格列吡嗪第2代磺酰脲类口服降糖药，目前作为非胰岛素依赖型糖尿病的一线治疗药物，临床上主要用于单用饮食控制无满意效果的轻、中度非胰岛素依赖型的2型糖尿病，并且无严重糖尿病并发症的患者。格列吡嗪为钾离子通道抑制药，其作用机制是能特异性地与胰岛β细胞膜上的磺酰脲受体结合，从而使K+通道关闭，引起膜电位改变，Ca2+通道开启，升高细胞液内Ca2+浓度，促使胰岛β细胞分泌胰岛素，从而发挥降血糖作用[1,2]。本研究拟在空腹和餐后条件下，考察格列吡嗪片受试制剂(test, T)和原研参比制剂(reference, R)在健康受试者空腹和餐后情况下单次口服给药的人体生物等效性，为其临床评价和临床用药提供依据。

一、材料与方法

1 材料

药品与制剂格列吡嗪片(T),规格：每片5 mg, 批号：21033,山东鲁抗医药集团赛特有限责任公司生产；格列吡嗪片(R,商品名：Glucotrol®),规格：每片5 mg, 批号：R93091,美国Pfizer Inc.生产。格列吡嗪标准品，纯度：99.5%,批号：100281-201905,中国食品药品检定研究院提供；格列吡嗪-d11(内标),化学纯度：98%,同位素纯度：97.6%,批号：7-SDJ-115-1,加拿大Toronto Reach Chemicals(TRC)生产。

仪器Exion LC AC高效液相色谱仪、Triple Quad 4500质谱仪，均为美国AB Sciex公司产品。

2 受试者选择

本试验经长治医学院附属和平医院药物与器械临床试验伦理委员会批准(伦理批号：和医伦审字【2021】试7号，临床试验备案号：B202100082-02)。所有受试者均签署知情同意书。空腹试验共入组28例受试者，23例男性，5例女性；平均年龄为(26.90±6.35)岁；身高(168.46±7.27)cm, 体质量为(62.85±9.34)kg, 体质量指数(body mass index, BMI)为(22.04±2.01)kg·m-2;28例受试者民族均为汉族；20例受试者未婚，8例受试者已婚。餐后试验共入组28例受试者，21例男性，7例女性；平均年龄为(28.50±8.41)岁；身高为(169.39±8.60)cm, 体质量为(65.38±8.32)kg, BMI为(22.75±1.95)kg·m-2,28例受试者民族均为汉族；17例受试者未婚，9例受试者已婚，2例受试者离异。

入选标准①年龄在18～60周岁(含临界值)的受试者，男女兼有；②BMI在19.0～26.0 kg·m-2(含临界值),男性体质量应≥50.0 kg, 女性体质量应≥45.0 kg; ③筛选前2周内及试验结束后3个月内无生育计划且同意在试验期间采取有效的非药物避孕措施者。

排除标准①过敏体质，有磺胺类药物或食物过敏史，尤其对本品及辅料中任何成分过敏者；②既往有低血糖病史者；③试验前病史、体检、实验室项目及试验相关各项检查、检测异常有临床意义，临床研究医生判断认为不合格者；④有酗酒史者或入组前酒精呼气检测阳性者、嗜烟史者、药物滥用/依赖史、吸毒史等；⑤既往有心血管、肝、肾、肺部、消化道、神经等疾病病史，特别是可能影响药物吸收、分布、代谢和排泄的任何外科情况或病情，或者可能对参加试验的受试者构成危害的任何外科情况或病情；⑥筛选前3个月内参加过其他临床试验者及研究者认为不适宜进入本项试验者。

3 分组、给药方法与血样采集

本研究用单中心、随机、开放、双周期、双交叉的试验设计。本试验共纳入56例受试者，其中空腹组和餐后组各28 例，均随机分为2组(TR/RT),每周期服药1次。在服药前1 d受试者统一入住Ⅰ期研究中心病房，隔夜空腹至少10 h, 分别在空腹或食用高脂餐后用20%温糖水240 mL送服受试制剂或参比制剂 5 mg, 给药前后1 h禁止饮水，给药后1.5 h统一按照给药时间依次给予受试者20%温糖水150 mL,给药4 h后和10 h后统一进食标准供应的午餐和晚餐，2个周期之间的清洗期为5 d。

每周期在给药前0 h(给药前1 h内)和给药后空腹组0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、5.0、5.5、6.0、7.0、8.0、10.0、11.0、12.0、14.0、16.0、20.0、24.0、28.0 h共22个时间点采集静脉血；餐后组1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、9.0、10.0、11.0、12.0、16.0、20.0、24.0、28.0 h共24个时间点采集静脉血。每次采血4 mL置于含EDTA-K2抗凝剂的真空采血管中，轻柔颠倒混匀，即刻放于冰浴中。在4 ℃下，以3 000 r·min-1离心10 min, 在冰浴条件下将血浆分装为2管，置于-90 ℃～-60 ℃冰箱待测。

4 测定方法与血浆样品处理

本研究方法学建立和生物样本检测由上海凯莱英检测技术有限公司完成。

色谱条件色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6 mm×50.0 mm, 5 μm);流动相：含0.1%甲酸、10%甲醇的5 mmol·L-1甲酸铵水溶液(A)-含0.1%甲酸的50%乙腈-50%甲醇溶液(B);流速：0.5 mL·min-1;柱温：40 ℃;进样体积：5.0 μL;自动进样器温度：6 ℃。梯度洗脱程序：0～1.0 min, 65% A;1.0～2.7 min, 20% A;2.7～3.6 min, 5% A;3.6～5.0 min, 65% A。

质谱条件电喷雾离子源，正离子模式(ESI+),多反应监测；离子源温度：500 ℃;离子源喷射电压：4 500 V;雾化气(Gas 1,N2)压力：310.26 kPa; 辅助气(Gas2,N2)压力：379.21 kPa; 气帘气(N2)压力：68.95 kPa; 离子对：m/z 446.20→321.10(格列吡嗪，去簇电压：22 V,碰撞能量：22 V)和m/z 457.40→321.30(格列吡嗪-d11,去簇电压：45 V,碰撞能量：21 V)。

血浆样品处理在湿冰条件下，向96孔板中加入血浆样品50 μL,加入内标工作溶液50 μL,乙腈400 μL,涡旋混合10 min, 在4 ℃下，以3 500 r·min-1离心10 min, 取上清液120 μL至另一新的96孔板中，每孔加入乙腈-水=8∶2(v/v)480 μL,摇匀5 min, 置于自动进样器中待进样。

5 方法学考察与评价[3,4]3-4]

专属性分别取6份来源不同的健康人空白血浆，不加内标，按“血浆样品处理”项下处理样品，进样分析，得空白样品色谱图。另取空白血2份，1份加内标、1份加分析物，同法处理，得相应色谱图。在本测定条件下，格列吡嗪和格列吡嗪-d11的保留时间分别为2.26和2.25 min, 格列吡嗪和格列吡嗪-d11样品峰处无干扰，见图1。

标准曲线与定量下限取标准曲线样品(质量浓度为2.00、4.00、10.00、20.00、100.00、500.00、800.00和1 000.00 ng·mL-1),按“血浆样本处理”操作，用Analyst 1.7.0软件对色谱峰进行积分，用Watson LIMS 7.5 SP1软件计算和处理；以待测物与内标峰面积比为纵坐标(y),浓度为横坐标(x),用加权最小二乘法(w=1/x2)进行回归运算，回归方程为y=9.27×10-3x+0.75×10-3(R2=0.998 1),标准曲线的定量范围为2.00～1 000.00 ng·mL-1,在该范围内线性良好，定量下限为2.00 ng·mL-1。

图1 空白血浆加格列吡嗪(Ⅰ)和格列吡嗪-d11(Ⅱ)色谱图

精密度与回收率配制4个质量浓度(2.00、6.00、75.00、750.00 ng·mL-1)质控样品，按“血浆样品处理”项下操作，每个质量浓度平行6份，连续测定3个批次，计算测定结果批内、批间精密度最大值相对标准差(relative standard deviation, RSD)均<15%。结果表明，各质量浓度质控样品的批内、批间精密度良好。用6.00、75.00和750.00 ng·mL-1 3个质量浓度血浆质控样品进行提取回收率评价，见表 1。

基质效应取6个批次空白人血浆，分别考察低、中、高3个质量浓度(6.00、75.00和750.00 ng·mL-1)的格列吡嗪在血浆基质中存在与否时色谱峰响应比值。内标归一化基质效应因子是待测物基质效应与内标基质效应之比。结果显示，低、中、高3个质量浓度格列吡嗪与内标归一化的基质效应分别为101.0%、103.0%和99.7%,变异系数均不超过1.49%,样品测定不受基质效应影响。

表1 用液相色谱串联质谱法测定格列吡嗪在血浆中的精密度和回收率

稳定性制备低、高质量浓度的格列吡嗪血浆质控样品，所有的验证样品将在-10～-30 ℃冷冻储存至少24 h, 在室温、白光下融化，再次冷冻至少12 h, 进入下一循环，循环5次和循环3次。2种质量浓度的格列吡嗪质控样本测得浓度的平均准确度偏差均未超过±15%,在上述各种条件下稳定性良好。全血样品在室温、白光下放置2 h稳定；全血样品处理后在自动进样器6 ℃下放置166 h后稳定；人血浆-80 ℃下6次冻融循环稳定；格列吡嗪工作液在2～8 ℃下放置33 d, 在室温条件下放置21.7 h均稳定。

6 统计学处理

用药代动力学参数集(pharmacokinetics parameter set, PKPS),由Phoenix WinNonlin 8.1版本软件非房室模型计算各受试者的药代动力学参数。用生物等效性集(bioequivalence set, BES),将Cmax、AUC0-t和AUC0-∞经对数转换后进行方差分析(ANOVA)。方差分析模型中序列、药物、周期作为固定效应，受试者(序列)作为随机效应。计算Cmax、AUC0-t、AUC0-∞几何均值比率(受试制剂/参比制剂)的90%置信区间，如全部落在等效区间(80.00～125.00%)内，则判断为生物等效。同时进行双单侧t检验分析和计算参数的个体内变异系数，若受试者的AUC_%Extrap>20%,AUC0-∞不纳入分析。

二、结果

1 血药浓度-时间曲线

本研究一共筛选156例，入组56例，无脱落和剔除情况。

本次试验中空腹和餐后2组受试者均完成两周期的试验，试验期间无受试者脱落，所有受试者数据全部纳入统计分析。空腹试验28例受试者和餐后试验28例受试者单次口服格列吡嗪片受试制剂和参比制剂5 mg后，其平均血药浓度-时间曲线，见图2。

2 药代动力学参数

药代动力学参数计算采纳了28例空腹试验受试者和28例餐后试验受试者的数据。受试者服用受试制剂和参比制剂后，血浆中格列吡嗪的主要药代动力学参数，见表2。

3 生物等效性评价

格列吡嗪在空腹和餐后条件下的Cmax、AUC0-t、AUC0-∞在序列、周期和制剂间差异均无统计学意义(均P>0.05),空腹条件下Cmax、AUC0-t和AUC0-∞受试制剂与参比制剂几何均数比值及其90%置信区间分别为107.21%(102.76%～111.85%)、102.08%(99.28%～104.97%)、101.99%(99.07%～104.98%);高脂餐后条件下Cmax、AUC0-t和AUC0-∞受试制剂与参比制剂几何均数比值及其90%置信区间分别为110.55%(103.17%～118.46%)、101.99%(99.60%～104.44%)、101.95%(99.50%～104.47%)三者均落在接受范围80.00%～125.00%之内。药代动力学参数Cmax、AUC0-t和AUC0-∞双单侧t检验均P>0.05,说明受试制剂没有超过规定的参比制剂的高限和低限，接受备择假设H1:ln(0.8)

图2 空腹组和餐后组单次口服受试制剂和参比制剂后平均血药浓度-时间曲线

表2 受试者空腹和高脂餐后单次口服格列吡嗪受试制剂和参比制剂5 mg的主要药代动力学参数

4 安全性评价

在空腹条件下，所有受试者共有28例(100%,75例次)发生不良事件，共有28例(100%,61例次)发生药物不良反应。其中，受试制剂组受试者共发生26例(92.9%,36例次)不良事件，共发生26例(92.9%,30例次)药物不良反应；参比制剂组受试者中，共27例(96.4%,39例次)发生不良事件，共27例(96.4%,31例次)发生药物不良反应。

在餐后条件下，所有受试者共有27例(96.4%,73例次)发生不良事件，共有26例(92.9%,48例次)发生药物不良反应。其中，受试制剂组受试者共发生24例(85.7%,37例次)不良事件，共发生23例(82.1%,24例次)药物不良反应；参比制剂组受试者中，共24例(85.7%,36例次)发生不良事件，共22例(78.6%,24例次)发生药物不良反应。

不良事件主要表现为血葡萄糖降低，偶见脉搏异常、血压降低、血三酰甘油升高、血压升高、尿白细胞酯酶阳性和血尿酸升高。本研究试验无严重不良事件，无严重药物不良反应，无导致脱落的不良事件和药物不良反应发生。该安全性数据表明，健康成年男性和女性受试者空腹和餐后服用格列吡嗪片的安全性良好。

三、讨论

格列吡嗪具有良好的药代动力学特性，口服后在胃肠道吸收完全、迅速，血浆药物浓度达峰时间为3～4 h, 在肝代谢，其代谢产物无活性，故无或极少因蓄积而产生“低血糖症”的药物不良反应，吸收快、生物利用度高、用量小是格列吡嗪几大特点，该现象与文献[5]的报道相似。餐后给药观察到的达峰时间中位数较空腹给药缩短约1 h, 2种状态下给药AUC相似，与文献[6]报道一致。以上结果说明标准高脂餐的摄入加快了格列吡嗪吸收速度，但不影响吸收程度，可以餐后服用。本研究中餐后组与空腹组中t1/2存在很大差异，空腹组中t1/2约为5 h, 而餐后组中t1/2约为0.15 h。这说明格列吡嗪在餐后服用，能够快速参与药物代谢中，促进胰岛细胞分泌胰岛素，而使血糖在体内快速下降。本研究用快速、灵敏的液相色谱串联质谱方法用于测定人血浆中的格列吡嗪浓度，并将其应用于人体生物等效性试验，与文献[6]报道的格列吡嗪药代学研究中用高效液相色谱法相比，具有明显的专属性和灵敏性。本研究中格列吡嗪受试制剂安全性良好，与参比制剂药物不良反应发生率无统计学差异，药物不良反应主要表现为低血糖，与文献[7]的报道一致。

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[2]黄宏华.格列吡嗪治疗对糖尿病患者血糖变化､血脂情况及生活质量的影响[J].糖尿病新世界,2022,25(13):70—72.

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[5]李海燕,郝光涛,曲恒燕,等.格列吡嗪在健康人体的生物等效性[J].中国临床药理学杂志,2014,30(6):528—530.

[6]赵利萍,宋建伟.格列吡嗪片的药代动力学及相对生物利用度[J].河南职工医学院学报,2007,19(3):201-203.

[7]魏敏吉,齐慧敏,吕媛,等.格列吡嗪控释片在健康人体的生物等效性[J].中国临床药理学杂志,2007,23(5):348—352.

文章来源:郑飞浪,程林忠,李海菊,等.格列吡嗪片在中国健康受试者中的生物等效性研究[J].中国临床药理学杂志,2024,40(11):1628-1632.