紫杉醇缓释微球通过作用PI3KAKTp53途径对卵巢癌动物模型抑瘤效果及病理组织学的影响

2021-09-14 95 上传者：管理员

摘要：目的探究紫杉醇(paclitaxel,PTX)缓释微球对卵巢癌动物模型的治疗效果及副作用。方法皮下注射SKOV-3细胞构建卵巢癌动物模型,随机分为对照组、NC组、PTX缓释微球组和PTX组(N=10),分别给予生理盐水、不负载PTX的缓释微球、PTX缓释微球和PTX干预,比较其对肿瘤的抑制作用及副作用。结果对照组和NC组各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。PTX组和PTX缓释微球组的抑瘤率、肿瘤细胞凋亡率高于对照组和NC组,PI3K/AKT/p53通路蛋白水平低于对照组和NC组(P<0.05)。PTX组的肝和心脏损伤及骨髓抑制情况较PTX缓释微球组严重(P<0.05)。结论PTX缓释微球可能通过抑制PI3K/AKT/p53抑制卵巢癌动物模型的肿瘤生长,其作用效果与PTX溶液相当,同时可以显著减少对肝、心脏的损伤和骨髓抑制。

关键词：
卵巢癌
紫杉醇
紫杉醇缓释微球
加入收藏

卵巢癌是女性常见疾病，超过75%的卵巢癌患者5年生存率小于30%[1]。紫杉醇（paclitaxel,PTX）广泛应用于卵巢癌治疗[2],PTX可能通过抑制PI3K途径发挥抑癌作用[3]。但是临床上PTX具有过敏、骨髓抑制和器官损伤等副作用。现阶段已经有研究显示PTX缓释微球具有较好的抑癌的作用[4]。本文分析PTX缓释微球对于卵巢癌的抑制作用和副作用，为临床PTX提供依据。

一、材料与方法

1.主要实验材料：人卵巢癌细胞系SKOV-3细胞株（中国医学科学院上海细胞库）。BALB/c裸鼠（雌性，4～5周龄，SPF级，南京金陵医院）。DMEM培养基血清和抗体（Invitrogen公司，美国）。逆转录和SYBRGreenPCRMasterMixqPCR试剂盒（Roche公司，瑞士）。HE试剂盒TUNEL试剂盒（碧云天公司，中国）。抗体（Abcam公司，美国）。PVDF膜（Bio-Rad公司，美国）。显微镜（Olympus公司，日本）。

2.建模、分组和干预：小鼠右前腋下注射0.2ml的SKOV-3细胞溶液（5×105个/ml），将建模成功的小鼠分为对照组、NC组、PTX缓释微球组和PTX组，N=10。根据人和小鼠体质量比例，PTX组腹腔注射2.5mg/ml的PTX,PTX缓释微球组腹腔注射PTX缓释微球溶液6mg/ml（其中PTX为2.5mg/ml，于PTX组相同），NC组仅使用缓释微球不负载PTX，对照组给予等量的生理盐水，在第14天处死小鼠进行检测。

3.观察指标：(1)测量肿瘤体积和质量；(2)通过TUNEL染色检测凋亡率；(3)Westernblot检测肿瘤组织中PI3K、AKT和p53蛋白水平高；(4)通过HE染色检测心肌组织和肝组织损伤情况；(5)检测小鼠外周血中白细胞、红细胞和血小板水平分析骨髓抑制情况。

4.统计学处理：采用SPSS19软件行统计分析。数据以平均值±标准偏差（SD）表示，进行单因素方差分析，两两比较通过LSD-t。P<0.05为差异有统计学意义。

二、结果

1.各组肿瘤体积生长比较：干预前各组肿瘤体积均大于70mm3(P>0.05），干预后，对照组和NC组肿瘤体积和质量比较差异均无统计学意义（P>0.05）。PTX组和PTX缓释微球组低于对照组和NC组（P>0.05），但是PTX组和PTX缓释微球组间比较，差异无统计学意义（P>0.05），见表1。

表1各组肿瘤体积、质量比较

2.各组凋亡情况比较：对照组和NC组的凋亡率分别为（3.57±0.52)%vs(3.21±0.58)%,P>0.05;PTX组和PTX缓释微球组的凋亡率分别为（18.68±2.81)%vs(20.58±3.18）%，差异无统计学意义（P>0.05），但均显著高于对照组和NC组（P<0.05）。

3.各组PI3K/AKT/p53水平比较：对照组和NC组、PTX组和PTX缓释微球组的PI3K/AKT/p53水平分别比较，差异均无统计学意义（P>0.05),PTX组和PTX缓释微球组的PI3K/AKT/p53水平均高于对照组和NC组（P<0.05），见表2。

表2各组PI3K/AKT/p53水平比较

4.不同PTX干预对肝组织的影响：NC组的肝组织无明显损伤，干细胞形态、以及肝小叶肝索结构正常；PTX组的肝组织有较明显的损伤，肝细胞出现水肿，肝小叶肝索结构紊乱；PTX缓释微球组肝组织也有轻微损伤，胆肝细胞排列、肝索结构基本正常。

5.不同PTX干预对心肌组织的影响：对照组和NC组的心肌结构正长，细胞排列有序、排列紧密；PTX组的心肌出现组织有较明显的损伤，心肌水肿，排列紊乱；PTX缓释微球组细胞形态和排列基本正常。

6.不同PTX干预对骨髓抑制的影响：PTX组小鼠外周血白细胞中白细胞和血小板水明显低于对照组和NC组（P<0.05),PTX缓释微球组的白细胞和血小板水平明显高于PTX组（P<0.05），见表3。

表3各组白细胞和血小板水平比较

三、讨论

卵巢癌的治愈率低于30%,PTX可以提高了患者生存率[5]。但是PTX不溶于水，药物代谢动力学结果显示超过90%的PTX可以快速、广泛地与血浆蛋白结合，并且分布量较大，约为55μl/m2[6]。改善紫杉醇的给药方法具有现实意义。

PTX缓释微球是一种由聚合物制成的纳米载体，其直径约为10～80微米，研究显示PTX缓释微在体内具有较好的稳定性，并且具有抑制卵巢癌的作用[7]。本次结果也显示空载缓释微球对肿瘤生长无影响，而PTX缓释微球可以抑制肿瘤生长，并且其抑癌作用和对PI3K/AKT/p53的抑制作用于PTX溶液组比较无显著差异。PI3K/AKT/p53与预后有关，抑制p53不但可以提高卵巢癌对化疗的敏感性，还可以改善预后[8]。这提示PTX缓释微球对卵巢癌的椅子作用PTX溶液类似。骨髓抑制是PTX的最常见并发症之一，由于PTX缺乏靶向性且肝组织血流量较大，导致PTX的治疗过程中肝组织是主要的损伤器官之一[9]。心脏也是PTX损伤的主要靶器官，特别是对于糖尿病患者。本次研究结果显示PTX缓释微球组的肝、心肌组织损伤以及骨髓抑制情况明显较PTX组轻。一方面，PTX缓释微球减少了有毒副作用溶剂的使用，安全性更高。另一方面，纳米物质具有向肿瘤组织聚集的特性，这可在一定程度上提高靶向能力，减少其他组织中PTX浓度，减少毒副作用。

综上所述，PTX缓释微球可能通过抑制PI3K/AKTp53抑制卵巢癌动物模型的肿瘤生长，其作用效果与PTX溶液相当，同时可以显著减少副作用。PTX缓释微球对血液循环中PTX水平的影响以及在肿瘤组织中的聚集作用仍需要进一步研究。

文章来源：国春蕾,姚水平,尹学敬,焦悦.紫杉醇缓释微球通过作用PI3K/AKT/p53途径对卵巢癌动物模型抑瘤效果及病理组织学的影响[J].中国妇产科临床杂志,2021,22(05):514-515.