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SNHG11在膀胱尿路上皮癌细胞中的表达及临床意义

2025-06-12 47 上传者：管理员

摘要：目的探讨LncRNA-核仁小分子RNA宿主基因(SNHG)11在膀胱尿路上皮癌细胞中的表达及临床意义。方法利用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测40对膀胱尿路上皮癌患者癌组织及癌旁组织中SNHG11表达水平，并分析SNHG11在膀胱组织细胞和膀胱尿路上皮癌表型，结合RT-qPCR结果及患者的临床数据进行分析。将转染后的人膀胱尿路上皮癌细胞系5637细胞分为si-SNHG11组、si-NC组、pcDNA-NC组和pcDNA-SNHG组。RT-qPCR检测各组SNHG11表达；检测细胞增殖、迁移侵袭。结果 SNHG11在膀胱尿路上皮癌组织中高表达，且与癌旁组织表达差异有统计学意义(P<0.05)。SNHG11表达水平与生存率、死亡率密切相关(P<0.05,P<0.01)。si-NC组和si-SNHG11组SNHG11表达差异有统计学意义(P=0.005)。pcDNA-NC组和pcDNA-SNHG11组SNHG11表达差异有统计学意义(P<0.000 1)。与si-NC组比较，si-SNHG11组培养48、72 h时增殖程度显著降低(P<0.05)。与si-NC组相比，si-SNHG11组细胞迁移、侵袭能力显著降低(P<0.001)。与pcDNA-NC组比较，pcDNA-SNHG11组迁移、侵袭能力显著升高(P<0.001)。EdU试验检测结果显示，与si-NC组比较，si-SNHG11组5637细胞增殖能力显著降低(P<0.05);与pcDNA-NC组比较，pcDNA-SNHG11组5637细胞增殖能力显著增强(P<0.05)。结论 SNHG11在膀胱尿路上皮癌组织中高表达，并与患者不良预后密切相关。

关键词：
BUC
LncRNA-核仁小分子RNA宿主基因(SNHG)11
恶性肿瘤
泌尿系肿瘤
膀胱尿路上皮癌
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膀胱尿路上皮癌是源发于膀胱黏膜中的恶性肿瘤,起病隐匿,在我国居泌尿系肿瘤的首位,在欧美居第二位〔1,2〕｡其中膀胱尿路上皮癌(BUC)是最常见的病理类型,一旦入侵肌层,则易出现淋巴及全身脏器转移,造成高复发率并预后不良,因而深入研究其分子机制尤为重要｡长链非编码RNA(LncRNA)是一类缺少或者无可读框且转录本长度大于200个核苷酸的RNA｡LncRNA可调控细胞的增殖,周期及侵袭等,促进肿瘤凋亡或者增殖,在其中发挥促癌或抑癌的作用〔3〕｡LncRNA核仁小分子RNA宿主基因(SNHG)11是一种新发现的LncRNA分子,在多种恶性肿瘤的增殖､侵袭中扮演重要角色〔4,5〕,其在泌尿系肿瘤尤其BUC的研究中多数扮演癌基因的角色〔6~8〕｡本研究拟探讨SNHG11在膀胱尿路上皮癌细胞中的表达水平及临床意义｡

1、材料与方法

1.1临床材料2012年9月至2022年8月海南西部中心医院共纳入40例膀胱尿路上皮癌患者｡所有受试者术后切除组织行病理诊断为BUC,样本均由海南西部中心医院经验丰富的病理学家重新分类｡并收集膀胱肿瘤癌旁组织作为对照｡所有收集组织在液氮中冷冻并使用前储存于-80℃｡手术前接受任何治疗的患者被排除在本研究之外｡本研究经海南西部中心医院伦理委员会批准｡所有患者都提供了知情同意书｡

1.2细胞系､质粒､siRNA构建和转染膀胱尿路上皮基质细胞系SV-HUC-1和人BUC细胞系5637均购自美国典型培养物保藏中心｡上述细胞系在37℃､5%CO2的培养箱中培养｡SV-HUC-1细胞在含有10%胎牛血清(FBS)的DMEM中培养｡5637细胞在含有10%FBS的DMEM/F12中培养｡SNHG11上游引物序列:5′-TGGGAGTTGTCATGTTGGGA-3′,下游:5′-ACTCGTCACTCTTGGTCTGT-3′｡SNHG11小干扰RNA(si-SNHG11)及其阴性对照(NCsiRNA)､SNHG11过表达载体及对照空白载体获自GenePharma｡对于表达载体,使用Lipofectamine3000进行转染至5637细胞中｡转染后分组为si-SNHG11组､si-NC组､pcDNA-NC组和pcDNA-SNHG11组进行后续实验,实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)法验证沉默与过表达效果｡

1.3RNA提取和定量RT-qPCR参考制造商的说明,使用TRIzol试剂从BUC组织或细胞中分离和收集总RNA｡对于lncRNA的RT-qPCR,使用lnRcutelncRNAFirst-StrandcDNA试剂盒从总RNA制备cDNA文库｡使用SYBRGreenPCRmix通过RT-qPCR确定lncRNA表达｡RT-qPCR结果采用2-ΔΔCt方法进行表达｡

1.4细胞增殖测定购买细胞增殖和细胞毒性检测试剂盒(CCK)-8以检查SNHG11对BUC细胞增殖的影响｡首先,将转染si-SNHG11组､si-NC组的5637细胞以5×103个细胞/孔的密度重新接种到96孔板中｡然后,在0､24､48和72h测定细胞增殖｡在每个时间点收获100μl培养基,然后与10μlCCK-8试剂混合｡将板在37℃孵育2h｡通过酶标仪在450nm处检测光密度(OD)值｡

1.5细胞迁移和侵袭测定使用转染了siRNA和(或)pcDNA的5637细胞进行迁移和侵袭测定｡将细胞血清饥饿48h,并将5×104个细胞接种在TranswellChamber插入物中,未涂覆用于迁移,并以1∶20稀释的基质胶涂层用于侵袭｡5637细胞在无血清DMEM/F12在上室､下室分别填充有10%FBS的培养基｡将接种好细胞的Chamber放入37℃､5%CO2的细胞培养箱中培养48h后将细胞固定,用结晶紫染色｡染色完成后用磷酸盐缓冲液(PBS)缓慢冲洗,直至冲洗液无色｡将TranswellChamber置于显微镜下,随机选取视野,拍摄迁移或侵袭到下室膜表面的细胞图像｡采用ImageJ软件进行分析｡计数每个视野中的细胞数量取均值,比较不同组之间细胞迁移和侵袭数量的差异,评估siRNA和(或)pcDNA对5637细胞迁移和侵袭能力的影响｡

1.65-乙炔基-2脱氧尿苷(EdU)试验检测细胞增殖能力取对数生长期细胞,以每孔4×103~1×105细胞接种于96孔板中,培养至正常生长阶段｡按照EdU试剂说明书染色､洗涤｡待用染色完成后立即使用荧光倒置显微镜进行观测｡

1.7统计学分析采用GraphpadPrism5.0或SPSS20.0软件进行t检验､χ2检验｡

2、结果

2.1SNHG11在不同组织､细胞的表达5637细胞中SNHG11表达(3.70±0.39)明显高于人类膀胱尿路上皮细胞(1.09±0.08,P<0.05,P<0.0001)｡BUC癌组织SNHG11表达(3.71±0.94)显著高于癌旁膀胱组织(1.11±0.98,P<0.0001)｡

2.2SNHG11表达与膀胱尿路上皮癌临床特征相关根据SNHG11表达均值将膀胱尿路上皮癌患者分为两组:<3.71为低SNHG11表达组(n=29)和≥3.71为高SNHG11表达组(n=11)｡SNHG11表达与肿瘤直径､临床T分期､术后复发显著相关(P<0.05,P<0.001),见表1｡

表1SNHG11在膀胱尿路上皮癌组织高表达与临床､病理特征的关系(n)

2.3敲低/促进SNHG11表达影响膀胱尿路上皮癌细胞增殖､迁移和侵袭si-NC组和si-SNHG11组SNHG11表达差异有统计学意义(2.04±0.52vs3.37±0.74,P=0.005)｡pcDNA-NC组和pcDNASNHG11组SNHG11表达差异有统计学意义(2.220.42vs1.06±0.04,P<0.0001)｡与si-NC组比较,si-SNHG11组培养48､72h增殖程度显著降低(P<0.05)｡与si-NC组相比,si-SNHG11组细胞迁移､侵袭能力显著降低(P<0.001)｡与pcDNA-NC组比较,pcDNA-SNHG11组迁移､侵袭能力显著升高(P<0.001)｡与si-NC组比较,si-SNHG11组5637细胞增殖能力显著降低(104.85±2.12vs54.81±4.25,P=0.004);与pcDNA-NC组比较,pcDNASNHG11组5637细胞增殖能力显著增强(118.93±7.07vs153.68±7.01,P=0.039),见表2､图1､图2､表3｡

表2不同培养时间5637细胞OD值(x±s,n=10)

图1促进或抑制表达SNHG11后细胞侵袭､迁移(结晶紫染色,×200)

图2促进或抑制表达SNHG11后EdU试验结果(×100)

表3各组侵袭､迁移能力比较(x±s,个,n=10)

3、讨论

BUC是一种需要长期随访及治疗的癌症,因其可能会发生生化复发(BCR)〔9〕｡膀胱肿瘤切除术是治疗患者最优选的治疗方法之一〔10〕｡然而,在手术后的10年间,20%~30%的患者出现生化复发〔11〕｡幸运的是,可以在出现局部复发或远处转移等临床症状前检测到疾病复发〔12〕｡因此,确定BUC的预后预测因素变得越来越重要〔13〕｡许多具有极高癌症特异性的新型LncRNA可作为潜在的BUC预后生物标志物〔14〕,某些LncRNA在癌组织和体液中表达异常,其中许多LncRNA对BUC具有特异性,尤其是预后〔15,16〕｡

LncRNA中的SNHG家族在多种癌症中异常表达,可作为可靠的预后因素〔17〕｡SNHG11作为SNHG家族中的一员,已被证实是几种癌症类型的癌基因,如在前列腺癌中,SNHG11过表达与Gleason评分､临床T分期､手术边缘状态和淋巴结转移显著相关〔18〕｡SNHG11表达与胶质瘤患者总体生存率呈负相关〔19〕｡本研究结果表明,SNHG11表达可能是BUC患者预后不良的生物标志物;SNHG11下调可以抑制癌细胞的增殖率｡此外,SNHG11降低会削弱癌细胞的迁移和侵袭能力｡EdU试验也证实这一点｡综上,SNHG11表达水平升高,可促进BUC细胞的增殖､迁移和侵袭｡

参考文献:

6关欣,杨利强,徐伟杰,等.长链非编码RNA在膀胱癌发生发展中研究进展〔J〕.中国老年学杂志,2022;42(17):4383-7.

7刘建秀,袁晓斌.右美托咪定通过调控LncRNAHOXA11-AS/miR-515-5p抑制膀胱癌细胞增殖并诱导细胞凋亡〔J〕.中国老年学杂志,2022;42(4):953-8.

8亢华银,平秦榕,钟一鸣,等.长链非编码RNA在膀胱癌中的研究进展〔J〕.国际泌尿系统杂志,2018;38(5):847-50.

基金资助:海南省卫生健康行业科研项目(21A200155);

文章来源:辜祖玄,陈颖秀,曾文锋,等.SNHG11在膀胱尿路上皮癌细胞中的表达及临床意义[J].中国老年学杂志,2025,45(11):2748-2751.