠组（P<0.01，表1）。

表1三组患者的血药浓度比较

2.2.2年龄与患者血药浓度的关系。

联合用药组老年患者血药卡马西平浓度低于青年患者（P<0.01）及成年患者（P<0.05）；联合用药组成年患者血药苯妥英钠浓度均高于青年及老年患者（P<0.01）；卡马西平组青年患者的血药卡马西平浓度均高于成年及老年患者（P<0.01）；苯妥英钠组成年患者的血药苯妥英钠浓度均高于青年及老年患者（P<0.01），且青年患者的高于老年患者（P<0.05）。见表2。

3、讨论

本研究对分析方法进行方法学考察，确定了该方法的稳定性及实用性。在研究过程中，长期服药的患者，血药浓度已达稳态，可在再次给药前抽血测定，而初始服药或调整剂量阶段患者两种药物血药浓度波动较大，一般连续服药6～10d后采血，以使血药浓度达到稳态状态，若忽视采样时间，则无法测得真实稳定的血药浓度，会对治疗方案调整带来负面影响。

表2三组不同年龄段患者血药浓度比较

本研究对不同治疗方案、年龄的患者进行了血药浓度监测，结果显示，联合用药组患者血药卡马西平及苯妥英钠浓度均低于卡马西平组和苯妥英钠组（P<0.01），考虑由于卡马西平及苯妥英钠均为肝药酶诱导剂[6]，可提高细胞色素P450酶系的活性[7]，加速部分活性物质的代谢速率。卡马西平与苯妥英钠均为常用的抗癫痫药物，若患者伴有其他疾病，在联合用药时要更加注意药物的相互作用及抗癫痫药物的血药浓度监测；另外，在临床使用过程中卡马西平和苯妥英钠联合用药较为常见，要密切监控两种药物的血药浓度，及时调整药量，保证患者的用药安全。本研究结果发现，成年及老年患者卡马西平血药浓度均低于青年患者，说明在卡马西平使用过程中应结合患者年龄调整给药剂量。苯妥英钠的个体动力学参数差异大，年龄、食物、肝肾功能、遗传因素乃至烟、酒、患者面临的环境因素等均会使药物在体内的药代动力学或药物效应发生改变[8]。在苯妥英钠治疗方案调整阶段，笔者发现患者苯妥英钠的血药浓度波动较大，即便确定给药方案后，苯妥英钠血药浓度的标准差值也较大，因此患者在服用苯妥英钠时，剂量必须个体化，并定期给予监测血药浓度，使血药浓度维持在有效范围内。

参考文献：

[1]于尧.苯巴比妥与卡马西平联合用药对癫痫病患者的效果分析[J].首都食品与医药,2019,26(2):59.

[2]张孟媛,吕媛,洪秀琴,等.苯妥英钠对癫痫患者体内3种心血管疾病相关因子水平影响的Meta分析[J].中国药房,2020,31(3):353-357.

[3]崔晓晖.10例癫痫病人苯妥英钠血药浓度监测的临床护理观察[J].海峡药学,2015,27(10):187-188.

[5]黄健,张奇洲,漆新文,等.HPLC法同时测定癫痫患者体内卡马西平和苯妥英钠的血药浓度[J].兵团医学,2016,47(1):49-51.

[6]陈开杰,周凯琴,房光萃,等.癫痫患者卡马西平血药浓度监测及影响因素分析[J].中国药业,2015,24(21):60-62.

[7]刘骁虎,胡霞敏.固相萃取高效液相色谱法测定苯妥英钠血药浓度及临床应用[J].江汉大学学报(自然科学版),2017,45(2):153-157.

[8]荣荣,邹广杰,张启丽,等.反相高效液相色谱法同时测定苯巴比妥､苯妥英钠､卡马西平的血药浓度[J].中国医院用药评价与分析,2017,17(3):374-376.

梁乐,朱琳,刘春莹,田娜妮,何青青,白婷,崔涛.基于HPLC同时监测癫痫患者卡马西平和苯妥英钠血药浓度及合理用药分析[J].临床医学研究与实践,2020,5(27):1-3.