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红珍珠牌雪之健胶囊应用于急性毒性和遗传毒性的实验研究

2020-08-04 311 上传者：管理员

摘要：目的：研究红珍珠牌雪之健胶囊的急性毒性和遗传毒性实验，评价其食用安全性。方法：依据《食品安全性毒理学评价程序和方法》进行急性毒性实验、遗传毒性实验(Ames实验、骨髓细胞微核实验和精子畸形实验)。结果：小鼠急性毒性实验经口最大耐受剂量(MTD)>30g/kg•bw，属无毒级。Ames实验、骨髓细胞微核实验和精子畸形实验结果均为阴性，表明受试物无致突变作用。结论：红珍珠牌雪之健胶囊急性毒理分级属无毒级，无遗传毒性，在本实验剂量范围内，红珍珠牌胶囊属于安全性保健食品。

关键词：
急性毒性
红珍珠牌雪之健胶囊
药学
遗传毒性
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红珍珠牌雪之健胶囊根据青藏高原民间验方“三果养生膏”配方，应用传统医学与现代营养的结合，古法炮制与现代工艺的结合，精选海拔3000米左右青藏高原特色草本植物白刺果、沙棘果、柴达木枸杞果等为主要原料制成的保健食品。这些生物资源在医药、保健食品、保健饮料和保健化妆品等方面具有广泛的用途。高血脂、高血压、动脉硬化、冠心病及免疫功能低下是国内外常见的心血管疾病。红珍珠牌雪之健胶囊是以白刺果、沙棘果、枸杞果等为基础原料外，配方中的决明子、红花、葡萄籽等均属药食两用的天然物质，在中医临床和民间药食治疗高脂血症方面有广泛的应用，这些配料均有调节血脂保健功效研究通过动物实验，利用中藏药、营养保健食品研究的新方法、新技术和现代分析测试，证明了降血脂保健功能，同时明确了降血脂的功能因子(即有效成分)，为广大心血管疾病患者提供安全无副作用，纯天然的绿色药物和保健食品。研究通过红珍珠牌雪之健胶囊对小鼠经口急性毒性和遗传毒性试验，为进一步开发红珍珠牌雪之健胶囊保健食品应用提供一定的理论依据及参考。

1、材料与方法

1.1材料

1.1.1受试样品红珍珠牌“雪之健”胶囊，由金诃藏药股份有限公司提供。样品内容物呈棕褐色，样品用蒸馏水配制成所需浓度液体。

1.1.2实验动物和饲养环境昆明种小鼠，清洁级，体重18-22g，动物合格证号：青医动字第001号，由青海省实验动物中心提供；实验动物购进后首先于恒温恒湿的动物房环境中适应3天，单笼饲养；实验动物饲料由浙江省实验动物中心提供，执行标准GB1429-2010。

1.1.3菌株鼠伤寒沙门氏菌TA97a、TA98、TA100、TA102。由上海市疾病预防控制中心提供。

1.1.4主要仪器超净工作台、电子天平、压力蒸汽灭菌器、HH-6数显恒温水浴锅(常州澳华仪器有限公司)、培养箱、恒温电热鼓风干燥箱。

1.2方法

1.2.1急性毒性实验[1]

按最大耐受量试验方法进行，取健康昆明种小鼠50只，体重18-22g，雌雄各半。于正式试验前晚禁食，次日，用经过三次预试后确定的30g/kg剂量，经口灌胃给药后，观察两周，记录小鼠中毒表现、死亡情况。

1.2.2Ames实验[2]

按照《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)第一部分毒理学评价检验、鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶(Ames实验)方法进行试验。

1.2.3小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验[3]

健康KM种小鼠50只，体重25-30g，随机分为5组，雌雄各半，10只/组。根据急性毒性实验LD50值，设3个受试物组(1/2LD50、1/4LD50、1/8LD50)即15.00、7.50、3.75g/(kg·BW)3个样品剂量组，分别称取红珍珠牌雪之健胶囊15.00、7.50、3.75g，加蒸馏水20mL溶解待用，另设40mg/(kg·BW)环磷酰胺为阳性对照组、离子水阴性对照组；给药后各组均间隔24h灌胃0.20mL/10g体重，于末次灌胃给药后6h脱颈椎处死，取双侧股骨，滴加1滴小牛血清，制成细胞悬液，涂片制片，油镜下选择细胞分散好、形态完整、染色良好部位，按一定顺序进行计数。计数嗜多染红细胞(PCE)及带微核的细胞(MNPCE)共1000个，每只小鼠计数微核的千分率。

1.2.4小鼠精子畸形实验[4]

选25-30g健康KM种雄性小鼠50只，随机分为5组，每组10只，给药组按1/2LD50、1/4LD50、1/8LD50,40mg/kg·bw环磷酰胺阳性对照组、阴性对照组(离子水)，各组雄性小鼠按照相应的剂量，分别连续灌胃5d后，喂养观察30d。于第35d处死小鼠，取两侧副睾的精子涂片精子，按规定涂片制成。观察计数各组小鼠完整精子1000个，计算精畸率。

1.3统计学处理

应用spss17.0软件进行数据的统计分析，以均数±标准差形式表示。

2、结果

2.1红珍珠牌雪之健胶囊对小鼠急性毒性实验的结果

经观察两周，雌雄两组动物均未发现中毒症状、异常反应，生长良好，观察期未见死亡。于实验末，处死实验小鼠，解剖经肉眼观察心、肝、脾、肺肾等主要脏器，未发现脏器异常。红珍珠牌雪之健胶囊对小鼠急性毒性试验LD50>30g/kg·bw。根据急性毒性分级标准，属无毒级，见表1。

表1红珍珠牌雪之健胶囊小鼠经口急性毒性试验的结果

2.2红珍珠牌雪之健胶囊Ames实验结果

由表2、表3可见，经两次Ames实验，5个剂量组回变菌落数与自发回变菌落数相比较，四种菌株再加与不加S-9的条件下，均无显著性差异；而阳性对照回变菌落数高于阴性对照组回变菌落数的2倍以上。表明红珍珠牌“雪之健”胶囊无致突变作用。

表2红珍珠牌“雪之健”胶囊Ames实验(第一次)

表3红珍珠牌“雪之健”胶囊Ames实验(第二次)

2.3小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验

由表4可见，红珍珠牌雪之健胶囊高、中、低剂量组与空白对照组比较，微核千分率均无统计学意义(P>0.05)，而环磷酰胺组微核率则显著高于空白对照组，有统计学意义(P<0.01)。表明红珍珠牌雪之健胶囊对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率未见明显影响，检测结果为阴性。

表4红珍珠牌“雪之健”胶囊对小鼠微核率的影响

2.4小鼠精子畸形实验

由表5可见，红珍珠牌雪之健各剂量组小鼠精子畸形率与空白组比较，小鼠精子畸形率无显著性差异(P>0.05)，而环磷酰胺组与空白组比较，小鼠精子畸形率明显升高，差异有统计学意义(P<0.01)。

表5红珍珠牌“雪之健”胶囊对小鼠精子畸形发生率的影响

3、讨论

高脂血症是各种原因导致的血清中胆固醇或甘油三酯水平升高的一类疾病。近30年来研究表明，血脂异常是我国人群心血管疾病的重要危险因素之一，人群血脂水平和血脂异常患病率在快速增高，人群血脂水平和血脂异常患病率在快速增高，经济发达地区人群、中老年人群患病相对较高。摄入太多食物的脂肪，这些因素直接导致人体新陈代谢速度减慢，血液流速会减慢，血黏度迅速升高，造成心脑供血不足，如果不及时防范、调理、将会引发冠心病、高血压、脑血栓等心脑血管疾病。甘油三脂、胆固醇、低密度脂蛋白的升高，均能导致血液黏稠度过高。目前降脂的西药虽然较多，但有一定的不良反应，服药期间还应检测其副作用。

红珍珠牌雪之健胶囊配方原料，唐古特白刺果实和种子富含生物碱、黄酮类、氨基酸等生物活性成分，其中总黄酮的含量为1.46%～1.65%[5]。《藏医精髓与医学宝典》记载：“白刺果可入药，健脾胃、滋补强身、舒筋活血，主治肺病和胃病，果核可榨油”。其果实富含的有益成分，能有效降低大鼠的血脂含量[6]。药理研究及临床发现，配方中的枸杞子有效成分-枸杞多糖、红花提取物、沙棘中的黄酮类、决明子蒽醌类对高脂血症模型动有降脂作用，其中有效成分可有效降低血脂胆固醇和甘油三脂水平，对心脑血管疾病起到一定的预防作用[7,8]。葡萄籽含有多酚类物质(GPS)：儿茶素类和原花青素类，不饱和脂肪酸，粗蛋白、氨基酸和维生素A、E、D、K、P及多种微量元素；其葡萄籽提取物原花青素可降低血脂水平、预防心脑血管疾病[9]。研究提示，实验条件下，红珍珠牌雪之健胶囊对小鼠经口急性毒性最大耐受量(MTD)，雌、雄小鼠经灌胃给予金诃牌雪益康胶囊30g/kg，均未出现死亡、异常情况，解剖肉眼观察各个脏器未发现明显异常，按急性毒性分级标准判定，金诃牌雪益康胶囊属无毒级；且遗传毒性试验均未见致突变作用。

参考文献：

[1]中华人民共和国卫生部,中国国家标准化管理委员会.GB15193.3—2003食品安全性毒理学评价程序急性毒性试验[S].北京:中国标准出版社,2003.

[2]国家质量监督检验检疫总局.GB15193.4—2003食品安全性毒理学评价程序和方法:鼠伤寒沙门氏菌哺乳动物微粒体酶试验[S].北京:中国标准出版社,2003:35-43.

[3]国家质量监督检验检疫总局.GB15193.5—2003食品安全性毒理学评价程序和方法:骨髓细胞微核试验[S].北京:中国标准出版社,2003:47-48.

[4]黄聘和,敬明武,蒋勇,等.小鼠精子畸形试验的方法学探讨[J].预防医学情报杂志,2017,33(8):809-812

[5]杨仁明,索有瑞,王洪伦.唐古特白刺果实化学成分和功效作用研究进展[J].天然产物与研究开发,2012,24(7):985-989.

[6]索有瑞,王洪伦,汪汉卿.柴达木盆地唐古特白刺果实降脂和抗氧化作用研究[J].天然产物研究与开发,2004,16(1)54-58.

[7]刘勇,廉永善,王颖莉,等.沙棘的研究开发评述及其重要意义[J].中国中药杂志,2014,39(9):1547-1552.

[8]成龙,梁日欣,杨滨,等.红花提取物对高脂血症大鼠降脂和抗氧化的实验研究[J].中国实验方剂学杂志,2006,12(9):25-27.

[9]赵超英,姚小曼.葡萄籽提取物原花青素的营养保健功能(综述)[J].中国食品卫生杂志,2000,12(6):38-41.

马文俊,刘有菊.红珍珠牌雪之健胶囊急性毒性和遗传毒性的实验研究[J].医学食疗与健康,2020,18(15):8-10.

基金:藏药新药开发国家重点实验室(NO.2015DQ870717);青海省藏药新药开发重点实验室(NO.2017-ZJ-Y15).