糖类 抗 原242(CA242)是一种唾液酸化糖类抗原,以 糖 蛋 白/糖 脂 的 形 式 存 在 于 细 胞 表 面,或 以O-连接富集 的 糖 蛋 白 的 形 式 存 在 于 血 清 中[1]｡CA242在健康人体中 水 平 较 低,经 过 氧 化 酶 染 色,仅 在 胆 管细胞､胰管细胞中可见少量CA242｡当正常组织发生癌变时,CA242通过肿瘤细胞进入 血 液 循 环,血 清 中CA242水平将明显升高,尤其是在胰腺癌中表达较为明显[2-3]｡目前,CA242的参考区间尚未形成统一标准,多数实验室采用厂家提供的参考区间,然而,由于不同实验室使用的检测系统和试剂盒存在差异,导致CA242参考区间存在差异｡因此,建立适宜的参考区间是各实验室的一项重要任务,这有助于解释临床实验室结果,评估健康状况或诊断和为治疗疾病的医疗决策过程提供参考[4]｡本实验室自2022年8月起使用新的检测 平 台 进 行CA242检 测,且使用试剂说明书提供的参 考 区 间(< 10 U/mL);在 使 用 一 段 时 间后笔者在实际工作中发现此参考区间可能偏低且目前尚无在相同检测系统上自建CA242参考区间的相关文献｡美国临床和实验室标准协会(CLSI)发 布 的EP28-A3C文件阐述了直接法确定参考区间的要求严格,而间接法则以数据为基础更易于操作[5]｡故本研究基于复旦大学附属中山医院实验室信息管理系统数据,采 用Hoffmann法 建 立 上 海 地 区 成 人 血 清CA242的参考区间并验证和评价其是否适用｡

1、资料与方法

1.1一般资料

本研究收集2022年8月至2023年7月复旦大学附属中山医院实验室信息管理系统中所有检测CA242的原始数据共51897例｡

1.2纳入与排除标准

纳入标准:男女不限且年龄≥18岁｡排除标准:(1)临床资料不全;(2)同一个体的多次 结 果 只 选 取 首 次;(3)超 出 检 测 范 围(<0.1 U/mL和>200U/mL);(4)恶性肿瘤相关疾病患者;(5)糖类抗原19-9(CA19-9)高值异常者｡最终共入组19869例｡

1.3仪器与试剂

本实验室CA242检测采用全自动化学发光免疫分析 仪HISCL-5000及 配 套 试 剂 盒 和校准品,检测原理是采用双抗体夹心法的化学发光免疫分析法｡质量 控 制 品 使 用 昆 涞2水 平 肿 瘤 标 志 物质量控制品进行每天的室内质量控制以监测检测系统的稳定性 和 准 确 性,并 通 过Westgard多 规 则 来 进行质量控制,确保实验室所得检测结果的可靠性和准确性｡

1.4验证人群

本 研 究 纳 入2024年1—3月 的691例表观健康人群进行自建参考区间的验证,其 中 男383例,平均年龄(52.55 ± 13.01)岁;女308例,平均年龄(50.37±13.45)岁｡所有对象均经体格检查､心电图检查､影像学检查和实验室检查排除CA19-9､癌胚抗原(CEA)和肝肾功能异常者｡另选取2023年8月至2024年3月试剂说明书推荐的参考 区 间 ≤CA242检测值<自建参考区间的体检人群,查看这部分人群肝肾功能､B超和电子计算机断层扫描(CT)检查结果,用于 评 价 本 研 究 建 立 的 参 考 区 间 是 否 适 用｡本研究方案通过复旦大学附属中山医院伦理委员会审批｡

1.5统计学处理

通过医院实验室信息管理系统以Excel形式 导 出 数 据,再 应 用IBM SPSS24.0软 件 进行统计学分析｡采用正态性检验(K-S检验)判 断 计量资料是否符合正态分布,符合正态分布的资料以x±s表示,两组 比 较 使 用 独 立 样 本t检 验｡不 呈 正 态分布的资料以M (P25,P75)表示,两组比较 采 用 非 参数检验｡分类 变 量 资 料 以 例 数 和 百 分 率 表 示｡使 用Minitab17对呈偏态数据经Box-Cox转换成近似正态分布的数据｡采用Spearman相关分析判断不同性别血 清CA242水 平 与 年 龄 的 相 关 性｡ 使 用Turkey法[6]计算 出 数 据 分 布 的25%和75%百 分 位 点 的 值(P25,P75)及 四 分 位 间 距(IQR),剔 除P25 -1.5×IQR和P75+1.5×IQR以 外 的 数 据,直 至 没 有 异 常离群值｡采用Z检验比较性别和年龄的差异,是否需要建立亚组参考区间｡Z为统计量,Z*为判断限值,当Z>Z*时,认为两组间差异有统计学意义,可 建 立亚组参考区间;当Z<Z*时,认为两组差异无统计学意义 则 无 需 建 立 亚 组 参 考 区 间｡ 根 据Hoffmann法[7]在数据正态拟合的线段上取P95作 为CA242的参考区间｡以P<0.05为差异有统计学意义｡

2、结 果

2.1 CA242研 究 人 群 的 分 布 资 料

经 排 除 标 准 后,获得初步数据共19869例;K-S检验显示数据呈偏态分布(图1A);经Box-Cox转换为近似正态分布的数据(图1B),并通过Q-Q图进一步确认转换后数据的正态性(图1C)｡采用Turkey法剔除离群值,最终确定了有效数据为19653例,其 中 男9859例,平 均 年龄(59.61±14.95)岁;女9794例,平均年龄(66.83±15.30)岁｡

2.2不同性别血清CA242水平与年龄的相关性分析

Spearman相关 分 析 结 果 显 示,男 性 和 女 性 的 血 清CA242水 平 与 年 龄 均 不 存 在 相 关 性(男 性R2 =0.001992,女性R2=0.008125),见图2｡

2.3不同性别和年龄CA242的差异比较

将19653例数据按性别和年龄分组,依据文献[8]采用Z检验确定是否有 建 立 亚 组 参 考 区 间 的 必 要 性｡按 性 别 分组,男9859例年龄分布18~103岁,女性8751例 年龄分布18~100岁,经Z检验发现不同性别的CA242水平差异无统 计 学 意 义(Z=15.65,Z* =27.15,Z<Z* )｡按年龄分组,18~<60岁9517例,≥60岁10136例;经Z检验发现不同年龄组的CA242水平差异无统计 学 意 义(Z=14.91,Z* =27.15,Z<Z* )｡见表1｡

图1  CA242的数据分布图

图2 血清CA242水平与性别和年龄的相关性

2.4 Hoffmann法建立CA242参考区间 对于肿瘤生物标志物,参考下限无临床意义,故以95%位 置 的值作为上 限｡采 用Hoffmann法 建 立CA242的P95参考区间为<14.85U/mL和相应95%CI为(14.21,15.49),自建参考区间高于试剂说明书推荐的参考区间(<10U/mL)｡

表1 不同性别和年龄CA242的差异比较

2.5 CA242自建参考区间的验证和适用性评价

依据WS/T402-2024对自建参考区间进行验证,结果显示有3个CA242的值落在自建参考区间范围外,通过率99.57%｡另外选取2023年8月至2024年3月试剂说明书推荐的 参 考 区 间≤CA242检 测 值<自 建 参考区间的体检人群共580例,查看这部分人群肝肾功能､B超 和CT的 检 查 结 果,结 果 显 示 共 有35例(6.03%)肝肾功能､B超或CT存在异常,其余545例(93.97%)的其他实验室检查及影像学检查均正常｡

3、讨 论 

2020年胰腺癌早诊早治专家共识已将CA242作为筛查胰腺癌的肿 瘤标志物之一[9]｡ 研 究 显 示CA242诊断胰腺癌的灵敏度与特异度分别为71.9%与86.8%[10],且不受胆汁等因素干扰,较CA19-9更具特异性｡同 时,CA242可 作 为CA19-9的 补 充,在胰腺癌早期诊 断 中 发 挥 作 用,并 可 辅 助CEA提 高 结直肠癌预后预测的准确性[11]｡此外,CA242对胃癌､肝癌等癌症及2型糖尿病､冠心病也有一定的诊断价值[2]｡鉴于CA242的 标 准 化 参 考 区 间 尚 未 达 成 共识,且现行区间主要依据试剂说明书推荐,因此,本实验室有必要根据自身条件建立适宜的CA242参考区间,优化临床诊疗效果｡国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)和CLSI指 南 明 确 指 出,直 接 法 建 立 参 考 区 间 依 然 是 金 标准[5]｡然 而,由于直接法研究周期长､操 作 复 杂 和 成本高昂等缺点,大多数实验室倾向于采用试剂厂商推荐的参考区间[12]｡但是,由于地理､人群 差 异 及 疾 病流行病学特征的多样性,这些直接采用的生物参考区间可能并不 适 合 本 地 人 群｡随着计算机技术的迅猛发展,利用实验 室 存 储 的 大 量 数 据,基 于 数 学 统 计 的生物参考区间(间接法)的建立变得可行,并成为研究的热点,且得到了IFCC的推荐[13]｡EP28-A3C指 南允许实验室通过间接法来建立参考区间[5]｡目前,多个实验室已通过间接法建立多种检验项目的参考区间[14-15]｡其中Hoffmann法[16]已被应用于多个实 验室指标参考区间的建立,如张顺利等[17]利用大数据间接法建立成年人促甲状腺激素参考区间;刘晓文等[18]采用Hoffmann法建立上海地区人群血清铁蛋白参考区间｡本研究从实验室信息管理系统中调取CA242的检测数据,以Hoffmann法建立CA242参考区间｡获得符合要求的数据后经K-S检验呈偏态分布,对数据进行Box-Cox转换呈近似正态分布后采用Turkey法剔除异常离群值,最后获得有效数据共19653例｡研究显示不同 性 别 血 清CA242水 平 与 年 龄 无 相 关 性,再依据WS/T402-2024[8]是否需要建立亚组参考区间可按性别和 年 龄 分 组 进 行Z检 验[19],而 研 究 结 果显示性别和年龄分组差异均无统计学意义(Z<Z* )｡因此,本研究 无 需 建 立CA242性 别 和 年 龄 亚 组 的 参考区间,并直接以Hoffmann法统一建立成年人血清CA242的参考区间为<14.85U/mL｡本研究建立的参考区 间 高 于 试 剂 说 明书推荐的参考区间(<10U/mL),这可能是与研究人群数量､地域及参考区 间建立方法 的 不 同 有 关;同时本研究发现血清CA242水平与性别 无 关,这 与 李 响 新 等[20]基 于MAGLUMI4000Plus检测平台建立湖北宜昌地区成人 血 清CA242参考区间(<15.08U/mL)的研究结果一致且两个研究的自建参考区间值也较接近,不同的是本研究显示 年 龄 无 需 建 立 亚 组 参 考 区 间;此 外,李 国 立等[21]的研究认为CA242应按不同性别建立参考区间(男性0.3~7.6ng/mL,女性0.4~10.7ng/mL),其中女性应按不 同 年 龄 段 建 立 参 考 区 间｡这 些 差 异 均 与检测平台､参与建立参考区间人群数量､地域差异､数据处理方法及统计方法不同有关｡因此,验证自建参考区间也是至 关 重 要 的｡CLSIEP28-A3C指 南 为 常规临床实验室推荐的验证参考区间的标准方法是从当地人群中收 集 和 分 析20例健康受试者的标本,并将这些值与自建参考区间进行比较｡如果20个标本中不超过2个不在参考区间内,则验证通过并可使用｡在 本 研 究 中,691例 表 观 健 康 人 群 仅 有3例CA242检测结果 超 出 自 建 参 考 区 间,说 明 验 证 通 过,自建参考区间可用于本实验室｡另外,本研究进一步筛查2023年8月至2024年3月试剂说明书推荐的参考区间≤CA242检 测 值<自建参考区间的体检人群共580例,查看他们的肝肾功能､B超和CT的检查结果,发现 有35例(6.03%)存 在 异 常,而 另 外545例(93.97%)的其他实验室检查及影像学检查均正常,这些研究结果表明试剂说明书推荐的参考区间的假阳性率明显高于自建参考区间｡与此同时,在对这些异常体检者进行追踪时,笔者注意到他们中的大多数会因肿瘤标志物偏高而选择再次就医进行深入检查,结果却未发现异常,建议定期随访｡这些结果进一步强调了实验室建立适当参考区间的必要性,以降低假阳性率,避免给非患病人群带来不必要的心理压力和经济负担｡相较于其他研究,本研究的主要优势在于较大的研究数据集及通过两种方式对自建参考区间进行验证｡然而,间接 法 也 存 在 一 定 的 局 限 性,因 为 其 所 依赖的数据可能包含错误值,且无法确保排除了所有可能引起混淆的并发症或临床状况｡综上所述,本研究利用间接法建立上海地区成人血清CA242的参考区间相比于试剂说明书推荐的参考区间更适用 于 本 实 验 室,且 能 为 健 康 体 检､相 关 性疾病筛查及治疗监测提供临床依据｡

参考文献:

[6]纪伟,田 国 力,朱 之 星,等.间接法建立上海地区新生儿G6PD筛查临界值 的 可 行 性[J].检 验 医 学,2022,37(2):112-116.

[8]中华人民共和国国家卫生健康委员会.临床实验室定量检验项目参考区间的制定:WS/T402-2024[S].北 京:中国标准出版社,2024.

[9]中华医学会肿瘤学分会早诊早治学组.中华医学会肿瘤学分会胰腺癌早诊 早治专家共识[J].中 华 肿 瘤 杂 志,2020,42(9):706-712.

[12]徐世骥,沈隽霏,吴文浩,等.间接法建立上海地区甲胎蛋白和癌胚抗原参考区间[J].国际检验医学杂志,2020,41(23):2844-2847.

[17]张顺利,莫玉,成斐,等.利用大数据间接法建立成年人促甲状腺激 素 参 考 区 间[J].中华检验医学杂志,2021,44(7):627-632.

[18]刘晓文,邵文琦,朱晶,等.间接法建立上海地区人群血清铁蛋白参考区间[J].检验医学,2024,39(6):524-529.

[20]李 响 新,刘 德 慧,高 永 升,等.正 常 成 人NSE､CA50和CA242参考区间的研究[J].标记免疫分析与临床,2021,28(6):1002-1006.

基金资助:国家重点研发计划项目(2022YFC3602301,2022YFC3602302);国家自然科学基金面上项目(82172348);上海市临床重点专科建设项目(shslczdzk03302);

文章来源:潘亚芳,邵文琦,朱晶,等.间接法建立上海地区成人血清CA242的参考区间[J].国际检验医学杂志,2025,46(05):530-534.