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AS患者HLA-B27基因分型及临床特征分析

2020-10-17 912 上传者：管理员

摘要：目的：探讨强直性脊柱炎（AS）患者基本特征以及人类白细胞抗原B27(HLA-B27)基因分型检测的临床意义。方法：收集中日友好医院2018年1月～2019年12月间确诊的AS患者资料，对其外周血样本进行核酸提取，荧光定量PCR染料法检测HLA-B27基因及分型。结果：287例AS患者中HLA-B27基因阳性占82.9%;AS家族史患者占16.0%（一级亲属占14.3%，二级亲属占1.7%）；伴发葡萄膜炎10.1%。238例HLA-B27基因阳性AS患者中HLA-B2704亚型占55.0%,HLA-B2705亚型42.4%,HLA-B2702亚型0.8%;HLA-B2704*HLA-B2705复合杂合子1.3%,HLA-B2705*HLA-B2708复合杂合子0.4%。男性AS患者就诊年龄、发病年龄显著早于女性AS患者（P<0.05;P<0.01）。HLA-B27基因阳性AS患者发病年龄显著早于HLA-B27基因阴性AS患者（P<0.05）。HLA-B2705亚型AS患者伴发葡萄膜炎比例显著高于HLA-B2704亚型AS患者（P<0.05）。结论：男性、HLA-B27基因阳性AS患者发病年龄较早，HLA-B2705亚型AS患者更易伴发葡萄膜炎。

关键词：
人类白细胞抗原B27
基因亚型
强直性脊柱炎
炎症疾病
风湿免疫
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强直性脊柱炎是一种慢性进展的自身免疫性炎症疾病，以中轴关节慢性炎症为主，主要侵犯骶髂关节、脊柱骨突、脊柱旁软组织，同时伴发下肢大关节等外周关节以及关节外表现，如前葡萄膜炎、溃疡性结肠炎、肺纤维化等，严重者可发生脊柱畸形和强直[1]。我国AS患病率在0.2%～0.3%，约有400～500万的AS患者。AS发病隐匿，早期骶髂关节炎影像学病变程度通常达不到诊断标准[2]，临床表现也并非特异性，极易造成误诊，严重影响患者的治疗、预后以及生活质量。目前，AS病因尚不明确。有多项研究表明，其发病机制与遗传、免疫、环境等密切相关[3,4]。90%的AS患者人类白细胞抗原B27(HLA-B27）基因检测为阳性，正常人群中只有4%～7%左右，HLA-B27与AS发病密切相关[5]。本研究分析AS患者HLA-B27基因分型特点及相关临床特征，以期为临床诊疗提供指导及依据。

1、对象与方法

1.1研究对象

纳入2018年1月～2019年12月中日友好医院骨科、风湿免疫科等确诊的287例AS患者，其中男225例、女62例；就诊年龄8～83岁，中位年龄36岁。AS纳入标准：符合美国风湿病协会（AmericanRheumatologyAssociation,ARA)1984年修订的纽约标准，且具备临床资料及影像学检查。排除标准：有其他自身免疫性疾病患者；合并感染性疾病患者；合并恶性肿瘤等消耗性疾病患者；孕期及哺乳期女性。以上所有患者或其监护人均签署知情同意书。

1.2研究方法

收集及记录287例AS患者的基本资料（性别、就诊年龄、发病年龄、平均病程、有无AS家族史、有无葡萄膜炎）；清晨采集患者空腹状态下静脉血2ml，乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）抗凝，采集后立即混匀，用于外周血核酸的制备提取。

1.3检测方法

核酸制备提取：采用天隆科技公司Ex-DNA全血提取试剂盒，按照说明书要求与步骤提取核酸，并采用Nanodrop1000微量分光光度计测定每份核酸的浓度和纯度。

HLA-B27基因分型检测：采用天津市秀鹏生物技术开发有限公司HLA-B27基因分型测定试剂盒对上述核酸进行基因分型检测。PCR循环参数：96℃2min;96℃20s,68℃1min，循环5次96℃20s,65℃50s,72℃45s，循环10次；96℃20s,62℃50s,72℃45s，循环15次；72℃2min;ABI7500荧光定量PCR分析仪进行熔解曲线分析，得出HLA-B27基因分型结果。

1.4统计学方法

采用SPSS22.0软件对数据进行统计学分析。计量资料以表示，组间比较采用t检验；计数资料以率表示，组间比较采用卡方检验。

2、结果

2.1AS患者的临床特征

287例AS患者，男225例，女62例，男女比例约为3.6:1；就诊年龄8～83岁，发病年龄（27.3±12.4）岁，病程（11.7±9.8）年；HLA-B27基因阳性238例（82.9%),HLA-B27基因阴性49例（17.1%);AS家族史患者共46例（16.0%），其中一级亲属41例（14.3%），二级亲属5例（1.7%）；伴发葡萄膜炎的AS患者共29例（10.1%）。

表1示，男性AS患者就诊年龄、发病年龄明显早于女性AS患者，差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01),HLA-B27基因阳性比例、病程、AS家族史、伴发葡萄膜炎两组比较差异无统计学意义（均P>0.05）。

2.2HLA-B27基因阳性与阴性AS患者的特征

表2示，HLA-B27基因阳性AS患者发病年龄明显早于HLA-B27基因阴性AS患者，差异有统计学意义（P<0.05）；性别构成比、就诊年龄、病程、AS家族史、伴发葡萄膜炎两组比较差异均无统计学意义（均P>0.05），但是HLA-B27基因阳性患者AS家族史、伴发葡萄膜炎比例高于阴性组。

2.3HLA-B2704亚型、HLA-B2705亚型AS患者的比较

238例HLA-B27基因阳性AS患者进一步基因分型检测，HLA-B2704型131例（55.0%),HLA-B2705型101例（42.4%),HLA-B2702型2例（0.8%);HLA-B2704*HLA-B2705复合杂合子3例（1.3%),HLA-B2705*HLA-B2708复合杂合子1例（0.4%）。表3示，HLA-B2704和HLA-B2705亚型组AS患者伴发葡萄膜炎的差异有统计学意义（P<0.05），就诊年龄、发病年龄、病程、AS家族史两组间差异均无统计学意义（均P>0.05）。

表1男性和女性AS患者基本特征比较

表2HLA-B27基因阳性、阴性AS患者的比较

表3HLA-B2704、HLA-B2705亚型AS患者的比较

3、讨论

自1973年Brewerton和Schlosstein首次报道HLA-B27与AS相关，HLA-B27是目前已知与AS关联最强的基因。因此，分析和研究HLA-B27基因亚型分布及其相关临床特征，对于AS早期诊断及预后有很大意义。

3.1AS患者临床特征分析

本组研究中，男女AS患者比例约为3.6:1，男性占比78.4%(225/287），男性患者就诊年龄、发病年龄均显著早于女性患者。很多早期AS文献报道男女比例可达7～10:1，原因可能与纳入研究的患者的民族和人种有关，据我们目前的资料和相关研究发现，造成此差异更重要的原因在于女性患者病情相对较轻，起病较为隐匿，炎性腰背痛等症状往往不明显，导致女性确诊AS比男性更有难度，误诊率、延误率较高。本研究中患者平均发病年龄（27.3±12.4）岁，与国内其余文献报道及队列研究相符合[6]；有AS家族史患者占16%，其中一级亲属占比重更大；在2015年的一项Meta分析中，约有25.8%的AS患者伴发葡萄膜炎[7]，在本次研究中葡萄膜炎发生率为10.1%，与国内冀肖健[6]研究结果相符，葡萄膜炎发生率与纳入研究的患者HLA-B27基因亚型相关。

3.2HLA-B27基因阳性与阴性AS患者基本特征比较

HLA-B27位于人类第6号染色体短臂上，包含8个外显子和7个内含子，存在多个等位基因，各亚型具备不同的流行病学特征以及与疾病的关系，且在不同国家、不同种族中HLA-B27各亚型频率也不尽相同[8]。国外一项单中心研究AS患者疾病特征的回顾性分析[9]中发现HLA-B27阳性率为79%，与本研究中AS患者HLA-B27基因阳性率82.9%(238/287）相符。HLA-B27基因阳性AS患者发病年龄显著早于HLA-B27基因阴性AS患者（P<0.05),HLA-B27基因阳性患者AS家族史比例高于阴性组，伴发葡萄膜炎比例为阴性组3倍左右，虽然后两项指标的差异无统计学意义，也提示我们HLA-B27基因阳性AS患者较阴性患者发病更早、临床症状更复杂。

3.3HLA-B2704、HLA-B2705亚型AS患者伴发葡萄膜炎的比较

有研究表明，HLA-B2705亚型几乎见于所有人种，HLA-B2704亚型主要见于中国汉族人群，并且为优势亚型[10],HLA-B2706亚型和HLA-B2709亚型为保护性亚型。本研究中HLA-B2704亚型55.0%(131/238),HLA-B2705亚型42.4%(101/238），罕见型别HLA-B2702型检出2例，HLA-B2704*HLA-B2705复合杂合子3例，HLA-B2705*HLA-B2708复合杂合子1例，与国内外相关研究基本相符，因样本量偏小，基本特征等暂时无法进行统计学分析比较。

葡萄膜炎是AS患者最易伴发的关节外表现，病情复发频繁，大量文献都曾证实HLA-B27基因与葡萄膜炎有很强的相关性，我们的数据也证实了HLA-B27基因阳性AS患者伴发葡萄膜炎比例高于阴性组患者。另外，我们在HLA-B27基因亚型分析中发现HLA-B2705亚型AS患者更易伴发葡萄膜炎。

本研究尚存在一些不足，例如复合杂合子样本量偏小，未进一步对基因亚型与临床特征进行相关性分析，待后续研究继续扩大样本量。本研究表明，对AS患者在进行HLA-B27基因检测的基础上，更应该在亚型水平上进一步分型，对疾病的诊断、关节外病变的早期防治有更大的价值。

参考文献：

[1]中华医学会风湿病学分会.强直性脊柱炎诊断及治疗指南[J].中华风湿病学杂志,2010,14(8):557-559.

[2]王炎焱,黄烽.2009年国际脊柱关节炎协会提出的中轴脊柱关节炎分类标准过时了吗[J]?中华内科杂志,2016,11,55(11):825-828.

[6]冀肖健,朱剑,黄烽,等.基于脊柱关节炎智能移动管理系统的队列研究:449例强直性脊柱炎患者基线期临床数据分析[J].中华风湿病学杂志,2016,20(10):669-674.

刘倩,马亮,岳德波,刘辉,姜永玮,徐英春.强直性脊柱炎患者HLA-B27基因分型及临床特征分析[J].中日友好医院学报,2020,34(05):271-273+278.