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FN-EDA在稽留流产患者绒毛组织中的表达与微血管密度的相关性研究

2025-04-22 50 上传者：管理员

摘要：目的分析稽留流产患者绒毛组织中纤粘连蛋白可变性剪切片段(FN-EDA)表达量与微血管密度的相关性｡方法纳入深圳市龙华区妇幼保健院2022年1月至2023年8月收治的稽留流产患者46例为研究组,随机选取同期人工流产患者46例为对照组｡采集研究对象的绒毛组织标本,检测FN-EDA表达量及微血管密度;比较两组研究对象的FN-EDA表达量与微血管密度的差异;分析FN-EDA表达量与微血管密度的相关性;采用受试者工作特征曲线分析FN-EDA表达量预测稽留流产的价值｡结果研究组与对照组绒毛组织FN-EDA全部为阳性,其中研究组(+++)占比(8.70%)低于对照组(82.61%),差异有统计学意义(χ2=64.061,P<0.001);研究组和对照组FN-EDA光密度值分别为0.106±0.044､0.224±0.079,微血管密度分别为8.74±0.801､13.30±2.346,差异有统计学意义(t值分别为-8.909､-17.960,P<0.001);FN-EDA光密度值与微血管密度呈正相关(r=0.474,P<0.001);FN-EDA光密度值预测稽留流产曲线下面积(AUC)为0.934,灵敏度为0.804,特异度为0.935,最佳临界值为0.146;微血管密度预测稽留流产AUC为0.972,灵敏度为0.913,特异为0.957,最佳临界值9.218｡结论稽留流产者绒毛组织FN-EDA阳性表达量低于人工流产者,FN-EDA光密度值与微血管密度正相关,FN-EDA表达量对预测稽留流产有较高价值｡

关键词：
人工流产
微血管密度
稽留流产
纤粘连蛋白
绒毛组织
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稽留流产是指胚胎或胎儿已死亡但长期稽留于宫腔内,可导致孕妇感染､大出血及凝血功能障碍等严重后果,严重危害孕妇健康[1].目前稽留流产的诱发机制尚不完全明确,且缺乏有效的预测手段,已有研究表明其发生与基因缺陷､母体疾病､免疫功能异常等因素密切相关[2G3].纤粘连蛋白(fibronectin,FN)是一种在创伤愈合､胚胎发育及免疫功能中起关键作用的高分子量糖蛋白,其序列中可变性剪切片段(extradomainA,EDA)能够增强FN对细胞分化､迁移及增殖的功能,且在胚胎发育过程中对脉管系统和血管细胞的发育至关重要,EDA片段的表达可能成为稽留流产的重要生物标志物[4].因此,本研究旨在分析稽留流产患者绒毛组织中FNGEDA的表达量,并探讨其与微血管密度之间的相关性,以期为稽留流产的预测提供依据.

1、材料与方法

1.1研究对象

纳入深圳市龙华区妇幼保健院2022年1月—2023年8月收治的稽留流产患者46例为研究组,随机选取同期本院收治的正常早孕自愿终止妊娠人工流产的患者46例为对照组.纳入标准:①孕6~12周;②年龄20~30岁;③近两年月经规则;④妊娠期间无明显的感染史;⑤无保胎治疗史;⑥研究组符合«早期妊娠稽留流产治疗专家共识»中的稽留流产诊断标准[5]:未见胎心博动,或宫腔内妊娠囊平均直径≥25mm未见胚胎,或宫腔妊娠未见卵黄囊且2周后仍未见胎心博动,或宫腔内妊娠可见卵黄囊但11天后仍未见胎心博动;⑦患者生殖器解剖结构正常;⑧对照组妊娠囊大小与孕周天数相符合,超声检查可证实胚胎存活.排除标准:①母体患者有肝､肾､心､脑等重要器官疾病者;②母体孕早期有毒物､射线接触史､家族遗传史等;③合并恶性肿瘤疾病及血液､免疫系统疾病者.本研究经深圳市龙华区妇幼保健院医学伦理委员会批准(批号:202261618).

1.2标本采集与处理

两组患者均采用负压吸宫术取出孕产物,无菌采集胎盘绒毛组织标本,剔除标本血块,采用生理盐水漂洗至样本无血色,采用10%甲醛固定,常规石蜡包埋待检.

1.3FNGEDA检测检测方法:

连续切片,切片厚度5μm,脱蜡水化,PBS冲洗,甲醛固定20~30min,室温孵育5min,磷酸盐缓冲溶液(phosphatebufferedsaline,PBS)冲洗,加入小鼠抗人波形蛋白抗体(以色列Prospec,货号:ANTG245),免疫组织化学法染色,4℃冰箱孵育12h,PBS漂洗后加入羊抗小鼠免疫球蛋白抗体(以色列Prospec,货号:1010G04),室温孵育30min,滴加显色试剂显色1min.脱水封片后,400倍光镜镜检并摄影,2名高年资医师采用双盲法独立读片.半定量判定:镜检随机选取10个视野,根据细胞胞核､胞浆染色强度,着色为阳性细胞,根据着色强度和阳性细胞百分比,参照既往研究计分方法计分,不着色计0分､浅黄计1分､棕黄计2分､棕褐计3分;着色为阳性细胞,视野内阳性细胞占比≤5%计0分､5%<阳性细胞≤25%计1分､25%<阳性细胞≤50%计2分､阳性细胞>50%计3分[6].着色强度计分与阳性细胞百分比计分两者相乘为FNGEDN半定量检测判定结果,取10个视野平均值.乘积为0分FNGEDA检测为阴性(-),1分及以上为阳性,1~2分为(+)､3~4分为(++)､5分及以上为(+++).定量判定:采用HMIASG2000图像分析系统进行定量分析,采用光密度值代表染色强度,光密度值越大染色越强.每张切片随机选取10个镜检视野,由软件自动计算得出光密度值,取10个视野光密度值平均值.

1.4微血管密度检测

连续切片,5μm厚度,脱蜡水化,PBS冲洗,温孵育5min后PBS冲洗,羊血清封闭液孵育,加入1∶100浓度CD34于4℃冰箱孵育12h,PBS冲洗,加入羊抗免二抗(以色列Prospec,货号:111G035G003)室温孵育30min,辣根过氧化物酶显色.脱水封片后,200倍光镜镜检并摄影,2名高年资医师采用双盲法独立读片.结果判读:参考Weidner标准[7]计算微血管密度,选取10个200倍下视野,计算微血管染色数目,取10个视野平均值.1.5统计学方法采用SPSS26.0软件统计分析.以例数(百分数)[n(%)]表示计数资料,行卡方检验观察组间是否存在差异;以均数±标准差(x-±s)表示符合正态分布的计量资料,行独立样本t检验观察组间是否存在差异;以中位数和百分位数表示偏态分布的计量资料,行秩和检验观察组间是否存在差异;采用相关性分析探索FNGEDA表达量与微血管密度的关系;绘制受试者工作特征(receiveroperatingcharacterisGtic,ROC)曲线,探索FNGEDA表达量对稽留流产的诊断预测价值.P<0.05为有统计学意义.

2、结果

2.1两组患者一般资料表1为两组患者一般资料,两组患者年龄､孕周､体重指数､孕次､产次､孕囊直径､顶臀长､胚芽长度差异均无统计学意义,t值于-0.834~0.775之间,P>0.05.

表1两组患者一般资料比较

2.2两组患者FNGEDA表达及微血管密度比较表2为两组患者绒毛组织中FNGEDA表达及微血管密度比较结果.两组患者FNGEDA全部为阳性,在阳性分布上差异有统计学意义,其中研究组(+++)占比(8.70%)低于对照组(82.61%),χ2=64.061,P<0.05;研究组FNGEDA光密度值､微血管密度低于对照组,差异有统计学意义,t=-8.909､-17.960,P<0.05.

表2两组患者FNGEDA表达及微血管密度比较

图1为稽留流产患者与人工流产患者绒毛组织FNGEDA染色结果.稽留流产患者与人工流产患者绒毛组织均可见棕黄､棕褐着色,但人工流产患者着色更强,阳性细胞占比高于稽留流产患者(放大倍数为10×10).图2为稽留流产患者与人工流产患者绒毛组织微血管染色结果.稽留流产患者绒毛组织微血管染色数目低于人工流产患者(放大倍数为10×10).

图1两组患者绒毛组织FNGEDA染色结果

图2两组患者绒毛组织微血管密度染色结果

2.3FNGEDA表达量与微血管密度相关性

表3为两组患者FNGEDA光密度值与微血管密度相关性分析结果.FNGEDA光密度值与微血管密度呈正相关,r=0.474,P<0.001.表3FNGEDA表达量与微血管密度相关性分析结果

2.4FNGEDA表达及微血管密度对稽留流产的预测价值

图3､表4为FNGEDA光密度值及微血管密度预测稽留流产发生的ROC曲线分析结果.FNGEDA光密度值预测曲线下面积为0.934,灵敏度0.804,特异度0.935,最佳临界值0.146;微血管密度预测曲线下面积为0.972,灵敏度0.913,特异度0.957,最佳临界值9.218,均有较高的预测价值.两项联合预测,任意一项阳性时预测灵敏度1.000,特异度0.826,误诊率较高;两项均为阳性预测灵敏度0.891,特异度1.000,漏诊率较高.

图3ROC曲线图

表4ROC曲线分析结果

3、讨论

3.1稽留流产患者绒毛组织FNGEDA表达及微血管密度特征

目前有关孕妇绒毛组织FN的研究,多集中于FN类型及定性测定,未见关于孕妇绒毛组织中FNGEDA表达量的相关研究.Tran等[8]研究发现,FN的EDA片段仅见于组织型纤维连接蛋白中,在大多数成熟的正常组织中一般不存在,多见于胚胎组织､恶性肿瘤组织FN中.本研究证实上述研究结果,稽留流产患者与人工流产者中FNGEDA均为阳性表达,提示FNGEDA参与了胚胎组织的增殖.但稽留流产患者FNGEDA阳性表达量低于人工流产者,FNGEDA表达量过低或是稽留流产发生的相关因素之一.胎盘组织微血管对胚胎的正常发育至关重要,胎儿生长发育依赖胎盘获取营养物质[9].植枝福等[10]研究发现,稽留流产患者中绒毛组织的微血管密度低于人工流产者平均水平,这一结果在Arpita等[11]的研究中得到证实,稽留流产患者胎盘血管网络发育不良,微血管密度偏低.本研究与上述研究结果一致,稽留流产组患者绒毛组织微血管密度为8.74±0.801,人工流产患者绒毛组织微血管密度为13.30±2.346,稽留流产患者平均水平低于人工流产患者,微血管密度过低或是稽留流产发生的相关诱因.

3.2微血管密度与绒毛组织FNGEDA表达量的相关性

绒毛组织微血管发育受多种生长因子及基因的影响,目前未见关于FNGEDA表达量与绒毛组织微血管密度相关性的研究报道.Longstreth等[12]研究中发现,FNGEDA有促进细胞铺展与迁移的作用,在肝纤维化发生过程中有促进内皮细胞的血管增生功能.杨姗姗等[13]研究指出,FNGEDA在血管增生和血管重构中具有促进作用.本研究结果显示,绒毛组织微血管密度与FNGEDA光密度值呈正相关关系,这一结果或可提示FNGEDA参与了绒毛组织微血管生长,FNGEDA片段含量过低是绒毛组织微血管发育不良的相关因素.在孕早期胎盘血管网建立时,FN参与了绒毛组织分化重塑为微血管网的过程,EDA片断具有促进细胞增殖建立微血管网的功能,FNGEDA过低时,会导致胎盘微血管网分化建立过程中受到阻碍,导致胎盘微血管发育不良[14G15].

3.3FNGEDA表达量及微血管密度对稽留流产的预测价值

目前,未见关于FNGEDA表达量与稽留流产相关性的研究,仅见FN与分娩关系的相关报道.Asiegbu等[16]研究中发现,早产孕妇相较于正常孕妇,阴道分泌物中的FN浓度显著升高,FN高表达可提示早产风险.李小叶等[17]研究发现,FN阴性表达提示早产危险较低.但本研究中,提示FNGEDA低表达提示有更高的稽留流产风险.分析其原因,与本研究和上述研究所采集的标本来源不同有关.上述研究采集阴道分泌物标本,当发生羊膜破裂､绒毛膜剥离等原因时,FN进入阴道分泌物中,导致早产及自然流产孕妇FN水平高于正常孕妇[18].而本研究使用孕产物采集胎盘绒毛组织标本,FNGEDA片段非来自于羊膜破裂､羊膜炎等原因所致的异常溢出.

早期流产筛查相关研究报道显示,超声检测､凝血指标､DG二聚体及孕酮等激素检测对筛查早期流产有较高的价值[19G20].但上述指标大多作为结局指标,提示受检者近期的流产风险或诊断是否已发生稽留流产.本研究结果显示,绒毛组织中的FNGEDA及微血管密度预测稽留流产的均有较高的灵敏度和特异度,可作为稽留流产的标志物,稽留流产的发生或与FNGEDA表达量､微血管密度过低相关.分析其原因,绒毛组织是胎儿血液与母血进行物质交换的场所,是胎儿正常发育的关键[21].绒毛微血管密度不足可导致胎儿无法从母血中获取足够的氧､营养物质及免疫因子等必需物质,导致胎儿发育受限甚至死亡,造成死胎､流产等不良结局[22].而在FNGEDA除了与胎盘微血管网的发育相关外,还有助于胎盘和子宫间的紧密结合.本研究结果提示,早期流产及稽留流产或与绒毛组织的FNGEDA表达量､微血管密度偏低相关,通过绒毛组织FNGEDA表达量､微血管密度筛查或可预测稽留流产风险,并为预防治疗稽留流产提供参考.

综上所述,FNGEDA在稽留流产与人工流产者绒毛组织中为阳性表达,稽留流产者绒毛组织FNGEDA阳性表达量低于人工流产者,绒毛组织微血管密度与FNGEDA表达量显著正相关,FNGEDA过低可导致胎盘微血管系统发育不足,胚胎无法获取足够的营养,导致稽留流产的发生.FNGEDA表达量过低对稽留流产风险有提示作用,对稽留流产的预测有较高价值.本研究的局限性在于,稽留流产组的标本采集于已经发生稽留流产结局的患者,检测的FNGEDA表达量和微血管密度仅能表征是否发生稽留流产,此外本研究样本量小,两个指标能否提前预测稽留流产风险及风险临界值的确定还需要进一步展开前瞻性研究及多中心研究.

参考文献:

[1]张康,李向利,蒋国庆.高通量测序技术应用于稽留流产遗传因素的分析[J].中国医药导报,2023,20(18):108G111.

[5]郑峥,顾向应,刘欣燕,等.早期妊娠稽留流产治疗专家共识[J].中国实用妇科与产科杂志,2020,36(1):70G73.

[7]刘竞,张兰,曾利,等.稽留流产绒毛组织中IGFG1,EGcadherin,微血管密度表达与药物治疗结果的相关性研究[J].中国妇幼健康研究,2023,34(2):74G79.

[10]植枝福,刘俐伶,杨文梅,等.绒毛中表皮生长因子受体和血管内皮生长因子的表达对早孕绒毛血管生成的影响及与稽留流产的关系[J].中华生殖与避孕杂志,2017,37(10):793G796.

[13]杨姗姗,孙桂霞,张艳夏.孕妇宫颈分泌物中胎盘α1G微球蛋白,胎儿纤维连接蛋白水平预测自发性早产价值[J].中国计划生育学杂志,2024,32(7):1653G1657.

[15]石紫云,张颖,折开娥,等.HIFG1α/VEGF在稽留流产患者绒毛组织中的表达及其与微血管密度的关系[J].现代生物医学进展,2020,20(7):1230G1235.

[17]李小叶,刘叶君,李慧,等.经阴道超声检查联合宫颈分泌物胎盘αG1微球蛋白及胎儿纤维连接蛋白预测先兆早产的价值研究[J].临床和实验医学杂志,2022,21(7):777G781.

[18]张志梅,潘振国,杨艳波,等.程控硬膜外间歇脉冲输注不同剂量右美托咪定阶梯式分娩镇痛在妊娠期高血压产妇中的应用[J].中国妇幼健康研究,2023,34(6):102G109.

[19]曹丽,相泓冰,任东方,等.阴道彩色多普勒超声在先兆流产早期诊断中的应用及与血清βGHCG,CA125水平的相关性[J].中国卫生检验杂志,2023,33(9):1095G1098.

[20]张小敏,李冰,王申.孕早期稽留流产发生影响因素及血清NetrinG1,PLGF的预测价值[J].中国计划生育学杂志,2022,30(12):2812G2815.

基金资助:深圳市龙华区医疗卫生机构科研项目(2022149);