由于人体内胰酶被不正常的激活,从而引发胰腺组织的自身消化,导致上腹持续性的疼痛并且会出现恶心呕吐的现象叫做急性胰腺炎(AP)[1]｡对于AP,一般采取的治 疗 方 式 有 病 因 治 疗､对 症 治 疗､药 物 治疗及手术治疗,AP发 病 较 急,且 发 病 原 因 多 且 复 杂,当发展为重症急性胰腺炎(SAP)时,会出现胰腺脓肿及假 性 囊 肿,更严重者导致患者器官衰 竭[2-3],因 此,寻找一种标志物对AP病情程度进行评估,并及时进行有针对性 的 治 疗,对 于AP的改善具有现实意义｡微小RNA(miR)-365a-3p参与人体内基因的调控,与细胞增殖､分 化 及 凋 亡 相 关[4]｡miR-365a-3p在 缓 解雨蛙素诱导的胰腺外分泌细胞AR42J凋亡和炎症损伤中发挥 着 一 定 的 作 用[5]｡miR-10a-5p影 响 着 炎 症相关疾 病 的 炎 症 反 应[6]｡有 研 究 显 示,Circ-0000284通过调 控miR-10a-5p/Wnt/β-Catenin通 路 促 进 急性胰腺 炎 进 展[7]｡目 前AP患 者 血 清 中miR-365a-3p､miR-10a-5p二者 的 表 达 情 况 研 究 较 少｡因 此,本研究 旨 在 检 测AP患 者 血 清 中miR-365a-3p､miR-10a-5p的表达水平,探究其与疾病程度的相关性｡

1、资料与方法

1.1一般资料

选取2023年1月至2024年1月本院收治的AP患者102例为研究组,其中男51例,女51例,年 龄(53.50±3.12)岁,体 重 指 数(BMI)为(22.72±4.32)kg/m2｡根据AP的严重程度将患者分为轻症急性胰腺炎(MAP)52例(MAP组)､重症急性胰腺炎(SAP)50例(SAP组)｡另选择同期本院的体检健康者102例作为对照组,其中男53例,女49例,年龄(53.00±3.89)岁,BMI(22.80±4.21)kg/m2｡纳入标准:(1)符合AP的诊断标准[8];(2)入组前未进行相关治疗;(3)无 感 染 相 关 性 疾 病;(4)资 料 完 整｡排除标准:(1)心 肺 功 能 不 全 者;(2)急性胆囊炎患者;(3)胃穿孔､十二指肠溃烂患者;(4)慢性胰腺炎患者｡本研究经家属或患者签字同意,本院伦理委员会批准本研究｡收集 所 有 受 试 者 年 龄､性 别､BMI､病 程､胰腺假性囊肿等一般资料,研究组与对照组年龄､性别､BMI比较,差 异 无 统 计 学 意 义(P>0.05),具 有 可 比性｡

1.2方法

1.2.1样品采集及保存

采集所有受试者入院时静脉血样,3000r/min离心10min后收集上层血清,分装至 不 含 核 酸 酶 的EP管,置 于-80℃ 冰 箱 保 存待测｡1.2.2 AP患 者miR-365a-3p､miR-10a-5p水 平 检测 总RNA采 用Trizol试 剂(北 京 凯 诗 源 公 司)提取,评估总RNA浓度和纯度(超微量 分 光 光 度 计,美国Thermo公 司),采 用 逆 转 录 试 剂 盒(日 本Takara公司)将RNA逆 转 录 为cDNA,以cDNA为 模 板,采用PCR定量试 剂 盒(日 本Takara公 司)通 过 实 时 荧光定量PCR(qPCR)方 法 检 测 标 本 中miR-365a-3p､miR-10a-5p水 平,内 参 为U6,引 物 序 列 见 表1｡qPCR反应体系 共20μL:PCR MasterMix4μL,上游引物0.5μL,下游引物0.5μL,cDNA模板2μL,加双蒸水至20μL;扩增条件:98.2℃8min;97.5℃30s,56.5℃20s,72.5℃15s,共40个循环｡以2-ΔΔCt方法计算miR-365a-3p､miR-10a-5p相对表达水平｡

表1  qPCR引物序列

1.2.3健康评估

评估AP患者急性生 理 学 和 慢 性健康状 况 评 价(APACHE)Ⅱ 评 分 和Ranson评 分｡Ranson评分标准 如 下:包 括11个 项 目,其 中 年 龄>55岁,白 细 胞 计 数>16×109/L,血 糖>11.1mmol/L,天冬氨酸 氨 基 转 移 酶>250μ/L,乳 酸 脱 氢酶>350IU/L,血细胞比容下降>10%,血 尿 素 氮 升高>1.8mmol/L,血钙<2mmol/L,动脉血氧分压水平<60mmHg,碱缺失>4mmol/L,失液量>6L分别记1分,总分11分｡APACHEⅡ评 分 总 分55分,标准如下:年龄评分(6分);急性生理学评分(体温､心率､血压､氧分压､动脉血pH､呼吸频率､血清肌酐､血清钾､血清钠､血细胞比容及白细胞计数等生理指标,共44分);慢性 健 康 状 况 评 分,有无慢性严重器官系统功能不全或免疫损害(5分)｡APACHEⅡ评分≥8分,Ranson评分≥3分判定为SAP[9]｡

1.2.4血清生化指标水平测定

采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α[TNF-α,科鹿(武汉)生 物 科 技 有 限 责 任 公 司,货 号:H980361]､白细胞介素-6(IL-6,上海西塘生物科技有限公司,货号:H980283)､C-反应蛋白(CRP,上海优科唯生物科技有限公 司,货 号:H980290)水 平,具体操作流程严格 按照相应的试剂盒说明书进行｡

1.3统 计 学 处 理

采 用SPSS25.0对 数 据 进 行 处 理和分析｡计量资料均经过Shapiro-Wilk正态性检验,呈正态分布的计量资料以x±s表示,组间比较采用t检验｡计数资料以例数和百分率表示,组间比较采用χ2检验;采 用Pearson相 关 分 析AP患 者 血 清miR-365a-3p､miR-10a-5p水 平 与APACHEⅡ 评 分､Ran-son评分及生化指标TNF-α､IL-6､CRP的相关性;采用多因素Logistic回归分析SAP的影响因素;绘制受试者 工 作 特 征(ROC)曲 线 分 析 血 清miR-365a-3p､miR-10a-5p对AP和SAP的诊断价值｡以P<0.05为差异有统计学意义｡

2、结 果

2.1研究组与对照组

血清miR-365a-3p､miR-10a-5p水平比较 研 究 组 血 清miR-365a-3p､miR-10a-5p水平均低于对照组(P<0.05),见表2｡

表2 研究组与对照组血清miR-365a-3p､   miR-10a-5p水平比较

2.2 MAP组与SAP组血清miR-365a-3p､miR-10a-5p水 平 比 较

MAP组 血 清miR-365a-3p､miR-10a-5p水平均高于SAP组(P<0.05),见表3｡

表3  MAP组与SAP组血清miR-365a-3p､   miR-10a-5p水平比较

2.3 MAP组与SAP组一般资料比较

MAP组A-PACHEⅡ评分､Ranson评分及TNF-α､IL-6､CRP水平均低于SAP组(P<0.05)｡MAP组 与SAP组 年龄､性别､BMI､病 程 及 是 否 存 在 胰 腺 假 性 囊 肿 比 较,差异无统计学意义(P>0.05)｡见表4｡

表4  MAP组与SAP组一般资料比较

2.4 AP患者血清miR-365a-3p､miR-10a-5p水 平 与TNF-α､IL-6､CRP及评分的相关性分析

Pearson相关分 析 结 果 显 示,AP患 者 血 清miR-365a-3p､miR-10a-5p水 平 与APACHEⅡ 评 分､Ranson评 分 及TNF-α､IL-6､CRP均呈负相关(P<0.05),见表5｡

表5  AP患者血清miR-365a-3p､miR-10a-5p水平与   TNF-α､IL-6､CRP及评分的相关性

2.5多因素Logistic回归分析

SAP的影响因素 根据结果2.4可 知 血 清miR-365a-3p､miR-10a-5p水 平与TNF-α､IL-6､CRP､APACHEⅡ评分､Ranson评分存在相关性,进 一 步 通 过 多 元 线 性 回 归 验 证 后,血 清miR-365a-3p､miR-10a-5p水平分别与APACHEⅡ评分和Ranson评分存在共线性(VIF=11.237､13.762､12.555､10.931),因此仅纳入TNF-α､IL-6､CRP､miR-365a-3p､miR-10a-5p水 平 作 为 自 变 量｡以 疾 病 严 重程度作为因变量(SAP=1,MAP=0),以TNF-α､IL-6､CRP､miR-365a-3p､miR-10a-5p为 自 变 量(赋 值 均为连续变量)进行多因素Logistic回归分析｡结果发现TNF-α､IL-6､CRP均 为SAP的 危 险 因 素(P <0.05),miR-365a-3p､miR-10a-5p均为SAP的保护因素(P<0.05)｡见表6｡

2.6血 清miR-365a-3p､miR-10a-5p对AP及SAP的 诊 断 价 值

ROC曲 线 表 明,血 清miR-365a-3p､miR-10a-5p联合诊断AP的曲线下 面 积(AUC)大 于miR-365a-3p单 独 诊 断 的AUC(Z =2.539,P =0.011)､miR-10a-5p单独诊断的AUC(Z=4.366,P<0.001),见 表7;血 清miR-365a-3p､miR-10a-5p联 合诊断SAP的AUC大 于miR-365a-3p单 独 诊 断 的AUC(Z=2.078,P=0.038)､miR-10a-5p单独诊断的AUC(Z=2.249,P=0.024),见表8｡

表6 多因素Logistic回归分析SAP的影响因素

表7 血清miR-365a-3p､miR-10a-5p对   AP的诊断价值

表8 血清miR-365a-3p､miR-10a-5p对SAP的诊断价值

3、讨 论 

AP作为突发性的胰腺自身消化引起的炎症反应,是一 种 常 见 的 内 科 疾 病,当 发 展 为SAP时,患 者可能会伴 随 多 器 官 功 能 性 衰 竭,病 死 率 较 高[10]｡因此,寻找AP相关的生物标志物,探讨其与疾病严重程度的相关性 对 避 免 疾 病 恶 化 有 临 床 意 义｡本 研 究 探究AP疾病严重程度的靶向生物标志物,以期能够较早的警示疾病及评估预测价值｡miR-365a-3p作 为 一 种miRNA,主 要 在 细 胞 增殖､凋亡及炎症反应等方面发挥作用[11-12]｡有研究报道,在AP大鼠的AR42J细胞中miR-365a-3p表达下调,过表达miR-365a-3p可抑制雨蛙素诱导的AR42J细胞的凋 亡 和 炎 症 反 应[5-6]｡有 研 究 表 明,miR-365a可能与影响细胞炎症的因子IL-6表达相关,其可以负靶向调节IL-6表达[13]｡在脂多糖诱导的小鼠心肌损伤模型 中miR-365a-3p表 达 下 调,miR-365a-3p过 表达减弱心肌细胞凋亡并抑制炎症细胞因子的表达[14]｡本研究 中,AP患 者 血 清miR-365a-3p水 平 低 于 体 检健康者,且MAP组血清miR-365a-3p水平高于SAP组,说明血清miR-365a-3p水平与AP的发生有关,且血清miR-365a-3p与疾病严重程度有关｡因此,在治疗AP时,可以通过监控AP患者血清中miR-365a-3p表达来判断疾病严重程度,更准确地制定下一步治疗计划｡

miR-10a-5p在正常条件下可以调节细胞增殖､代谢及蛋白质合 成 等,但 其 表 达 异 常 时,会 导 致 细 胞 内稳态的失 衡 及 炎 症 因 子 的 增 加[15-16]｡本 研 究 中,AP患者血清miR-10a-5p水平低于体检健康者,且MAP组血清miR-10a-5p高于SAP组,说明血清miR-10a-5p的 表 达 与AP的 发 生 有 关,且 血 清miR-10a-5p的表达与 疾 病 严 重 程 度 有 关,临 床 在 治 疗AP时,也 可以通过实时监控AP患者血清中miR-10a-5p表 达 精准判断AP病情的严重程度,更好的对症治疗｡另外,本研究相关分析显 示血清miR-365a-3p､miR-10a-5p水平与APACHEⅡ评分､Ranson评分均呈负 相 关,进 一 步 证 明AP患 者 血 清miR-365a-3p､miR-10a-5p水平影 响 着 疾 病 的 严 重 程 度｡在 一 些 研究报道中,TNF-α､IL-6､CRP影响着AP的疾病程度,降低其水平可以改善疾 病[17-18]｡

本 研 究 中,MAP组TNF-α､IL-6､CRP水 平 高 于SAP组,且 血 清miR-365a-3p､miR-10a-5p水 平 与TNF-α､IL-6､CRP均 呈负相 关,进 一 步 揭 示 血 清miR-365a-3p､miR-10a-5p可能 与 炎 症 反 应 有 关,适 当 的 升 高AP患 者miR-365a-3p､miR-10a-5p表达可能会降低炎症因子水平,有利于病情的改善｡本研究多因素Logistic回归分析显示,血清miR-365a-3p､miR-10a-5p均 是SAP的 保 护 因 素｡ 同 时ROC曲线 显 示,血 清miR-365a-3p､miR-10a-5p联 合诊断AP的 效 果 优 于 单 一 诊 断 的 效 果,且 血 清miR-365a-3p､miR-10a-5p联合诊断SAP的效果优于单一诊断的 效 果,表 明 血 清miR-365a-3p､miR-10a-5p联合诊断对AP及SAP均具有一定的诊断价值｡以上的结 果 进 一 步 说 明,血 清miR-365a-3p､miR-10a-5p表达与AP疾 病 程 度 密 切 相 关｡因 此,在 临 床 治 疗上,可 以 通 过 检 测 血 清 中miR-365a-3p､miR-10a-5p表达情况来精准判断AP的疾病严重程度,更好更快地治疗AP,减轻SAP对患者的伤害风险｡临床上通常将降钙素原作为细菌感染的标志物而广泛应用于指导抗菌药物的使用,且研究发现PCT对AP患者病情严重程度的预测方面具有较好性能,王宇鹏等[19]研究发现PCT预测SAP的发生的AUC为0.799,本研究结果显示 血 清 中miR-365a-3p､miR-10a-5p联 合 诊断SAP发生的AUC为0.859,提示二者联合诊断价值在一定程度 上 高 于 临 床 指 标PCT的 诊 断 价 值,但由于本研究样本量较少,后续本研究也将继续扩大样本量,进一步分 析 更 多 临 床 常 见 指 标,探 究 本 研 究 指标的优缺点,进而丰富本研究结果｡综 上 所 述,AP患 者 血 清 中miR-365a-3p､miR-10a-5p水平均呈下降趋势,与AP疾病严重程度有关,SAP组miR-365a-3p､miR-10a-5p水平均低于MAP组,二者联合诊断SAP具有较高的价值｡但本研究收集的样本量较小,没有进一步的研究miR-365a-3p､miR-10a-5p是如何影响AP疾病严重程度及内在机制,后续需加大样本量及进行基础实验研究

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基金资助:广东省基础与应用基础研究基金项目(2020A1515010557);

文章来源:林梵,谭晓宇,刘骏.急性胰腺炎患者miR-365a-3p､miR-10a-5p的表达变化及与疾病严重程度的关系[J].国际检验医学杂志,2025,46(05):563-567+574.