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格列齐特缓释片在中国健康受试者中的生物等效性研究

2024-08-13 218 上传者：管理员

摘要：目的评价格列齐特缓释片中国健康受试者体内的生物等效性。方法采用单中心、开放、随机、单剂量、两周期、两序列给药的试验方法设计。受试者在空腹或餐后状态下口服受试制剂/参比制剂30 mg,自身交叉给药，清洗期为10 d。用液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）法测定人血浆样品中格列齐特的血药浓度；用WinNonlin软件的非房室模型对格列齐特缓释片主要药代动力学参数Cmax、AUC0-t、AUC0-∞进行分析。结果空腹组入组24例受试者，22例完成试验。空腹组中格列齐特缓释片受试制剂和参比制剂的主要药代动力学参数如下：Cmax分别为（862.48±294.48）和（902.96±259.09）ng•mL-1,AUC0-t分别为（2.60×10～4±8 930.46）和（2.50×10～4±7 573.42）h•ng•mL-1,AUC0-∞分别为（3.00×10～4±1.43×10～4）和（2.68×10～4±7 085.99） h•ng•mL-1。餐后组入组24例受试者，23例完成试验。餐后组中格列齐特缓释片受试制剂和参比制剂的主要药代动力学参数如下：Cmax分别为（1 531.74±273.49）和（1 510.87±241.08）ng•mL-1,AUC0-t分别为（2.78×10～4±9 565.89）和（2.76×10～4±9 821.43）h•ng•mL-1,AUC0-∞分别为（3.02×10～4±1.24×10～4）和（3.0×10～4±1.30×10～4）h•ng•mL-1。受试制剂与参比制剂格列齐特缓释片的Cmax、AUC0-t、AUC0-∞的几何均值比值的90%的置信区间均落在80%～125%。结论格列齐特缓释片受试制剂和参比制剂具有生物等效性。

关键词：
健康受试者
格列齐特缓释片
液相色谱-串联质谱法
生物等效性
药代动力学
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格列齐特(gliclazide)是第2代磺脲类降糖药，通过与胰岛素β细胞的磺脲受体相结合，刺激胰岛素β细胞分泌胰岛素，从而达到降低血糖的作用[1]。格列齐特缓释片由法国施维雅制药有限公司研发，用于控制饮食、运动治疗效果不佳的成人2型糖尿病患者[2-3]。本研究旨在考察中国健康成年受试者在空腹和餐后状态下，单次口服国产和进口制剂格列齐特缓释片30 mg后的药代动力学参数，评价受试制剂(test, T)和参比制剂(reference, R)格列齐特缓释片的生物等效性，并观察两制剂的安全性。

1、材料、对象与方法

1药品与仪器

R:格列齐特缓释片(商品名：达美康®),规格：每片30 mg,批号：2019590,由施维雅(天津)制药有限公司生产；T:格列齐特缓释片，规格：每片30 mg,批号：C2206301,由浙江京新药业股份有限公司生产；格列齐特对照品，纯度：100.0%,批号：1110-042A1,格列齐特-d4(内标),纯度：98.6%,批号：2150-015A4,均由加拿大TLC Pharmaceutical Standards生产。

LC-30AD液相质谱联用仪、LCMS-8050质谱仪，均为日本岛津SHIMADZU产品。

2受试者选择

本研究经南昌大学第一附属医院伦理委员会批准(伦理批号：2022临伦审187号，临床试验登记号：CTR20222767)。所有受试者均签署知情同意书。本研究空腹入组24例，平均年龄(26.25±6.50)岁，男性17例、女性7例，平均体质量(65.53±8.87) kg,平均身高(168.31±7.67) cm,平均体质量指数(body mass index, BMI) (22.00±1.97) kg·m-2,餐后组入组24例，平均年龄(23.35±3.23)岁，男性19例、女性5例，平均体质量(62.83±6.25) kg,平均身高(169.63±6.48) cm,平均BMI (21.85±1.87) kg·m-2。

入选标准[4]①年龄≥18周岁；②男性体质量≥50.0 kg,女性体质量≥45.0 kg,且要求BMI在19.0～26.0 kg·m-2;③近期无生育计划，且自愿避孕；④能与研究者良好沟通，整个研究中能遵从相关的要求。

排除标准[4]①筛选前3个月内参加过其他临床试验者；②有晕针晕血史，吞咽困难者，依从性差者，乳糖不耐受者；③过敏体质或有食物、药物过敏史者，对格列齐特或同类药物有过敏者；④筛选前15天内接种过疫苗者；⑤筛选前14 d用过任何处方、非处方药、中成药或中草药者；⑥实验室检查结果异常且经研究者判断有临床意义者。

3分组、给药方法与血样采集

本方案按单中心、开放、随机、单剂量、两周期、两序列、自身交叉、空腹或餐后状态下给药的方法设计。

将入组的受试者按照1∶1的比例随机分配至R-T或T-R的给药序列组。给药前所有受试者均需禁食至少10 h,试验当天口服T或R制剂30 mg,并用温水240 mL送服。空腹组均在空腹的状态下进行服药，餐后组需在服药前30 min内开始食用高脂餐食，并要求在30 min内食用完毕。给药前1 h至给药后1 h内禁水，4 h后进食统一标准餐，且两周期餐食保持一致，本研究的清洗期为10 d。

空腹组和餐后组的采血点均为给药0 h和给药后1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0、12.0、15.0、18.0、24.0、36.0、48.0、72.0 h,共19个采血点。每个采血点采集静脉血约4 mL,血样在4℃下，以1 700×g离心10 min,分离得血浆，血浆存储于-70℃的超低温冰箱内，供药代动力学参数的研究分析。

4测定方法

本研究方法学建立和生物样本检测由苏州国辰生物科技股份有限公司完成。

色谱条件色谱柱：C18 HP(2.1 mm×50.0 mm, 3μm),流动相：含0.1%甲酸水溶液(A)-100%乙腈(B),流速：0.40 mL·min-1,柱温：40℃,进样体积：4.0μL。梯度洗脱程序：0～0.5 min, 45%B;0.5～2.5 min, 95%B;2.5～2.6 min, 45%B。

质谱条件离子化模式为电喷雾电离(electrospray ionization, ESI),接口温度为300℃,脱溶剂管(desolvation line, DL)温度为250℃,雾化气流量：3.00 L·min-1,加热气流量：10.00 L·min-1,加热块温度：400℃,干燥气流量：10.00 L·min-1。正离子模式分析，格列齐特和格列齐特-d4(内标)的检测离子对分别的m/z324.15→127.20和m/z328.15→127.15,驻留时间均为100 ms。

血样品预处理吸取样品50.0μL(校正标样、质控样品、测试样品或空白基质)至96孔板中，加入内标溶液50.0μL(空白样品加入50%甲醇溶液50.0μL)摇匀，加入乙腈200.0μL,振荡约10 min,在约4℃下，以2 600×g离心10 min;转移上清溶液20.0μL至已加入40%乙腈380μL的96孔板中，振荡约5 min后，待进样。

5方法学考察及评价

专属性取6个不同来源的血浆空白基质，按照“血样品预处理”项处理，分别进行定量下限(lower limit of quantitation, LLOQ)水平内标物和不含内标的空白样品进行检测。结果显示，格列齐特和格列齐特-d4的保留时间均为1.58 min,见图1,表明本方法测定血浆中格列齐特的选择性较好，血浆基质对测定物和内标物的干扰满足接受标准。

标准曲线与定量下限配制10.00、20.00、50.00、100.00、400.00、1 000.00、1 600.00和2 000.00 ng·mL-1共8个质量浓度水平的标准曲线样品，按照“样品预处理”方法下处理，格列齐特与格列齐特-d4的峰面积比作为纵坐标(y),格列齐特与格列齐特-d4的质量浓度比作为横坐标(x),得到标准曲线的回归方程。格列齐特在10.00～2 000.00 ng·mL-1内，线性关系良好，其标准曲线为y=0.91x-1.00×10-3(r=0.009 6),LLOQ为10.00 ng·mL-1,定量上限(upper limit of quantitation, ULOQ)为2 000.00 ng·mL-1。

精密度和回收率制备质量浓度分别为10.00、30.00、200.00、800.00和1 500.00 ng·mL-1的质控样品，每个质量浓度平行6份样品，评估血浆中格列齐特的批内、批间精密度和准确度。批间、批内的精密度通过由质控样品的检测浓度计算得到相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)应≤15.0%(LLOQ≤20.0%);批间、批内的准确度通过相对误差百分率(relative error, RE)在±15.0%内(LLOQ应在±20.0%内),质控样品的批内与批间的精密度和准确度均符合考察。回收率在高、中、低质量浓度(1500.0、800.0和30.0 ng·mL)下进行评估，高、中、低浓度待测物的回收率分别是92.33%、94.94%和95.72%;内标物的回收率为90.3%,均不超过15.0%,符合对回收率的考察要求。结果见表1。

图1人血浆中格列齐特的色谱图

基质效应分别配制2组6个批次的高、中、低质量浓度(1 500.00、800.00和30.00 ng·mL-1)的基质样品，一组样品含基质样品，另一组是对应浓度的纯溶液。在3个质量浓度水平分别对2组样品中待测物或内标峰面积的比值进行考察，结果显示，待测物在6个批次的基质高、中、低3个质量浓度水平经内标校准后的平均基质效应分别为1.00±0.01、1.00±0.01和0.99±0.01,RSD均小于2.0%,符合基质效应的考察要求。

稳定性结果表明，格列齐特血浆样品在室温条件存储25 h稳定，在4℃下119 h稳定，在-20℃及-60℃冷冻冰箱中存储21 d稳定。-20℃及-60℃冷冻冰箱储存，室温条件下融化-冻融，循环5次稳定。

表1用液相色谱-串联质普联用法方法检测格列齐特在血浆中的准确度、精密度和回收率

6统计学处理

用WinNonlin软件8.0版中的非房室模型进行统计分析。将格列齐特的主要药代动力学参数AUC0-t、AUC0-∞、Cmax经对数转换后再进行方差分析，若上述主要参数的几何均值比的90%置信区间落在80.00%～125.00%,则判断受试制剂与参比制剂生物等效。tmax用非参数秩检验进行生物等效性的评价。

2、结果

1受试者入组与完成情况

空腹组筛选91例，入组24例，22例完成试验，1例在第1周期采集完12 h血样退出研究，1例在第1周期采集完36 h血样后退出研究。餐后组筛选57例，入组24例，23例完成试验，1例在第1周期给药前要求退出试验，未纳入数据统计集。

2血药浓度-时间曲线

受试者在服用格列齐特缓释片30 mg后的血药浓度-曲线图，见图2。

3药代动力学参数

受试者在空腹和高脂餐后，单次口服格列齐特缓释片30 mg后的主要药代动力学参数，见表2。

4生物等效性评价

将受试者空腹状态下和餐后口服格列齐特缓释片受试制剂和参比制剂后的主要药代动力学参数Cmax、AUC0-t、AUC0-∞经对数转换后的方差分析，空腹组受试制剂和参比制剂的Cmax、AUC0-t、AUC0-∞的90%置信区间分别是85.79%～102.11%、91.42%～102.12%和91.28%～102.89%,餐后组受试制剂和参比制剂的Cmax、AUC0-t、AUC0-∞的90%置信区间分别是96.89%～105.11%、98.34%～103.83%和97.61%～103.49%,均落在80.00%～125.00%内，表明两制剂在空腹和餐后状态下均具有生物等效性。

5安全性评价

空腹试验24例中共发生10例20次的不良事件，不良事件发生率为41.67%(10例/24例),1例1次不良事件的分级为“2级”,其余19次不良事件的分级为“1级”。均未对发生不良事件的受试者采取治疗措施。7例9次不良事件与试验药物的关系为“可能有关”。不良事件表现为恶心、呕吐、三酰甘油升高、血压升高，尿白细胞阳性。餐后试验23例共发生4例6次不良事件，不良事件发生率为17.39%(4例/23例)。4例6次不良事件的严重程度均为“1级”,不良事件表现为三酰甘油升高、谷丙转氨酶升高、尿白细胞等。在整个试验期间受试者在空腹和餐后情况下，口服受试制剂和参比制剂30 mg后，安全性和耐受性均为良好。

图2空腹(A)和餐后(B)状态下，受试者单次口服格列齐特缓释片受试制剂(T)或参比制剂(R)30 mg后的平均血药浓度-时间曲线

表2健康受试者空腹和餐后状态下口服格列齐特缓释片30 mg后药代动力学参数

3、讨论

本研究用液相色谱-串联质谱测法定人血浆样本中格列齐特，经方法学验证，该法具有准确度好、专属性好、线性范围良好等优点，分析结果准确可靠。本研究的试验设计参考了国家药品监督管理局药品评审中心发布的《以药动学参数为终点评价指标的化学药物仿制药人体生物等效性研究技术指导原则》[5],用两制剂、单次给药、交叉试验设计，并以主要药代动力学参数AUC0-t、AUC0-∞和Cmax为主要的分析指标。本试验结果显示：健康受试者口服格列齐特缓释片30 mg后，空腹组受试制剂和参比制剂的主要药代动力学参数Cmax、AUC0-t、AUC0-∞的90%置信区间均落在80.00%～125.00%内，表明两制剂在空腹和餐后状态下均具有生物等效性。餐后组的受试制剂和参比制剂均在6 h达到血药浓度的峰值浓度Cmax;而空腹组的受试制剂和参比分别在12 h和10 h才达到血药浓度的峰值Cmax,可见空腹组的tmax均长于餐后组，受试和参比两种制剂在餐后条件下的Cmax值均高于空腹条件下，这与ROJANASTHIEN等[6]的研究报道结果相似，提示高脂餐食对该药的代谢具有一定的影响。

参考文献:

[1]江玮,曾龙驿.磺脲类药物降糖疗效的综合评价[J].药品评价,2017,14(3):19—22.

[2]刘正平,杨雪华,陈倩倩,等.格列齐特缓释片的制备及体外释放研究[J].食品与药品,2023,25(2):178—182.

[3]杜施霖,耿文叶,童朝阳.格列齐特缓释片在比格犬体内的药动学及生物等效性[J].第二军医大学学报,2019,40(10):1162—1166.

[4]隋鑫,王文萍,李晓斌,等.盐酸特比萘芬片在中国健康受试者的生物等效性研究[J].中国临床药理学杂志,2023,39(11):1598—1602.

[5]国家药品监督管理局药品评审中心.以药动学参数为终点评价指标的化学药物仿制药人体生物等效性研究技术指导原则[EB/OL].2016-03-18 [2023-10-12].

基金资助:江西省科学技术厅基金资助项目(20232BBH80007);

文章来源:段舟萍,赵小伟,温金华,等.格列齐特缓释片在中国健康受试者中的生物等效性研究[J].中国临床药理学杂志,2024,40(15):2241-2245.