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隐球菌荚膜抗原胶体金法在隐球菌脑膜炎中的价值

2025-02-06 35 上传者：管理员

摘要：目的探讨隐球菌荚膜抗原（CrAg）胶体金法（RT）在隐球菌脑膜炎（CM）中的诊断价值。方法将我院收治的90例脑膜炎患者为研究对象，采集其脑脊液样本，分别以RT和乳胶凝集法（LAT）检测CrAg，同时行隐球菌墨汁涂片镜检和脑脊液真菌培养。统计各种诊断方法对CM阳性的检出情况，基于脑脊液或脑组织病原学检查金标准，评价对CM的诊断效能。结果 CrAg-RT诊断CM 29例、非CM61例，基于金标准，诊断灵敏度为90.32%，特异度为98.31%，准确率为95.56%。CrAg-LAT诊断CM 31例、非CM 59例，基于金标准，诊断灵敏度为93.55%，特异度为96.61%，准确率为95.56%。隐球菌墨汁涂片镜检诊断CM 15例、非CM 75例，基于金标准，诊断灵敏度为48.39%，特异度为100.0%，准确率为82.22%。脑脊液真菌培养诊断CM 25例、非CM 65例，基于金标准，诊断灵敏度为80.65%，特异度为100.0%，准确率为93.33%。CrAg-RT、CrAg-LAT、脑脊液真菌培养诊断CM的灵敏度与准确率均高于隐球菌墨汁涂片镜检，比较差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论 CrAg-RT对CM具有较高的诊断效能，灵敏度高于隐球菌墨汁涂片镜检，准确率与CrAg-LAT和脑脊液真菌培养相当，可作为CM的早期诊断方法。

关键词：
CM
抗原胶体金法
诊断价值
隐球菌脑膜炎
隐球菌荚膜
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隐球菌脑膜炎(CM)是一种由新型隐球菌引起的颅内感染性疾病,临床治疗棘手,病死率高,早期有效治疗是改善预后的关键｡但是,本病临床症状不典型,特别是早期缺乏特异性表现,与细菌､病毒等其他类型致病微生物引起的脑膜炎存在相似性,但不同类型脑膜炎临床治疗存在差异,因此准确鉴别诊断CM十分关键｡CM诊断主要依靠实验室检查,传统方法不仅操作繁琐､诊断耗时,而且存在较高的假阴性率,容易延误治疗时机｡隐球菌外包围一层主要成分为多糖的荚膜,荚膜多糖抗原可以与抗体结合,为临床诊断本病提供了新方法｡目前,基于隐球菌荚膜抗原(CrAg)的检测技术主要包括胶体金法(RT)和乳胶凝集法(LAT)两种检测方法[1]｡其中,RT利用免疫层析技术,操作简单快捷,而且可以检测新型隐球菌全部分型｡本文现以我院近年收治的脑膜炎患者为例,探究此法诊断CM的临床效能,报告如下｡

1、资料与方法

1.1临床资料选取2022年10月—2023年10月我院收治的90例脑膜炎患者为研究对象｡纳入标准:(1)以感染症状､脑膜刺激征､颅内压增高为临床表现,或伴有肢体运动障碍､癫痫等症,经脑脊液或脑组织病原学检查,确诊为脑膜炎并明确病原体类型｡(2)同时接受RT和LAT检测CrAg,并行隐球菌墨汁涂片镜检和脑脊液真菌培养,诊断资料完整齐全｡(3)年龄≥18周岁｡(4)本研究获伦理委员会审批通过,患者签署知情同意书｡排除标准:(1)其他类型真菌性脑膜炎｡(2)依从性差,无法配合诊断及研究｡(3)各项检查中的任意两项检查时间间隔超过48h｡其中,男性48例,女性42例;年龄23~74岁,平均(47.64±5.33)岁;病理类型:CM31例,非CM59例(包括细菌性脑膜炎25例､结核性脑膜炎18例､病毒性脑膜炎14例､寄生虫性脑膜炎2例)｡

1.2方法患者于局部浸润麻醉下行腰椎穿刺术,病情危重､颅内压增高严重､有脑疝危象者于全麻下行脑室穿刺术,获取足量脑脊液标本,取样操作及脑脊液送检全程严格遵循无菌化原则｡CrAg-RT检测:取脑脊液标本0.5ml,常规上机离心,离心速率3000r/min,时间10min｡检测使用美国Immy公司的隐球菌荚膜抗原检测试剂盒,取洁净无菌的反应试管,先后滴加样本稀释液0.05ml和脑脊液样本40μl,充分混匀后插入胶体金试条,室温22~24℃下孵育10min后判读结果｡CrAg-LAT检测:检测使用美国Immy的隐球菌抗原乳胶检测系统,取100μl脑脊液标本,先以温箱孵育进行预处理,温度100℃,时间5min,加入分离环(带有环状玻片),再另取2个分离环,分别加入隐球菌抗原阳性与阴性对照各25μl,再在3个分离环中各自加入隐球菌乳胶25μl,室温下手摇5min充分混合后判读结果｡隐球菌墨汁涂片镜检:取脑脊液标本1ml,上机离心,方法同CrAg-RT检测,取底层沉淀,使用印度墨汁(DZ0039)作为黑色背景,将其与脑脊液沉淀物充分混合,制薄层涂片于显微镜下观察,阳性可见隐球菌外圈透亮荚膜或有出芽｡脑脊液真菌培养:将脑脊液标本接种于专用真菌血培养瓶中,使用BTBlockchain系列全自动血培养系统进行培养,阳性瓶接种采用沙氏葡萄糖琼脂培养基,37℃下培养1周后,以布鲁克solariXXR质谱仪进行菌种鉴定｡

1.3观察指标与评价标准统计各种诊断方法对CM阳性的检出情况,基于金标准评价各方法诊断CM的临床效能｡CM诊断金标准:脑脊液真菌培养隐球菌阳性和(或)隐球菌墨汁涂片镜检阳性,或脑组织病理见隐球菌｡临床效能基于灵敏度､特异度与准确率3项进行评价,灵敏度=研究方法与金标准同时诊断为CM/金标准诊断CM×100%,特异度=研究方法与金标准同时诊断为非CM/金标准诊断非CM×100%,准确率=(研究方法与金标准同时诊断为MC+同时诊断为非CM)(/金标准诊断CM+非CM)×100%｡

1.4统计学处理采用SPSS22.0统计学软件处理数据,计量资料以均数±标准差(x±s)表示,结果t检验,计数资料以百分率(%)表示,结果χ2检验,以P<0.05为差异有统计学意义｡

2、结果

CrAg-RT诊断:CM29例､非CM61例,基于金标准:误诊CM3例､非CM1例,诊断灵敏度为90.32%(28/31),特异度为98.31%(58/59),准确率为95.56%(86/90);CrAg-LAT诊断:CM31例､非CM59例,基于金标准:误诊CM2例､非CM2例,诊断灵敏度为93.55%(29/31),特异度为96.61%(57/59),准确率为95.56%(86/90);隐球菌墨汁涂片镜检诊断:CM15例､非CM75例,基于金标准:误诊CM16例､非CM无误诊,诊断灵敏度为48.39%(15/31),特异度为100.00%(59/59),准确率为82.22%(74/90);脑脊液真菌培养诊断:CM25例､非CM65例,基于金标准:误诊CM6例､非CM无误诊,诊断灵敏度为80.65%(25/31),特异度为100.00%(59/59),准确率为93.33%(84/90)｡根据计算结果,CrAg-RT､CrAg-LAT､脑脊液真菌培养诊断CM的灵敏度与准确率均高于隐球菌墨汁涂片镜检,比较差异均有统计学意义(均P<0.05);CrAg-RT､CrAg-LAT､脑脊液真菌培养3种方法诊断CM的灵敏度与准确率比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);CrAg-RT､CrAg-LAT､脑脊液真菌培养､隐球菌墨汁涂片镜检4种方法诊断CM的特异度比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)｡

3、讨论

新型隐球菌为环境腐生性真菌,在自然界中分布广泛,可以通过气溶胶(内含孢子)传播感染人类,是临床常见的条件致病性真菌,常侵犯中枢神经系统,引起CM或伴脑实质感染,根据文献报道占全部隐球菌感染的80%以上[2]｡过去认为,CM主要见于免疫功能低下群体,特别是艾滋病人高发;但近年研究显示,国内超过50%的CM患者免疫功能正常,探究本病高效诊断方法､加强疾病监控具有重要意义｡

病原学检查是临床诊断CM的传统方法,此法中以隐球菌墨汁涂片镜检较为常用｡镜检通常当日即可出结果,效率较高,但是阳性率较低,本研究中的灵敏度为48.39%,与文献报道结论相符[3]｡考虑原因可能与感染早期隐球菌数量较少､检测方法依赖脑脊液标本采集实际､存在外界干扰因素､检验人员经验与技术等有关｡脑脊液真菌培养是CM诊断金标准,但受患者病程､脑脊液中隐球菌数量等因素影响,仍存在漏诊问题｡不仅如此,真菌培养存在耗时过长的技术局限,诊断需要数日才能出报告,不利于本病的早期及时治疗｡

CrAg-RT是利用免疫层析技术检测荚膜抗原的诊断技术,此法能够以胶体金(金盐还原形成的金颗粒悬液)标记单克隆抗体,金颗粒在免疫学反应下可以与CrAg结合形成复合物,金颗粒碱性条件下表面带负电,隐球菌荚膜抗体带正电,两者结合后抗体可以通过金颗粒颜色(通常为红色)进行呈现,通过观察和对比即可发现有无隐球菌感染｡此法操作十分简便,无需使用复杂仪器设备,甚至可于床旁进行,出报告结果较两种传统检测方法均快速,最快时10min即可出结果｡而且根据试剂盒性能介绍,检测灵敏度超过96%,特异度超过98%｡本文结果显示,CrAg-RT诊断CM的灵敏度与特异度分别为90.32%和98.31%,与CrAg-LAT和真菌培养的诊断效能比较,差异均无统计学意义(均P>0.05),灵敏度优于隐球菌墨汁涂片镜检(P<0.05),与文献报道结论相符[4]｡由此可见,以CrAg-RT诊断CM的临床效能与金标准相当,同时还有效解决了金标准耗时长的问题｡而且CrAg-RT所用试剂稳定,技术要求不高,相比CrAg-LAT等方法也更加适合推广,尤其适用于CM的快速筛查｡而本文中,CrAg-LAT灵敏度低于试剂盒性能介绍的原因可能与患者处于隐球菌感染早期,CrAg滴度不高,CrAg-LAT的结果判读依赖主观判断等因素有关[5]｡因此临床以此法筛查和诊断CM时,仍需要严格按照试剂盒说明进行操作,谨慎观察,认真判读,以尽量提高准确率,更好的为临床诊断提供指导｡

综上所述,CrAg-RT对CM具有较高的诊断效能,灵敏度高于隐球菌墨汁涂片镜检,准确率与CrAg-LAT和脑脊液真菌培养相当,而且操作简易,出报告时间短,可作为CM早期诊断方法加以推广使用｡

参考文献:

[1]朱均昊,赵颖,李莉,等.隐球菌荚膜抗原胶体金免疫层析法在非HIV患者隐球菌脑膜炎诊断中的价值[J].中国感染与化疗杂志,2020,20(2):131-135.

[2]廖一群,龚骏杰,邹琴娓,等.隐球菌荚膜多糖抗原胶体金免疫层析法在隐球菌性脑膜炎诊断中的临床应用[J].赣南医学院学报,2022,42(6):605-607.

[4]魏丹丹,黄先琪,李小菊,等.隐球菌抗原-胶体金免疫层析法在隐球菌性脑膜炎和隐球菌性肺炎诊断中的应用价值[J].中华医院感染学杂志,2018,28(9):1281-1283,1444.

[5]张晓慧,陆燕飞,许雨乔,等.胶体金免疫层析法检测隐球菌荚膜抗原的诊断价值及隐球菌病患者的临床特征分析[J].国际检验医学杂志,2021,42(22):2714-2717.(收稿

文章来源:黄岳煊.隐球菌荚膜抗原胶体金法在隐球菌脑膜炎中的价值[J].中国冶金工业医学杂志,2025,42(01):16-17.