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奥美沙坦酯片在中国健康受试者中的生物等效性研究

2024-10-25 166 上传者：管理员

摘要：目的评价奥美沙坦酯片受试制剂与参比制剂在中国健康受试者中单剂量空腹和餐后条件下给药的生物等效性。方法用单中心、随机、开放、单次给药、两制剂、两周期交叉试验设计，空腹和餐后试验各入组24例受试者。空腹或餐后条件下单次口服奥美沙坦酯片受试制剂和参比制剂20 mg。用液相色谱串联质谱法测定血浆中奥美沙坦的浓度，用Phoenix WinNonlin 8.0软件计算主要药代动力学参数。结果空腹试验奥美沙坦酯片受试制剂和参比制剂主要药代动力学参数：Cmax分别为（653.06±133.53）和（617.37±151.16）ng·mL-1,AUC0-t分别为（4 201.18±1 035.21）和（4 087.38±889.99）ng·mL-1·h, AUC0-∞分别为（4 254.30±1 058.90）和（4 135.69±905.29）ng·mL-1·h。餐后试验奥美沙坦酯片受试制剂和参比制剂主要药代动力学参数：Cmax分别为（574.78±177.05）和（579.98±107.74）ng·mL-1,AUC0-t分别为（3 288.37±866.06）和（3 181.51±801.06）ng·mL-1·h, AUC0-∞分别为（3 326.11±874.26）和（3 242.01±823.09）ng·mL-1·h。在空腹和餐后条件下，受试制剂与参比制剂主要药代动力学参数的90%置信区间均在80.00%～125.00%。结论空腹和餐后条件下，中国健康成年受试者单次口服奥美沙坦酯片受试制剂和参比制剂具有生物等效性。

关键词：
AT1
PK
奥美沙坦酯片
生物等效性
药代动力学
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奥美沙坦酯为咪唑类选择性血管紧张素Ⅱ 1型受体阻断药，临床适应证为高血压，具有耐受性好，药物不良反应少等特点[1]。奥美沙坦酯是一种前体药物，经胃肠道吸收水解为奥美沙坦。奥美沙坦为选择性血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗药，通过选择性阻断血管紧张素Ⅱ与血管平滑肌血管紧张素转换酶1受体(angiotensin type 1,AT1)受体的结合而阻断血管紧张素Ⅱ的收缩血管作用，因此其作用独立于血管紧张素Ⅱ合成途径之外。奥美沙坦与AT1的亲和力比与血管紧张素转换酶2(angiotensin type 2,AT2)受体的亲和力大12 500多倍。本研究参照国家药品监督管理局发布的相关指导原则[2],旨在分析奥美沙坦酯片在中国健康受试者的药代动力学(pharmacokinetics, PK)特征，判定受试制剂(test, T)与参比制剂(reference, R)的生物等效性。

一、材料、对象与方法

1 材料

药品与试剂T:奥美沙坦酯片，规格：每片20 mg, 批号：200502,山东步长制药股份有限公司生产；R:奥美沙坦酯片(商品名：傲坦®),规格：每片20 mg, 批号：ST066YA,批准文号：国药准字H20060372,第一三共制药(上海)有限公司生产；奥美沙坦(标准品),纯度：99.8%,批号：1272-062A1,奥美沙坦-d4(内标),纯度：99.1%,批号：2286-034A3,均购自加拿大TLC Pharmaceutical Standards公司。

仪器TRIPLE QUADTM6500+串联质谱仪、ExionLCTM液相系统，均为美国AB SCIEX公司产品。

2 受试者选择

本方案经徐州医科大学附属医院医学伦理委员会批准(伦理批号：空腹XYFY2020-YL092-01;餐后XYFY2020-YL091-01,临床试验备案号：202000501-01),所有受试者均签署知情同意书。空腹组入组24例健康受试者(男18例、女6例),年龄(30.13±5.47)岁，体质量(64.84±9.85)kg, 身高(167.27±7.77)cm, 体质量指数(23.05±2.08)kg·m-2。餐后组入组23例健康受试者(男20例、女3例),年龄(29.31±6.15)岁，体质量(65.47±8.62)kg, 身高(171.11±6.81)cm, 体质量指数(22.29±2.05)kg·m-2。

入选标准①受试者及其伴侣试验期间自愿采取充分的避孕措施；②年龄18～45周岁；③男性体质量不低于50 kg, 女性体质量不低于45 kg, 体质量指数在19.0～26.0 kg·m-2;④实验室等检查结果经研究者判断为正常或异常无临床意义者等。

排除标准①既往有喉部喘鸣、面部或声门血管性水肿而停药的病史；②药物滥用史或吸毒史或筛选时毒品筛查阳性者；③给药前3个月内献血或失血等于或超过400 mL;④试验开始前28 d内使用过任何其他药物者；⑤临床实验室检查有临床意义异常；⑥哺乳期、妊娠期妇女等。

3 给药方案与血样采集

本方案按单中心、随机、开放、两周期交叉、单剂量设计[3]。

受试者于给药前1 d入住徐州医科大学附属医院I期试验病房。服药前禁食10 h, 从服药前1 h至服药后1 h不得饮水。用温开水240 mL送服受试制剂或参比制剂20 mg。给药前(60 min内)和给药后0.25、0.50、1.00、1.50、1.75、2.00、2.25、2.50、2.75、3.00、3.50、6.00、8.00、10.00、12.00、24.00、36.00和48.00 h共计20个时间点进行PK血样采集，用于分析血浆中的奥美沙坦。受试者经4 d清洗期后进行第2周期的试验，试验操作同第1周期。

每个采血点取血约4 mL至含乙二胺四乙酸二钾(K2EDTA)的真空采血管中，立即轻柔翻转混匀，然后立即保存在冰浴中。在30 min内离心分离血浆，以3 000 r·min-1离心10 min。血浆分为2份，取血浆1.0 mL转移至检测管，其余血浆放入备份管中，并在-20 ℃以下的环境暂时进行储存。离心分离开始至约-20 ℃的冷冻箱储存之间的时间不应超过60 min。

4 测定方法

色谱条件色谱柱：Agilent ZORBAX XDB-C18,(2.1 mm×50.0 mm, 5.0 μm),流动相：含0.2%甲酸的水溶液(A)-含0.3%甲酸的甲醇溶液(B),柱温：40 ℃,流速：0.40 mL·min-1,进样量：20 μL。梯度洗脱程序：0.00～0.01 min, 35%B→45%B;0.01～1.00 min, 45%B;1.00～1.01 min, 45%B→80%B;1.01～1.50 min, 80%B;1.50～1.51 min, 80%B→35%B;1.51～3.00 min, 35%B。

质谱条件电喷雾离子源(electrospray ionization, ESI),正离子模式；多反应监测模式(multiple reaction monitoring, MRM);离子喷雾电压：5 000 V,气帘气：35 kPa; 离子源气体1:40 kPa, 离子源气体2:50 kPa; 离子源温度：500 ℃;奥美沙坦和内标用于定量分析的离子对分别为m/z447.1→207.0和m/z451.2→211.1。

血浆样品处理血浆样品于室温状态下解冻，取样本500 μL置于96深孔板，加入的乙腈/水(50%)5 μL至每一样本并混匀，加入0.25 ng·μL-1同位素内标溶液10 μL至每一样本并混匀，加入乙腈400 μL于96深孔板中并涡旋混合5 min。以3 000 r·min-1离心10 min。移取上清液100 μL至含0.2%甲酸10%乙腈水溶液300 μL的96深孔板中，并涡旋混匀，以3 000 r·min-1离心5 min, 取10 μL进行LC-MS/MS分析。对于双空白样品，处理时使用同等体积乙腈∶水(v∶v=1∶1)代替内标工作液。

5 方法学考察与评价[4]

专属性在样品测定条件下，将空白人血浆样本、加入标准品的人血浆样本及受试者服药后血浆样本按“血浆样品处理”项下分析，空白血浆中未检测到奥美沙坦及其内标的干扰峰，空白血浆中的内源性物质不干扰奥美沙坦及其内标的测定。奥美沙坦及其内标的保留时间分别为1.47和1.46 min, 典型色谱图见图1。

图1奥美沙坦的典型色谱图

标准曲线与定量下限用空白血浆将奥美沙坦标准贮备液稀释成1.0、2.0、5.0、50.0、100.0、400.0、700.0和1 000.0 ng·mL-1的系列质量浓度溶液，以奥美沙坦与奥美沙坦-d4的色谱峰面积比为纵坐标，用加权1/x2,血浆中分析物的浓度(x)与峰面积比(y)进行线性回归，回归方程为y=2.99×10-2x+2.20×10-3(r=0.999 8),定量下限为1.0 ng·mL-1,线性范围为1.0～1 000.0 ng·mL-1。

精密度与回收率配制质量浓度分别为1、3、30、500和750 ng·mL-15个质量浓度的质控样本，每种质量浓度平行6份，连续测定3批，如表1所示，奥美沙坦各质量浓度批间精密度为2.57%～5.82%,批内精密度0.61%～5.30%,低、中、高质量浓度下，奥美沙坦的提取回收率为87.42%～99.91%,RSD均不大于7%,符合对回收率考察的要求。

表1用液相色谱串联质谱法检测奥美沙坦在人血浆中的精密度与回收率(n=6)

基质效应分别考察了6个不同来源的空白血浆样本、1个溶血的空白血浆样本、1个高脂的空白血浆样本对奥美沙坦及其内标的干扰，在所得上清液中添加低、中、高质量浓度(3、500和700 ng·mL-1) 质控工作液和内标工作液，计算内标归一化基质因子。结果显示，结果表明奥美沙坦无明显空白血浆、溶血血浆、高血脂血浆基质效应，不影响分析物的定量分析。

稳定性分别考察了全血样品和血浆样品的稳定性，结果表明全血样品室温放置2 h后样品稳定；血浆样品在-80 ℃条件下冻融5次、室温放置21 h、4 ℃放置68 h、-20 ℃和-80 ℃条件下储存82 d、样品提取后自动进样器(15 ℃)放置80 h后，均是稳定的。

6 统计学处理

用Phoenix WinNonlin 8.0软件计算奥美沙坦非房室模型主要PK参数[5],用SAS 9.4软件进行生物等效性统计分析，Cmax、AUC0-t、AUC0-∞经对数转换后进行多因素方差分析、双单侧t检验并计算90%置信区间。奥美沙坦酯片受试制剂和参比制剂血浆中的奥美沙坦的PK参数AUC0-t、AUC0-∞和Cmax经调整后的几何均值比的90% CI均落在80.00%～125.00%,则说明两制剂间具有生物等效性。

二、结果

1 血药浓度-时间曲线

空腹试验入组24例健康受试者，均按方案完成试验，均纳入安全性分析集和PK浓度分析集、PK参数分析集和生物等效性分析集。餐后试验入组24例健康受试者，其中22例受试者完成2个周期给药，1例受试者C008/S019(T-R组)给药前即退出研究，1例受试者C014/S032(R-T组)于第一周期给药后24 h提前退出研究。餐后试验23例受试者被纳入PK浓度分析集，23例受试者被纳入PK参数分析集，23例受试者被纳入AUC0-t生物等效性分析集，23例受试者被纳入Cmax生物等效性分析集，23例受试者被纳入AUC0-∞生物等效性分析集。

空腹组和餐后组受试者口服奥美沙坦酯片受试制剂和参比制剂10 mg后的平均血药浓度-时间曲线，见图2。

2 PK参数

空腹组、餐后组中受试制剂和参比制剂的主要PK参数结果见表2。

图2空腹组(A)和餐后组(B)单次口服受试制剂(T)和参比制(R)后平均血药浓度-时间曲线

表2空腹和餐后受试者口服受试制剂和参比制剂后奥美沙坦主要药代动力学参数

3 生物等效性评价

空腹状态下口服奥美沙坦酯片受试制剂和参比制剂后血浆中奥美沙坦PK参数AUC0-t、AUC0-∞及Cmax的调整后几何均值比分别为106.54%、102.23%和102.29%,其90%置信区间分别为100.30%～113.18%、96.46%～108.35%和96.54%～108.39%;餐后状态下口服奥美沙坦酯片受试制剂和参比制剂后血浆中的奥美沙坦PK参数AUC0-t、AUC0-∞及Cmax的调整后几何均值比分别为97.09%、101.42%和101.11%,其90%置信区间分别为87.45%～107.80%、95.42%～107.81%和95.28%～107.29%。说明在空腹和餐后状态下，奥美沙坦酯片受试制剂和参比制剂之间Cmax、AUC0t及AUC0-∞的几何均值比值的90%置信区间均在80.00%～125.00%,两制剂具有生物等效性。

4 安全性评价

空腹试验中共有17例受试者(70.83%)发生了39例次不良事件，均为轻度。服用受试制剂后，共有13例受试者(54.17%)发生了21例次不良事件。服用参比制剂后，共有10例受试者(41.67%)发生了18例次不良事件。餐后试验中共有12例受试者(52.17%)发生了24例次不良事件，全部为轻度。服用受试制剂后，共有7例受试者(31.82%)发生了10例次不良事件。服用参比制剂后，共有10例受试者(43.48%)发生了14例次不良事件。说明两制剂均具有较好的安全性和耐受性。

三、讨论

根据《化学药品注册分类及申报资料要求》和《以药动学参数为终点评价指标的化学药物仿制药人体生物等效性研究技术指导原则》[3],分别开展空腹及餐后2项生物等效性研究来比较受试制剂与参比制剂的吸收速度和程度的差异，评价两者是否生物等效。

交叉设计的样本量需考虑的因素包括：①检验水准为双单侧0.05;②检验效能为80%;③个体内变异系数约为16.5%;④受试制剂和参比制剂PK参数(AUC、Cmax)均值比为 0.95;⑤等效性界值20%。样本量估算结果为20例，考虑到受试者20%的脱落率，空腹和餐后试验样本量各24例。

由本产品空腹和餐后生物等效性试验结果可以得出，奥美沙坦吸收较好，PK参数与既往报道数据基本一致[6-8],半衰期约9 h, 达峰时间约2 h, 未发现其他显著性差异。在空腹和餐后情况下，参比制剂和受试制剂的Cmax、AUC0-t和AUC0-∞调整后几何均值比的90%置信区间均落在法规允许的80.00%～125.00%,证明两制剂吸收速度和吸收程度无差异，且进食不会影响药物的生物利用度。

本研究临床试验方案合理，生物分析方法可靠，奥美沙坦酯片在空腹和餐后状态下具有生物等效性。

参考文献:

[1]张建玲,李刚.2021世界卫生组织《成人高血压药物治疗指南》解读[J].中国高血压杂志,2023,1(31):18—20.

[2]国家药品监督管理局.国家卫生健康委关于发布药物临床试验质量管理规范的公告(2020年第57号)[EB/OL].2020-04-26 [2024-04-18].

[3]国家药品监督管理局.关于发布普通口服固体制剂参比制剂选择和确定等3个技术指导原则的通告(2016年第61号)[EB/OL].2016-03-18[2024-04-07].

[4]Ch.P(2020) Vol Ⅳ,中国药典2020版[S].四部.2020:460-466.

[5]国家药品监督管理局.关于发布生物等效性研究的统计学指导原则和高变异药物生物等效性研究技术指导原则的通告(2018年第103号)[EB/OL].2018-10-29 [2024-04-18].

[6]须美燕,吴伟,李翠.奥美沙坦酯片在中国健康人体空腹状态的生物等效性研究[J].中国临床药理学与治疗学,2020,25(1):68—74.

[7]寇皓,徐晓莉.国产与进口奥美沙坦酯片在健康人体中的生物等效性分析[J].临床合理用药,2017,3(10):12—15.

[8]张琦琪,徐贤根,楼金芳,等.奥美沙坦酯氢氯噻嗪片在中国健康受试者中的生物等效性和药代动力学研究[J].中国临床药理学杂志,2024,40(11):1623—1627.

文章来源:单娜,江大海,苗琳琳,等.奥美沙坦酯片在中国健康受试者中的生物等效性研究[J].中国临床药理学杂志,2024,40(20):3033-3037.