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高危型人乳头瘤病毒负荷量与宫颈癌前病变的相关性分析

2024-07-03 91 上传者：管理员

摘要：目的探讨宫颈癌前病变的发生与高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)负荷量的关系。方法回顾性分析2022-03—2023-03月于北京市延庆区医院病理科接受HR-HPV分型定量检测及阴道镜活检的233例宫颈癌前病变患者的临床资料，其中低级别鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesion, LSIL)(LSIL或CINⅠ级)130例，高级别鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesion, HSIL)95例，HSIL中包括CINⅡ级59例和CINⅢ级36例，宫颈原位腺癌8例。结果 233例宫颈活检标本HR-HPV总检出率为87.0%,检出HR-HPV亚型15种，检出率排前4位分别为HPV16(25.3%)、HPV52(17.6%)、HPV58(15.0%)以及HPV51(10.3%);HSIL组HR-HPV负荷量明显高于LSIL组(P<0.05);CINⅠ级、CINⅡ级及CINⅢ级的病毒负荷量呈显著递增趋势(P<0.05)。结论 HR-HPV感染与宫颈癌前病变的发生密切相关，HR-HPV负荷量检测可作为宫颈癌前病变、宫颈癌筛查及病情追踪监测的一项客观指标。

关键词：
HR-HPV感染
宫颈癌
病毒负荷量
癌前病变
高危型人乳头瘤病毒
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持续性HR-HPV感染是宫颈癌及宫颈癌前病变较为明确的致病因素，但宫颈病变的严重程度与HR-HPV负荷量是否相关，目前尚存争议。我们通过AUTRAX全自动核酸提取工作站(简称AUTRAX)对HR-HPV亚型进行分型检测，并通过实时荧光定量PCR对检测到的HPV亚型进行定量分析，与病理诊断进行对照，以探讨HPV负荷量与不同级别宫颈上皮内病变的关系。

1、材料与方法

1.1 资料来源

收集北京市延庆区医院病理科2022-03—2023-03月进行HR-HPV分型定量检测及阴道镜活检的233例宫颈癌前病变患者的临床资料。宫颈癌前病变患者年龄19～72岁，平均年龄45.2岁，中位数年龄45.0岁，其中低级别鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesion, LSIL)130例，高级别鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesion, HSIL)95例，原位腺癌8例，参照第五版世界卫生组织女性生殖器官肿瘤分类[1],LSIL包括宫颈上皮内瘤变I级(cervical intraepithelial neoplasia I,CINⅠ级),HSIL包括CINⅡ级和CIN Ⅲ级，本研究中CINⅠ级130例、CINⅡ级59例、CIN Ⅲ级36例。所有阴道镜活检标本病理切片均经2位高年资病理医师阅片。

1.2 方法

1.2.1

先用10%中性缓冲福尔马林固定阴道镜活检标本，随后常规脱水、石蜡包埋，4 μm厚度切片，苏木素-伊红染色，显微镜观察。

1.2.2 仪器和试剂：

HR-HPV分型(HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、82)核酸测定试剂盒(荧光PCR法)、磁珠提取试剂、96孔提取板、AUTRAX仪器(上海之江生物科技股份有限公司);SLAN全自动医用PCR分析系统(上海宏石医疗科技有限公司)。

1.2.3 AUTRAX操作步骤：

先将样本放入样本架上，摆放好提取试剂、PCR扩增试剂，按相应位置放置吸头、96孔核酸提取板和PCR扩增反应管，按照仪器指令在电脑屏幕确认后开始进行实验。仪器通过条形码识别每份样本，采用磁珠法自动提取核酸、配制PCR体系并加样到PCR反应管孔中。

1.2.4 PCR扩增：

利用Taqman探针实时荧光定量PCR(FQ-PCR)原理，设计分别针对15种高危型HPV(l6、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、82)的核酸序列特异性引物，利用PCR技术对模板进行扩增，并结合FQ-PCR技术，在上下游引物之间设计分别针对15种HR-HPV核酸保守序列的4种Taqman探针。通过荧光自动PCR仪在全封闭反应体系中检测HPV类型，并以此作为依据，对HPV感染情况进行判断。具体扩增程序如下：94 ℃×2 min, 93 ℃×10 sec, 62 ℃×31 sec, 循环40次。

1.2.5 统计学方法

采用SPSS 22.0分析数据，HSIL组和LSIL组HPV负荷量比较采用Mann-Whitney U检验，CINⅠ级、CINⅡ级及CINⅢ级HPV负荷量比较采用Kruskal-Wallis秩和检验，CINⅠ级、CINⅡ级及CINⅢ级HPV负荷量相关性分析采用Spearman等级相关分析。

2、结果

2.1 HR-HPV亚型检测结果

233例宫颈活检标本HR-HPV总检出率为87.0%,CINⅠ组HPV检出率82.3%(107/130),CINⅡ组HPV检出率94.9%(56/59),CINⅢ组HPV检出率97.2%(35/36),原位腺癌组HPV检出率50.0%(4/8)。15种亚型均检出，检出率前4位的分别为HPV16 25.3%(59/233)、HPV52 17.6%(41/233)、HPV58 15.0%(35/233)以及HPV51 10.3%(24/233);HPV单一感染检出率为58.8%(137/233),多亚型HPV混合感染检出率为27.9%(65/233)。

CINⅠ组中检出率前4位的亚型分别为HPV16 19.2%(25/130)、HPV52 18.5%(24/130)、HPV58 16.9%(22/130)、HPV18 10.0%(13/130),CINⅡ组中检出率前4位的亚型分别为HPV16 23.7%(14/59)、HPV52 20.3%(12/59)、HPV51 16.9%(10/59)、HPV58 15.3%(9/59),CINⅢ组中检出率前4位的亚型分别为HPV16 52.8%(19/36)、HPV52 16.7%(6/36)、HPV58 16.7%(6/36)、HPV31 8.3%(3/36),原位腺癌组中检出率前4位的亚型分别为HPV16 25.0%(2/8)、HPV18 25.0%(2/8)、HPV31 12.5%(1/8)、HPV52 12.5%(1/8)。

2.2 HPV定量分析结果

HSIL组(125.53 copies/10000 cells)的HR-HPV负荷量明显高于LSIL组(103.85 copies/10000 cells),差异有统计学意义(Z=-2.483,P=0.013)。

CIN Ⅰ组(103.85 copies/10000 cells)、CINⅡ组(121.25 copies/10000 cells)和CINⅢ组(132.54 copies/10000 cells)HR-HPV负荷量呈递增趋势，差异有统计学意义(H=6.846,P=0.033)。成对比较中，CIN Ⅲ组病毒负荷量显著高于CIN Ⅰ组(P=0.019),CIN Ⅰ组与CIN Ⅱ组病毒负荷量无显著差异(P=0.087),CIN Ⅱ组与CIN Ⅲ组病毒负荷量无显著差异(P=0.409);CIN Ⅰ组、CIN Ⅱ组及CIN Ⅲ组病毒负荷量呈递增趋势，差异有统计学意义(rs=0.175,P=0.009)。

3、讨论

子宫颈癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，我国每年新发病例为13.15万，占全球子宫颈癌新发病例总数的28.8%[2]。1977年德国学者Harald在宫颈癌标本中发现了HPV,并首次提出HPV与宫颈癌发病存在关联[3]。目前，大量的流行病学、临床病理学以及分子生物学的研究资料均证实了这种相关性，并确定HR-HPV感染是宫颈癌及癌前病变的主要原因[4,5],这也是HR-HPV可用于宫颈癌筛查的理论基础。

与液基细胞学相比，HPV-DNA检测宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)及其相关病变的敏感度(接近100%)较高，特异性较低(68%～96%),但其阴性预测值很高，即HPV-DNA检测阴性时，被检测者患有CINⅡ/Ⅲ的可能性几乎为零[6]。程倩[7]研究发现宫颈癌前病变患者中CINⅠ级、CINⅡ级、CIN Ⅲ级HPV阳性检出率分别为80.5%、90.84%、96.44%,本研究结果显示CINⅠ组HPV检出率82.3%,CINⅡ组HPV检出率94.9%,CIN Ⅲ组HPV检出率97.2%,与程倩的研究结果基本相符。因此，HR-HPV检测作为宫颈癌一线筛查手段有一定的实用性。该研究发现HPV16是检出率最高的亚型(25.3%),也与文献[7]报道相符。

目前HR-HPV负荷量与不同程度宫颈病变的关系尚存在较大争议。部分研究结果显示随着宫颈病变程度的逐渐加重，HPV负荷量逐渐升高[8,9,10,11]。Long等[12]研究认为HPV-16型、58型和33型的病毒载量与宫颈癌前病变的严重程度有关。部分学者则认为二者之间无必然联系，宫颈病变进展与HPV病毒复制无关，仅与HPV病毒与宿主鳞状上皮细胞整合有关[13,14,15]。Ivanov等[16]研究发现高级别病变风险与HR-HPV基因型或病毒载量也无相关性。本研究发现，HSIL组病毒负荷量明显高于LSIL组，CINⅠ组、CINⅡ组及CINⅢ组病毒负荷量呈递增趋势，且差异有统计学意义，其中CINⅢ组病毒负荷量显著高于CINⅠ组，以上结果提示高病毒负荷量与宫颈病变关系非常密切，高病毒负荷量可能会促进宫颈病变的进展及宫颈癌的发生。而CINⅠ组与CINⅡ组、CINⅡ组与CINⅢ组之间病毒负荷量逐级增加，但差异无统计学意义，这可能与CIN Ⅱ组和CIN Ⅲ组样本量较少有关。

尽管研究者之间的结果有差异，但普遍认为高病毒负荷量与宫颈病变程度或病变进展之间关系密切，应当将这类患者纳入高风险人群，予以特别的关注，必要时进行相应的检查或密切随访。此外，宫颈腺癌作为宫颈癌的一种特殊病理类型，约占宫颈癌的5%[17]。在WHO第五版分类中，将宫颈腺癌分为HPV相关性宫颈腺癌和非HPV相关性宫颈腺癌两类。研究发现[18],宫颈腺癌中HPV相关性腺癌HPV感染率为94.4%,其中HPV16为33.7%,HPV18为45.5%,HPV16或HPV18混合感染为11.9%,HPV16、HPV18及其混合总感染率为91.1%,而HPV35、HPV53、HPV59这3种单一感染在腺癌中比较少见，非HPV相关性腺癌中HPV感染率为0。由此可见，HPV相关性宫颈腺癌占比明显高于非HPV相关性宫颈腺癌，宫颈腺癌发病与HPV感染紧密相关。有文献[19]报导宫颈腺癌较鳞癌更易发生深间质浸润或淋巴结转移，对放化疗的敏感性明显低于宫颈鳞状细胞癌，临床治疗效果不理想，术后复发率较高，总体预后差，其生存率也显著低于宫颈鳞状细胞癌。近些年，宫颈腺癌在宫颈癌中的占比及发病率正逐年上升，发病年龄也趋于年轻化，对此需要更加重视，并及时明确诊断给予相应治疗。

HR-HPV感染与宫颈癌前病变的发生关系密切，HR-HPV负荷量检测可作为宫颈癌前病变、宫颈癌筛查及病情追踪监测的一项客观指标。

参考文献:

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[18]胡惠珍.WHO第五版分类下宫颈腺癌HPV感染､基因分型及其免疫表型研究[D].广州:广州医科大学,2021.

文章来源:翟嘉怡,谷丽娟,范永红,等.高危型人乳头瘤病毒负荷量与宫颈癌前病变的相关性分析[J].河北北方学院学报(自然科学版),2024,40(10):11-13+19.