首页 > 论文范文 > 医药卫生论文 > 基础医学论文 > 实验医学论文 > 消疳健胃合剂对便秘大鼠胃肠功能的促进作用及机制研究

消疳健胃合剂对便秘大鼠胃肠功能的促进作用及机制研究

2023-07-08 11 上传者：管理员

摘要：探究消疳健胃合剂对便秘大鼠的通便作用及机制。方法:Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、多潘立酮组、消疳健胃合剂组，每组5只。通过盐酸洛哌丁胺灌胃建立大鼠便秘模型，各组给予相应药物进行干预，观察各组大鼠粪便数量、粪便含水量、小肠内容物推进率；采用苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠结肠黏膜病理变化；ELISA检测大鼠血清胃动素、胃泌素、NO含量及回肠纤维素酶、α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶水平。结果:消疳健胃合剂能明显提高便秘大鼠粪便数量、粪便含水量，提高大鼠血清胃动素、胃泌素水平，降低NO、纤维素酶、α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶水平，减轻大鼠结肠黏膜炎症。结论:消疳健胃合剂对便秘大鼠具有通便作用，其作用机制可能与调节大鼠胃肠激素水平、促进肠蠕动有关。

关键词：
便秘
消化酶
消疳健胃合剂
病理学
胃肠激素
加入收藏

便秘(constipation)是多种疾病表现出的一种临床症状，也可以作为一个独立疾病的诊断。目前尚无较好的方式治疗便秘，临床常用益生菌、促进肠蠕动等药物治疗，然而对于部分顽固性便秘效果欠佳，且容易反复。中医药治疗便秘具有丰富的经验。消疳健胃合剂原为畲族验方，由食凉茶、陈皮、山楂、茯苓等7味中药组成，食凉茶为方中君药，具有理气健脾、消食化积的作用，已有研究表明，食凉茶不仅可以治疗多种消化系统疾病、还可以抑制消化道癌细胞[1,2]。临床应用显示消疳健胃合剂具有良好的改善儿童消化不良、治疗便秘的作用，然而其作用机制尚不清楚。

本研究采用盐酸洛哌丁胺建立大鼠便秘模型，观察消疳健胃合剂的通便作用及其对消化道激素和回肠消化酶的影响，探讨其作用机制。

1、材料

1.1动物

健康成年SPF级Wistar大鼠20只，体质量(190±20)g,雌性，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，动物生产合格证号：SCXK(沪)2017-0005。饲养于浙江省中医药研究院实验动物中心SPF动物房，屏障系统，人工光照，每日光照和黑暗各12 h,温度控制在(20±5)℃,相对湿度控制在50%～60%。动物实验经浙江省中医药研究院伦理委员会批准[2022029号]。

1.2药物

消疳健胃合剂的制备：按处方比例称取食凉茶、陈皮、山楂、茯苓、麦芽、谷芽等7味中药，加入8倍量水，煎煮2次，每次2 h,合并滤液，过滤，浓缩，冻干，即得(得率为24.48%)。多潘立酮片：辅仁药业集团有限公司，国药准字H20123058,批号：2109151。

1.3试剂

一氧化氮(NO)测试盒(批号：A013-2-1)、淀粉酶(AMS)测试盒(批号：C016-1-1)、纤维素酶(CL)测试盒(批号：A138-1-1)、大鼠5-羟色胺(5-HT)试剂盒(批号：H104-1-R)、大鼠胃泌素(GAS)试剂盒(批号：H239-R)、大鼠胃动素(MTL)试剂盒(批号：H182-R)、大鼠α-葡萄糖苷酶(α-GLU)试剂盒(批号：H419-1-R):南京建成生物工程研究所。盐酸洛哌丁胺胶囊：西安杨森制药有限公司，国药准字H10910085,批号：LFJ8684。

1.4仪器

Spectra Max190全波长酶标仪：美国Molecular Devices公司；MM400冷冻混合球磨仪：德国Retsch公司；Sorvall ST 40R大容量低温离心机：美国Thermo公司；Nikon DS-U3显微镜：日本尼康公司。

2、方法

2.1动物造模、分组与给药

将20只Wistar大鼠适应性喂养1周后随机将大鼠分为4组：正常对照组、模型组、多潘立酮组(阳性对照组)、消疳健胃合剂组，每组5只。除正常对照组外，其他各组灌胃给予3 mg/(kg·d)盐酸洛哌丁胺建立大鼠便秘模型[3],对照组灌胃等量生理盐水，6 h后，消疳健胃合剂组大鼠给予620 mg/(kg·d)剂量的消疳健胃合剂冻干粉，多潘立酮组灌胃4.5 mg/(kg·d)多潘立酮，正常对照组和模型组灌胃等量生理盐水，给药3周。

2.2观察指标及测定

2.2.1粪便及含水量测定

末次给药后，将大鼠放入代谢笼中，16 h后，收集动物粪便并称重记为粪便湿重W1,然后将动物粪便置于恒温干燥箱中50℃条件下烘干4 h并称重，记为粪便干重W2。粪便含水量(%)=(W1-W2)/W1×100%

2.2.2肠道推进率的测定

末次给药前禁食不禁水12 h,灌胃给药30 min后，各组大鼠均给予10%活性炭2 mL灌胃。灌10%活性炭结束开始计时，于20 min后麻醉，腹主动脉取血后处死大鼠，取胃下端幽门至回盲部，摆正拉直，在无张力状态下测量肠道全长(L1)和墨水在肠道的推进距离(L2),计算肠道推进率。肠道推进率(D)=L2/L1×100%。

2.2.3血清胃动素、胃泌素和一氧化氮测定

使用3%戊巴比妥麻醉大鼠后，腹主动脉取血，4℃、3 500 r/min离心10 min,离心半径13.5 cm,取上层血清，使用ELISA试剂盒测定血清中胃动素、胃泌素和一氧化氮(NO)水平。

2.2.4回肠酶活性的测定

各组大鼠取距离盲肠部位2 cm处的回肠1～2 cm(质量约100 mg),加入900μL生理盐水，匀浆，4℃、3 500 r/min离心10 min,离心半径13.5 cm,取上清，使用ELISA试剂盒测定回肠中纤维素酶、α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶。

2.2.5结肠组织病理学观察

取大鼠结肠部分约1.5 cm,浸泡于10%福尔马林溶液中固定48 h后进行石蜡包埋，4μm切片，行HE染色，显微镜下观察。

2.3统计学方法

所有数据用平均值±标准差(x¯±s)表示。采用GraphPad Prism 7.0统计学软件进行t检验和单因素方差分析，P<0.05认为差异有统计学意义。

3、结果

3.1消疳健胃合剂对便秘大鼠排便功能的影响

见表1。

3.2消疳健胃合剂对便秘大鼠血清胃动素、胃泌素和NO水平的影响

见表2。

表1各组大鼠粪便量、粪便含水量及肠道推进率比较(x¯±s)

表2各组大鼠血清胃动素、胃泌素和NO水平比较(x¯±s)

3.3消疳健胃合剂对便秘大鼠回肠纤维素酶、α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶的影响

见表3。

表3各组大鼠回肠纤维素酶、α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶活性比较(x¯±s,U/mg)

3.4消疳健胃合剂对便秘大鼠肠组织病理变化的影响

HE染色可见：正常对照组大鼠结肠黏膜正常；模型组大鼠结肠黏膜可见明显的以淋巴细胞为主的炎症改变；消疳健胃合剂组与多潘立酮结肠无明显黏膜炎症改变。见图1。

4、讨论

消化功能紊乱是临床常见疾病，便秘也是一种消化功能紊乱性疾病。中医认为，便秘因大肠传导功能失常，造成粪便在肠内停留时间过长，粪质干燥或坚硬，因而艰涩难下，便秘的发生与脾胃功能密切相关。脾胃同居中焦，脾属阴土，胃为阳土，二者一阴一阳，一运一纳，一升一降，有机协调，共同完成饮食的受纳、腐熟及排泄过程，脾胃气虚是便秘的常见中医证候，因此临床常以健脾和胃为主要治疗原则[4]。

消疳健胃合剂以健脾理气、消食化积为治则组方，本方中食凉茶是畲族习用药物，是方中君药，食凉茶的临床汤剂应用发现，其对于儿童功能性便秘具良好的效果，总有效率为95.0%,高于对照组72.5%,其复发率较低[5]。方中陈皮理气健脾、山楂消食化积、茯苓健脾宁心；全方健脾和胃，主要用于脾胃气虚型便秘。前期临床研究表明，该方对于儿童便秘具有较好的疗效[5,6],然而其治疗便秘的作用机制尚不清晰。本研究发现，消疳健胃合剂可以显著提高便秘模型大鼠粪便数量和粪便含水量，提高大鼠肠道推进率，说明其对便秘具有一定的作用。

图1各组大鼠结肠组织病理变化(×10)

胃动素和胃泌素为消化道激素，胃动素是由22个氨基酸组成的多肽，分布在小肠，其作用是促进和影响胃肠运动及胃肠道对水、电解质的运输；胃泌素几乎对整个胃肠道均有作用，它可促进胃肠道的分泌功能；促进胃窦，胃体收缩，增加胃肠道的运动[7,8]。通过对相关消化道激素测定发现，消疳健胃合剂可以显著提高消化道激素胃动素和胃泌素的水平，说明消疳健胃合剂可以改善胃肠激素水平，恢复胃动力，从而改善便秘。

纤维素酶，α-淀粉酶，α-葡萄糖苷酶是常见的消化酶，对于提高机体对食物的消化能力具有重要作用[9]。对大鼠回肠纤维素酶，α-淀粉酶，α-葡萄糖苷酶的水平检测发现，模型组大鼠该3种消化道酶的活性显著提升，这与朱佳源等[9]脾虚型便秘小鼠的研究结果一致，说明便秘可以导致这3种消化道酶的活性上升，可能是大鼠机体的应激反应所导致。消疳健胃合剂组和多潘立酮组可以显著降低这3种酶的活性，说明消疳健胃合剂调节胃肠道功能并非通过促进肠道消化酶的增加这一机制来实现。值得思考的是，α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶是调节餐后血糖水平的关键酶，通过抑制酶的活性使小肠上部吸收较少的碳水化合物从而降低餐后血糖是目前治疗糖尿病药物开发的关键。因此推测，消疳健胃合剂具有一定的降血糖潜力，但仍需要进一步深入研究。

有研究表明，长时间的便秘会破坏肠黏膜屏障，致使肠黏膜通透性提升，有害物质更易通过受损后的屏障，从而引发多种疾病，慢性便秘常合并炎症反应，加重便秘程度和肠黏膜屏障的破坏[10]。本研究发现，消疳健胃合剂可以显著降低大鼠血清NO水平，从大鼠结肠黏膜组织病理变化可以看出，模型组大鼠黏膜组织显示有轻度炎症反应，而消疳健胃合剂组与潘多立酮组未发现明显的炎症反应，说明消疳健胃合剂具有一定的抗炎作用，但还需要进一步探索。

综上所述，消疳健胃合剂具有调节胃肠功能的作用，其可以通过升高消化道激素胃动素、胃泌素的分泌水平，促进食物在胃内消化，并能促进肠蠕动，改善脾胃虚弱造成的便秘。

参考文献:

[1]董瑞霞,潘俊杰,金叶,等.两种蜡梅属药食兼用茶化学成分及药理活性研究进展[J].食品工业科技,2021,42(16).429-437.

[2]刘忠达,袁宙新,张尊敬,等.柳叶蜡梅提取物对人胃癌SGC-7901细胞的作用机制研究[J].中华中医药杂志,2011,26(10):2420-2422.

[3]程钰,石宇,张虹玺.助阳通便膏影响功能性便秘小鼠AQP3表达的实验研究(J.辽宁中医杂志,2023,50(2):199-201.

[4]陈锡,于永铎,陈萌.基于CiteSpace中医外治法治疗功能性便秘的可视化分析[U/OLJ.实用中医内科杂志,[2023-04-25](1-7).

[5]袁慧强,雷后兴,张晓芹.畲药食凉茶治疗儿童功能性便秘临床研究[J].新中医,2022,54(3):112-115.

[6]袁慧强,张晓芹,雷后兴.畲药食凉茶组方治疗小儿暗证30例疗效观察[J].浙江中医杂志,2020,55(2):116.

[7]杨游萍,梁冬艳,卢建伟.血清G-17､PGI､PGI在Hp阳性体检者胃部病变筛查中的应用价值[J].海南医学,2022,33(18);2340-2343.

[8]吴志敏,张珂畅,刘俊宏,等.擞针疗法对肝癌患者肝动脉化疗栓塞术后血清胃泌素､胃动素及胃肠功能的影响[J].世界中西医结合杂志,2022,17(10)1985-1988.

[9]朱佳源,谭周进,刘又嘉,等.养胃四君子茶对脾虚便秘小鼠肠道微生物､酶活性及胃动力的影响[J.中国微生态学杂志,2022,34( 1 ):18-22,28.

[10]薛梅.益生菌辅助治疗炎症性肠病的效果及对临床症状和血清炎症因子的影响[J.当代医学,2022.28(4):177-179.