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肾癌病人临床分期与外周血NK细胞活性表达的相关性研究

2020-07-09 291 上传者：管理员

摘要：目的探讨肾癌病人外周血NK细胞活性表达与临床分期的相关性。方法选取2017年9月-2018年9月新乡医学院第一附属医院收治的肾癌患者80例，另选择同期健康者40例作为对照组，分别检测其外周血中NK细胞及其活性表达情况，采用Spearman等级相关分析肾癌患者外周血NK细胞以及活化性受体NKp44与临床分期的相关性。结果Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期肾癌患者外周血中NK细胞数量显著低于对照组(P<0.05)；随着临床分期的升高，NK细胞数目逐渐降低，且不同分期的肾癌患者之间NK细胞数量比较差异均有统计学意义(P<0.05)；肾癌患者外周血中NK细胞数量与肾癌临床分期呈负相关(r=-0.561,P<0.05)；肾癌组织中NK细胞活化性受体NKp44表达明显低于癌旁肾组织，且与临床分期成负相关(r=-0.429,P<0.05)。结论肾癌患者外周血中NK细胞活性表达降低，肾癌组织中NK细胞活化性受体NKp44表达明显低于癌旁肾组织，且其表达水平与肾癌临床分期呈负相关。

关键词：
NK细胞活性
临床分期
泌尿肿瘤
活化性受体NKp44
相关性
肾癌
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肾癌是泌尿系统中致死率最高的恶性肿瘤，其发病率仅次于膀胱癌和前列腺癌[1]。目前其发病机制尚未完全阐明，也无相关的特异性生物标记物用于其早期诊断和治疗，临床上近40%的患者就诊时就已发生远处转移[2]。手术是主要的治疗手段，但50%左右的患者术后会出现复发，预后不良，且肾细胞癌对放化疗不敏感，因此目前尚缺乏有效的治疗方法[3]。随着生物和免疫学的发展，肿瘤的生物免疫治疗已成为一种新的肿瘤治疗手段。研究发现，自然杀伤细胞(NK细胞)的活性表达与一些肿瘤患者的生存率密切相关[4,5],NK细胞可参与机体的非特异性免疫，直接杀伤某些肿瘤或病毒感染的靶细胞[6]，其具有高效抗肿瘤活性和阻碍肿瘤细胞的远处扩散，还有较强的免疫调节功能[7]。研究已证实肾癌组织中有大量的NK细胞浸润[8]，因此，本研究旨在探讨肾癌患者外周血中NK细胞活性表达水平与肾癌临床分期的相关性，以期为肾癌的早期诊断及预后评估提供参考。

1、资料与方法

1.1一般资料

选取2017年9月-2018年9月新乡医学院第一附属医院收治的肾癌患者80例，其中男性48例，女性32例，年龄45～68岁，平均(52.38±5.95)岁。1期19例，2期28例，3期26例，4期7例；肾癌类型：透明细胞癌56例，颗粒细胞癌17例，混合性腺癌4例，乳头状腺癌2例，集合管癌1例。纳入标准：(1)均经病理检查诊断为肾癌；(2)入组前均未接受放、化疗及生物治疗；(4)所有研究对象均签署知情同意书。排除标准：(1)合并免疫系统疾病或服用免疫抑制剂治疗者；(2)入组前三个月内使用过激素或细胞毒性等干扰研究效果药物；(3)入组前存在严重急性炎症者。另选择同期健康者40例作为对照组，其中男性24例，女性16例，年龄44～67岁，平均(52.13±5.48)岁。两组性别、年龄比较无显著差异(P>0.05)，具有可比性。本研究已通过本院伦理委员会审批。

1.2方法

分别抽取两组研究对象空腹外周静脉血2mL，经肝素抗凝，4℃下保存，采用流式细胞仪和免疫荧光法检测外周血中NK细胞数量，由CD16和CD56标记，每个样本取外周血100μL，加入100μLPBS稀释，加入单抗(CD16+CD56)-PE抗体20μL，抗体来自美国罗氏公司，室温下避光静置20min后，加入1.5mL红细胞裂解液(北京奥维亚生物技术有限公司)，再经过室温避光10min，红细胞裂解后加入0.1%的PBS缓冲液2mL,300g下离心，清洗3次，弃上清液，加入1mL0.1%甲醛溶液固定，2h内采用流式细胞仪进行检测，流式细胞仪由美国贝克曼库尔BeckmanCoulter公司提供。

1.3统计学方法

本研究采用SPSS22.0软件完成所有数据处理，计量资料用表示，若符合正态分布，采用配对t检验，多个样本均数比较采用单因素方差分析，采用Spearman等级相关分析肾癌患者外周血NK细胞活性与临床分期的相关性，P<0.05为差异显著有统计学意义。

2、结果

2.1肾癌患者与对照组外周血NK细胞活性表达情况

肾癌患者外周血中NK细胞数量低于对照组，且随分期增加而逐渐降低，其中Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期肾癌患者外周血中NK细胞数量显著低于对照组(P<0.05)；肾癌不同分期的患者之间NK细胞数量比较差异均有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1肾癌患者与对照组外周血NK细胞活性表达情况

2.2肾癌组织中NK细胞活性表达与临床分期间的相关性

经Spearman等级相关分析显示肾癌患者外周血中NK细胞数量、NKp44受体表达与肾癌临床分期呈负相关(r=-0.561,P<0.05;r=-0.429,P<0.05)。

3、讨论

肾癌是常见的泌尿系统恶性肿瘤之一，目前其主要治疗手段是手术治疗，但术后存在较高的复发率，预后不佳。其发病机制目前尚不完全明确，有研究认为肿瘤的发生、发展与机体的免疫逃逸有关，即机体的抗肿瘤免疫效应降低引起肿瘤的发生[9]。而在机体的抗肿瘤免疫反应中，细胞免疫起主导作用，NK细胞是人体内固有的免疫细胞，同时参与天然免疫应答和适应性免疫应答[10]。研究表明其不仅能清除病毒感染，还能直接杀伤或通过分泌细胞因子杀伤肿瘤细胞，是人体对抗肿瘤的第一道天然屏障[11]。随着肿瘤免疫研究的深入，NK细胞在抗肿瘤免疫中的作用越来越受到重视。有研究[12]表明NK细胞不仅能控制肿瘤的生长和防止肿瘤的远处扩散，且其活性表达水平可能与肿瘤的临床分期及预后有密切关联。已有研究证实肾癌组织中有大量的NK细胞浸润，因此探讨肾癌患者外周血中的NK细胞活性表达情况与临床分期的关系有助于评估患者的预后。

本研究显示随着临床分期的升高，肾癌患者外周血中NK细胞数量逐渐降低，且Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期肾癌患者外周血中NK细胞数量均显著低于对照组，患者外周血中NK细胞数量与肾癌临床分期呈负相关，与以往的研究[8]结果相似。其原因可能与在杀伤肿瘤细胞的过程中，消耗了大量的NK细胞有关[13]。在肿瘤早期，NK细胞活化后发挥抗肿瘤效应，从而抑制肿瘤发展，但随着肿瘤生长及病情发展，机体免疫效应降低甚至对肿瘤细胞产生免疫耐受，抑制免疫细胞尤其是NK细胞的功能，导致免疫功能进行性下降[14,15]。

本研究对不同临床分期的肾癌患者进行分析发现，其外周血中NK细胞数量与肾癌临床分期呈负相关，即表明肾癌患者的临床分期越高，患者的免疫状态越差，这一结果提示肾癌患者外周血中NK细胞的检测对评估肿瘤恶性程度及患者的预后有重要的指导意义。NKp44受体仅在活化的NK细胞表面表达，是已活化NK细胞的特异性标志，本研究显示肾癌组织中NK细胞活化性受体NKp44表达明显低于癌旁肾组织，并与肾肿瘤临床分期成负相关，表明肾癌组织中NKp44表达水平可预测肿瘤组织中浸润NK细胞的活性和功能。

综上所述，肾癌患者外周血中NK细胞活性表达较健康人群明显降低，且随着临床分期的升高，患者外周血中NK细胞含量逐渐降低，肾癌组织中NK细胞活化性受体NKp44表达明显低于癌旁肾组织，且其活性表达与临床分期间呈负相关。

参考文献：

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