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食管鳞癌患者食管Veillonella丰度特征及其与临床预后的关系探讨

2025-08-08 28 上传者：管理员

摘要：目的探讨食管鳞癌患者食管韦荣氏球菌属(Veillonella)的丰度特征及其与临床预后的关系。方法选取300份食管鳞癌及癌旁正常组织配对标本,采用定量聚合酶链式反应(qPCR)法检测其Veillonella的丰度水平,收集食管鳞癌患者的临床资料。比较食管鳞癌与癌旁正常组织Veillonella丰度；以食管鳞癌组织Veillonella丰度均值-15.46为临界值分为高Veillonella丰度组(148例)和低Veillonella丰度组(152例)。比较低Veillonella丰度组和高Veillonella丰度组的临床特征；分析食管鳞癌患者Veillonella丰度与临床特征的相关性；比较不同Veillonella丰度食管鳞癌患者5年生存率。结果食管鳞癌组织Veillonella丰度(-15.46±2.68)相较于癌旁正常组织的(-10.12±2.11)更低,差异具有统计学意义(P<0.05)。低Veillonella丰度组和高Veillonella丰度组T分期、分化水平及饮酒史比较差异具有统计学意义(P<0.05)；低Veillonella丰度组和高Veillonella丰度组淋巴结转移比较差异无统计学意义(P>0.05)。Spearman相关性分析显示：食管鳞癌组织Veillonella丰度与T分期、饮酒史呈负相关,与分化水平呈正相关(P<0.05)；食管鳞癌Veillonella丰度与淋巴结转移无相关性(P>0.05)。低Veillonella丰度组5年生存率为34.21%(52/152),低于高Veillonella丰度组的46.62%(69/148),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论食管鳞癌患者食管Veillonella的丰度水平降低,高Veillonella丰度食管鳞癌患者5年生存率更高。

关键词：
放化疗
生物学功能
食管韦荣氏球菌属
食管鳞癌
鳞癌
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我国是食管癌高发国家,据2019年国家癌症中心报告显示食管癌已成为我国第四大致死性肿瘤[1]｡鳞癌是我国食管癌的主要病理类型,尽管手术､放化疗等治疗手段日益精进,但是食管鳞癌患者的预后仍然不容乐观,总体5年生存率为30%左右[2]｡因此,积极寻找影响食管鳞癌恶性进展的风险因素,深入探索其调控食管鳞癌发生发展的分子机制是当前食管鳞癌研究的热点问题｡近年来有研究显示,菌群参与调控肿瘤的发生发展,改变肿瘤微环境,导致化疗耐药和影响免疫疗效等多个方面,受到广泛关注[3]｡因此本文对食管鳞癌患者食管Veillonella的丰度水平及其与临床预后的关系进行深入分析｡

1、材料与方法

1.1材料来源选取南京医科大学附属江苏省肿瘤医院样本库中300份食管鳞癌及癌旁正常组织配对标本,其中男性195例,女性105例;年龄平均为(58.79±8.73)岁｡本次研究已经通过南京医科大学医学伦理委员会批准｡

1.2方法根据食管鳞癌及癌旁正常组织样本编号收集患者的临床资料,包括T分期､分化水平及饮酒史､淋巴结转移情况｡采用qPCR法检测标本中Veillonella的丰度水平,将食管鳞癌及癌旁正常组织标本研磨为匀浆,选择FastDNA®SpinKitforSoil试剂盒对DNA进行提取,选择16SrDNA法对V3~V4区行聚合酶链式反应(PCR)扩增,上游引物序列为:5'-GCTCCTGCAAGCCGGCGAGCTA-3';下游引物序列为:5'-CGTCCACTAGAGTATAGAGG-3'｡PCR扩增的体系为FastPfuBuffer4μl,dNTPs2μl,FastPfuPolymerase0.4μl,ForwardPrimer0.8μl,基因组DNA10ng,之后补充双蒸水(ddH2O)至20μl｡PCR的扩增条件为:①95℃下变性5min;②95℃30s,52℃30s,72℃30s,循环30次;③72℃下延伸10min｡选择Illumina公司研发Miseq测序平台系统构建文库并测序｡采用2-△△Ct的方法计算目的基因的相对表达量｡

1.3观察指标比较食管鳞癌与癌旁正常组织Veillonella丰度;比较低Veillonella丰度组和高Veillonella丰度组的临床特征;分析食管鳞癌患者Veillonella丰度与临床特征的相关性;比较不同Veillonella丰度食管鳞癌患者5年生存率｡

1.4统计学方法选择SPSS29.0及Graphpadprism10.0软件行统计学处理｡其中计量资料选择K-S法行正态性检验,符合正态性分布则以均数±标准差(x-±s)表示,进行t检验,不符合正态性分布则以[M(P25,P75)]表示,采用Wilcoxon秩和检验;计数资料则以率(%)表示,进行χ2检验;等级资料采用秩和检验;相关性选择Spearman分析;食管鳞癌生存预后绘制Kaplan-Meier曲线｡当P<0.05时差异有统计学意义｡

2、结果

2.1食管鳞癌与癌旁正常组织Veillonella丰度比较食管鳞癌组织Veillonella丰度(-15.46±2.68)相较于癌旁正常组织的(-10.12±2.11)更低,差异具有统计学意义(P<0.05)｡见图1｡

图1食管鳞癌及癌旁正常组织Veillonella丰度

2.2低Veillonella丰度组和高Veillonella丰度组的临床特征比较以食管鳞癌组织Veillonella丰度均值-15.46为临界值分为高Veillonella丰度组(148例)和低Veillonella丰度组(152例)｡低Veillonella丰度组和高Veillonella丰度组T分期､分化水平及饮酒史比较差异具有统计学意义(P0.05)｡见表1｡

表1低Veillonella丰度组和高Veillonella丰度组的临床特征比较(n)

2.3相关性分析Spearman相关性分析显示:食管鳞癌组织Veillonella丰度与T分期､饮酒史呈负相关,与分化水平呈正相关(P0.05)｡见表2｡

表2相关性分析

2.4不同Veillonella丰度食管鳞癌患者5年生存率比较低Veillonella丰度组5年生存率为34.21%(52/152),低于高Veillonella丰度组的46.62%(69/148),差异具有统计学意义(χ2=4.800,P<0.05)｡Kaplan-Meier生存曲线见图2｡

图2不同Veillonella丰度食管鳞癌患者5年生存率Kaplan-Meier曲线

3、讨论

微生物组被称为人类的“第二基因组”｡研究估计有超过100万亿微生物寄生于人体,形成独立的“器官”｡菌群是微生物组的重要组成部分,菌群失调与人类多种疾病密切相关｡近年来不断有重磅研究发现菌群参与调控肿瘤的发生发展,改变肿瘤微环境,导致化疗耐药和影响免疫疗效等多个方面,受到广泛关注[4]｡图2不同Veillonella丰度食管鳞癌患者5年生存率Kaplan-Meier曲线在食管腺癌这一西方国家高发亚型中,已经证实食管菌群失调与Barrett食管和食管腺癌关系密切,其可能通过改变食管括约肌的功能和驱动早期的炎症反应,从而促进食管腺癌的发生和发展[5]｡不同于西方国家,亚洲食管鳞癌高发,而鳞癌相关菌群研究仍鲜有报道,仅有一项利用16SrDNA测序分析45例食管鳞癌组织中食管菌群的研究,发现雷沃氏菌属(Prevotella)和链球菌属(Streptococcus)与食管鳞癌预后相关[6]｡

Veillonella是一种属于厚壁菌门的革兰阴性菌,主要共栖于消化道和哺乳动物口腔中｡小韦荣氏球菌(V.parvula)菌株是其模式菌株,在前期研究中发现V.parvula在食管鳞癌和癌旁组织中的丰度趋势与Veillonella菌属一致[7]｡在上述研究中,对300例食管鳞癌以及癌旁正常组织Veillonella菌群丰度研究发现,食管鳞癌组织相较于癌旁正常组织更低,这个结果与作者前期结果一致｡Nomburg等[8]研究发现,对坦桑尼亚食管鳞状细胞癌进行全基因组测序和RNA测序,结果发现肿瘤组织中Veillonella菌群丰度降低,支持本次结果｡Zhang等[9]采用孟德尔随机化方法对评估肠道微生物群与食管癌之间的关系,结果提示优杆菌属(Eubacterium)､毛螺菌属(Lachnospira)､罗姆布茨菌(Romboutsia)､Veillonella四种肠道细菌与食管癌之间存在潜在的因果关系｡

本次研究在预后生存期方面,对不同Veillonella丰度的食管鳞癌患者绘制了Kaplan-Meier曲线,结果发现低Veillonella丰度组食管鳞癌患者5年生存率要低于高Veillonella丰度组｡分析原因可能为Veillonella可能通过抑制食管鳞癌细胞增殖而发挥抑癌作用,但在食管鳞癌患者中,Veillonella丰度下降导致抑癌作用降低,进而导致癌症进展[10]｡Cheung等[11]研究发现食管鳞状细胞癌存在菌群异常,而菌群生态失调与食管鳞状细胞癌预后有关｡Gao等[12]分析食管癌与肠道菌群相关性,结果显示帕氏戈登氏杆菌(Gordonibacter)､草酸杆菌属(Oxalobacter)､柯普杆菌属(Coprobacter)､Veillonella､瘤胃梭菌(Ruminiclostridium)5和1､塞内加尔分枝杆菌(Senegalimasiliagenera)､苏黎世杆菌属(Turicibacter)､氧化还原真杆菌组(Eubacteriumoxidoreducensgroup)､罗姆布茨菌(Romboutsia)和普雷沃氏菌属(Prevotella)9与食管癌预后有关｡

综上所述,食管鳞癌患者食管Veillonella丰度降低,高Veillonella丰度食管鳞癌患者5年生存率更高｡但本次研究还有局限性,因选取样本为样本库组织,下一步将开展动物实验和细胞实验进一步探究食管Veillonella在食管鳞癌中的生物学功能｡

参考文献:

[1]张江浩,万里新,尚付梅,等.高通量测序技术分析化疗对食管癌患者肠道菌群的影响及其与化疗效果的关系.中国医药,2023,18(4):536-541.

[3]刘渊杰,王帅奇.肠道菌群特征与食管癌患者术后肺部感染的关系.中国微生态学杂志,2023,35(10):1178-1181.

[10]刘晓波,高子夜,金曙,等.老年与中青年食管鳞癌患者食管菌群的宏基因组学对比研究.中华预防医学杂志,2021,55(3):371-378.

基金资助:徐州市科技项目(项目编号:KC20103);

文章来源:彭勃,魏飞,王其斌,等.食管鳞癌患者食管Veillonella丰度特征及其与临床预后的关系探讨[J].中国现代药物应用,2025,19(17):38-41.