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食管癌组织中Twist1表达对患者临床病理特征及预后的影响

2024-11-22 211 上传者：管理员

摘要：目的探究食管癌(EC)组织Twist1表达对EC患者临床病理特征及预后的影响。方法选取EC患者150例作为观察组，同时选取同期正常食管非肿瘤性病变组织标本150例作为对照组。通过免疫组化法检测并比较2种组织标本中Twist1的阳性表达率，应用免疫印迹法检测2种组织中Twist基因的表达水平，并分析EC组织中Twist1的阳性表达与临床病理特征的关系。结果与正常食管非肿瘤性病变组织相比，癌组织中的Twist1阳性表达率及Twist1相对表达量均显著升高(P<0.05)。Twist1的阳性表达与EC患者的性别、年龄、肿瘤直径、病理类型以及分化程度均无关(P>0.05);在TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移以及有远处转移的患者中阳性表达率更高(P<0.05)。结论 Twist1在EC组织中呈高表达状态，与TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、淋巴结转移及远处转移具有一定相关性。检测Twist1的表达水平，有助于EC的早期诊断，同时还可为临床上判断EC患者的预后提供参考。

关键词：
EC
消化系统肿瘤
腺癌
食管癌
鳞状细胞癌
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食管癌(esophageal cancer, EC)是1种侵袭性极高的消化系统肿瘤，在世界范围内，其是第八大常见癌症，死亡率居第6位，全球总体5年生存率为15%～25%[1]。EC的临床特征是死亡率高、预后较差以及地理位置的差异[2]。EC可分为2种常见的组织学亚型：腺癌和鳞状细胞癌。鳞癌高发于东欧及亚洲，在西方国家比较少见，其主要危险因素包括吸烟、饮酒以及ALDH2杂合性。而腺癌高发于北美及西欧，其主要危险因素包括肥胖和Barrett食管[3]。目前，EC的主要治疗方法仍是手术治疗，包括食管切除术和根治性淋巴结清扫术，但外科手术具有很强的侵袭性，同时术后复发率和死亡率较高[4],且部分患者术后还可能发生局部复发或远处转移。因此，积极寻找能预测EC预后的生物标志物具有重要的临床意义。Twist1在神经胶质瘤、乳腺癌、黑色素瘤等多种癌症中异常高表达，然而Twist1过度表达会触发各种癌细胞系的上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition, EMT)和癌症干细胞(cancer stem cell, CSC)特征[5]。鉴于此，本研究将探讨EC组织Twist1表达对EC患者临床病理特征及预后的影响，现报告如下。

1、材料与方法

1.1 一般资料

选取2015年至2022年于本院确诊的150例EC患者作为观察组，其中，男性86例，女性64例；年龄35～75岁，平均年龄为(52.64±6.53)岁；肿瘤直径<4 cm 60例，≥4 cm 90例；鳞癌76例，腺癌74例；TNM分期Ⅰ期19例，Ⅱ期50例，Ⅲ期61例，Ⅳ期20例；淋巴结转移者85例，无淋巴结转移者65例；高中分化83例，低分化67例；远处转移者25例，无远处转移者125例。并选取同期正常食管非肿瘤性病变组织标本150例作为对照组，其中，男性90例，女性60例；年龄37～72岁，平均年龄为(53.07±6.58)岁；纳入标准为：①年龄在30～80岁之间；②可正常沟通及配合；③知晓此次研究并同意参加；④临床资料完整。本研究在伦理委员会批准下进行。

1.2 EC患者纳入及排除标准

1.2.1 纳入标准

①符合EC的诊断标准[6];②均接受胃镜活检采集相关组织标本；③相关检查结果显示有食管占位，经病理确诊为食管癌；④临床资料完整。

1.2.2 排除标准

①存在严重的心肺功能障碍；②同时患有其他恶性肿瘤；③接受过其他胸部手术者[7];④近3个月有放化疗或免疫治疗史；⑤伴有食管狭窄、反流性食管炎者。

1.3 方法

1.3.1 免疫组化法

取EC组织及正常食管非肿瘤性病变组织标本，依次进行固定、包埋、切片、烤片、二甲苯浸泡、脱水、抗原热修复、过氧化氢溶液室温孵育30 min以及体积分数5%山羊血清封闭2 h; 之后加入鼠抗人Twist1一抗(1∶200),4 ℃下孵育过夜；再加入二抗，室温孵育2 h; DAB显色7 min, 苏木精复染30 s; 脱水、透明、封片。随后即可观察，通过半定量法分析Twist1的阳性表达情况。

1.3.2 免疫印迹法

检测2种组织中Twist基因的表达水平。将待检组织加入到 RIPA裂解液中，将其粉碎匀浆，离心后，用蛋白提取试剂盒对细胞总蛋白进行提取，并进行蛋白定量。之后取适量蛋白，在变性5 min后，上样至10% SDS-PAGE胶中，电泳1 h, 电泳结束之后将电泳条带转至PVDF膜，冲洗、封闭后，加入一抗(1∶1000),4 ℃下孵育过夜，再次冲洗后，加入二抗(1∶5000),常温下孵育2 h, 最后，在暗室中采用ECL发光法显影定影，以GAPDH蛋白作为内参。

1.4 统计分析

采用SPSS 18.0统计软件对数据进行分析，计量资料、计数资料分别以

和n(%)表示，组间比较分别采用独立样本t检验和χ2检验。P<0.05,则差异有统计学意义。

2、结果

2.1 2组Twist1阳性表达率比较

观察组Twist1阳性表达率为74.67%(112/150),显著高于对照组的14.00 %(21/150),差异有统计学意义(χ2=111.85,P=0.000)。

2.2 2种Twist1蛋白表达量的比较

观察组Twist1相对表达量为(0.52±0.36),明显高于对照组的(0.28±0.16),差异有统计学意义(t=7.461,P=0.000)。

2.3 食管癌组织中Twist1的阳性表达与临床病理特征的关系

Twist1的阳性表达与食管癌患者的性别、年龄、肿瘤直径、病理类型以及分化程度均无关(P>0.05);在TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移以及有远处转移的患者中阳性表达率更高(P<0.05),见表1。

3、讨论

EC是一种高发病率的恶性肿瘤，目前临床上，EC的治疗技术取得了明显的进步，但患者的预后仍然不佳[8]。同时，同一临床分期的EC患者的预后也存在很大的个体差异。因此，阐明EC发生发展的分子机制，寻找能够精准预测EC患者预后的分子标志物，对于指导临床个体化治疗具有积极意义。

本研究中，与正常食管非肿瘤性病变组织相比，癌组织中Twist1阳性表达率、Twist1相对表达量均明显增加(P<0.05)。且Twist1的阳性表达与食管癌患者的性别、年龄、肿瘤直径、病理类型以及分化程度均无关(P>0.05);在TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移以及有远处转移的患者中阳性表达率更高(P<0.05)。这表明Twist1与食管癌的发生发展以及预后密切相关。分析原因可能为：在食管鳞癌组织中，Twist1与血管表皮生长因子的表达呈正相关，Twist1蛋白可调控血管表皮生长因子的表达，进而影响肿瘤血管生成，最终影响食管鳞癌的生长及转移。而Twist1过表达后，食管鳞癌细胞的侵袭能力及血管表皮生长因子-C的表达均明显升高，提示Twist1可能通过调控血管表皮生长因子-C的表达，进而促进食管鳞癌的淋巴结转移。同时，Twist1还可能通过调控ARF/p53信号通路，抑制细胞凋亡，促进癌细胞的生成，进而参与食管癌的发生和转移。此外，EMT与CSC是肿瘤转移的重要因素。CSC是指具有干细胞样特征的特定癌细胞亚群，具有自我更新能力和干性状态维持，调控肿瘤发生起始和癌细胞异质性，也是肿瘤发生转移和复发的重要原因。EMT作为CSC的主要调节因子，参与体内非CSC向CSC的转化。然而，Twist1是EMT的关键转录因子，其过表达能加速肿瘤的重编程进程，并最终导致CSC样状态。且Twist1作为一种基本的螺旋-环-螺旋转录因子，还是间充质/CSC状态的关键介质，可以将EMT与自我更新联系起来。Twist1还可刺激EMT,并在细胞外基质和细胞间粘附的调节中发挥至关重要的作用[9]。Twist1过表达可导致EMT进程中抗凋亡过程的激活，增加细胞血管生成、侵袭、迁移以及转移潜力，细胞黏附的解体、CSC样特征的维持和细胞分化的限制，最终引起患者预后不良，存活率降低[10]。已有研究指出，Twist1可通过调控Notch信号通路影响食管鳞癌的侵袭转移[11]。唐天等[12]认为Twist1在中晚期食管鳞癌组织中高表达，并与患者的放疗敏感性及预后相关，有望成为预测放疗疗效的新型标志物。Fardi Golyan等[13]提出Twist1基因可作为食管鳞状细胞癌预后的标志。杜庆胜等[14]的研究表明EC患者癌组织中Twistl阳性表达率升高，且Twistl阳性表达与临床分期晚、有淋巴结转移、预后差具有一定的相关性。Ardalan Khales等[15]的研究也表明Twistl在食管鳞癌中的表达水平与癌变进程、淋巴结转移等临床病理特征有密切联系，对预测EC患者的预后有一定的指导意义。

表1 食管癌组织中Twist1阳性表达与临床病理特征的关系(例，%)

综上所述，Twist1在食管癌组织中呈高表达状态，与TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、淋巴结转移以及远处转移具有一定相关性。临床治疗食管癌患者时，检测Twist1的表达水平，有助于食管癌的早期诊断，并对判断患者预后也具有一定的指导意义。

文章来源:袁艺,岳颖,姚晨.食管癌组织中Twist1表达对患者临床病理特征及预后的影响[J].实用癌症杂志,2024,39(11):1759-1761+1767.