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Ets-1和survivin在宫颈鳞状细胞癌中的表达研究

2024-04-12 8 上传者：管理员

摘要：目的探讨宫颈鳞状细胞癌(宫颈鳞癌)Ets-1和survivin表达与患者临床病理指标的关系。方法应用免疫组化EliVisionTM plus二步法检测72例宫颈鳞癌手术标本及30例癌旁宫颈组织Ets-1和survivin表达，分析其表达与患者年龄、癌灶大小、浸润深度、分化等级、TNM分期、术前淋巴转移、术后5年内复发转移7项指标的关系。结果 Ets-1阳性染色可见于细胞核及细胞质，survivin阳性染色多见于细胞质，少见于细胞核。癌组织Ets-1和survivin阳性率(分别为63.9%,72.2%)均显著高于癌旁组织(分别为13.3%,3.3%)(P<0.05)。患者年龄、癌灶大小均与Ets-1和Survivin表达阳性率无关(P>0.05);浸润深度、分化等级、TNM分期、术前淋巴转移、术后5年内复发转移5项指标均与Ets-1和survivin表达阳性率相关(P<0.05)。72例患者Ets-1和survivin共阳率为58.3%,共阴率为22.2%,两者表达呈正相关(r=0.49,P<0.05)。结论 Ets-1和survivin与宫颈鳞癌的发生发展密切相关，两者高水平表达预示癌组织侵袭能力强、分化等级低、病情发展快、淋巴转移早、患者预后差。

关键词：
Ets-1
Survivin
宫颈鳞状细胞癌
肿瘤浸润
肿瘤转移
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宫颈鳞状细胞癌(简称宫颈鳞癌)是宫颈浸润性癌最常见的病理类型，尽管采取早期手术切除、中晚期放化疗等多种治疗措施，仍有不少患者终因复发转移而死亡[1,2,3,4,5]。近年研究表明，宫颈鳞癌发生发展过程中存在多种肿瘤标记物异常表达[6,7,8]。Ets-1(E26 transformation-specific-1)属信号依赖转录因子Ets家族，survivin属凋亡抑制蛋白家族，两者在许多恶性肿瘤中高水平表达。我们应用免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)染色技术检测宫颈鳞癌及癌旁宫颈组织中Ets-1和survivin的表达，探讨两者与患者年龄、癌灶大小、浸润深度、分化等级、TNM分期、术前淋巴转移及术后5年内复发转移7项临床病理指标的关系。

1、材料与方法

1.1材料

回顾性分析2006-01-2013-12月陆军第八十一集团军医院行根治性手术切除的72例宫颈鳞癌标本。纳入标准：①术前病理活检、术后普通病理苏木素-伊红(HE)染色及IHC染色确诊为Tis期、T1期、T2期宫颈鳞癌；②术前未接受过放化疗、靶向治疗等抗癌措施；③临床资料齐全，手术规范，恢复顺利。排除标准：①临床病理确诊为T3期和T4期宫颈鳞癌；②HE染色及IHC染色诊断为宫颈腺癌、腺鳞癌、小细胞癌及其他罕见组织类型；③并发其他恶性肿瘤的多源癌；④并发性病或严重的妇科炎性疾病；⑤并发妊娠；⑥合并严重系统性疾病或凝血机能异常。患者年龄39～81岁，平均(46.2±7.1)岁；癌灶直径0.5～4.6cm,平均(3.1±1.3)cm;遵照《AJCC癌症分期手册(第7版)》进行TNM分期[9]:Tis期(FIGO 0期)、T1期(FIGOⅠ期)、T2期(FIGOⅡ期)分别为4、20、48例；癌组织分化等级：高、中、低分化分别为8、58、6例。选取30例距宫颈癌灶3 mm处的宫颈组织作为癌旁对照组。

诊疗方案上报医院伦理委员会讨论通过后实施，患者及(或)亲属均知情同意。

1.2 IHC染色方法

采用IHC染色EliVisionTM plus二步法检测Ets-1和survivin在宫颈鳞癌及癌旁组织中的表达。手术标本常规固定、包埋、制片，切片厚度4μm。IHC染色时选取与HE染色相邻切片，应用微波仪予以抗原修复。兔抗人Ets-1单克隆抗体为即用型，survivin单克隆抗体为浓缩型，稀释浓度为1∶50。3,3'-二氨基联苯胺显色剂和EliVision试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司，IHC染色技术步骤、阳性对照及阴性对照方法参见相关文献[10,11]。

1.3判定标准

IHC染色背景清晰，黄色、棕黄色或棕褐色颗粒为阳性，依据染色深浅度和染色癌细胞百分比2项指标判分定性：①染色深浅度分为4个等级：无染色→黄色→棕黄色→棕褐色，对应计分为0、1、2、3分；②染色癌细胞百分比分为4个等级：≤5%→(6%～30%)→(31%～69%)→≥70%,对应计分为0、1、2、3分。定性总分为①、②计分相加之和：≤2分为阴性(-),3～6分为阳性，其中3分、4分为弱阳性(+),5分、6分为强阳性(++)。

1.4观察指标

①Ets-1和survivin在宫颈鳞癌及癌旁组织表达部位及阳性率；②Ets-1和survivin表达与宫颈鳞癌患者年龄(按≥46岁与<46岁分组)、癌灶大小(按最大径≥3 cm与<3 cm分组)、浸润深度(按≥3 mm与<3 mm分组)、分化等级(按高、中、低分组)、TNM分期[按(Tis期+T1期)与T2期分组]、术前淋巴转移(按有、无分组)、术后5年内复发转移(按有、无分组)7项临床病理指标的关系；③Ets-1和survivin在宫颈鳞癌组织表达的相关性。

1.5统计学方法

采用SPSS 22.0处理数据，IHC染色判定为Ets-1和survivin阳性组或阴性组例数采用n(%)表示，组间比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。两者表达的相关性采用列联系数分析。

2、结果

2.1 Ets-1和survivin在宫颈鳞癌及癌旁组织表达部位及阳性率

Ets-1阳性染色可见于细胞核及细胞质。Survivin阳性染色多见于细胞质，少见于细胞核。癌组织与癌旁组织Ets-1和survivin阳性率比较差异均有统计学意义(P<0.05)(表1)。

表1 Ets-1和survivin在宫颈鳞癌和癌旁组织表达阳性率n(%)

2.2 Ets-1和survivin表达与宫颈鳞癌患者7项临床病理指标的关系

Ets-1和survivin表达在不同年龄及癌灶大小组间阳性率差异均无统计学意义(P>0.05),在浸润深度≥3 mm与<3 mm、高、中、低3种分化等级、(Tis+T1)期与T2期、术前有淋巴转移与无淋巴转移、术后5年内复发转移与无复发转移患者各组间阳性率差异均有统计学意义(P<0.05)(表2)。

表2 Ets-1和survivin表达与宫颈鳞癌患者7项临床病理指标的关系n(%)

2.3 Ets-1和survivin在宫颈鳞癌组织表达的相关性

72例患者Ets-1和Survivin同时阳性者42例，共阳率为58.3%;同时阴性者16例，共阴率为22.2%。经列联系数相关性分析，两者在宫颈鳞癌的表达呈正相关(r=0.49,P<0.05)(表3)。

表3 Ets-1和survivin在宫颈鳞癌组织表达的相关性n(%)

3、讨论

宫颈浸润癌主要包括鳞状细胞癌、腺癌、腺鳞癌、小细胞癌以及较少见的透明细胞癌、神经内分泌癌、绒毛管状腺癌等，其中宫颈鳞癌约占全部病例的3/4以上。为了提高研究结果的客观性及可靠性，我们针对性选择根治性手术切除的Tis期、T1期、T2期宫颈鳞癌作为研究对象，观察72例宫颈鳞癌及30例癌旁宫颈组织IHC染色结果。结果表明，癌组织Ets-1和survivin阳性率均显著高于癌旁组织，提示两者表达水平有助于鉴别宫颈鳞状上皮组织的良恶性，高水平表达可用于评估宫颈组织恶性程度。曹宇新等[12]报道，与子宫良性病变患者对比，宫颈上皮内瘤变患者经阴道多普勒超声检测宫颈血流阻力指数降低，而血清survivin水平升高，对癌前病变有较好诊断价值。刘敏等[13]报道，survivin阳性细胞率与高危型人乳头瘤病毒(hr-HPV)多重感染呈正相关，动态监测有助于宫颈癌的诊断。

Ets-1基因定位于染色体11q23,编码的蛋白质可激活某些靶基因转录，参与免疫调控、降解细胞外基质、促生肿瘤血管等多种生物学过程。在恶性肿瘤发展过程中，Ets-1不仅参与肿瘤血管生成，还可降低细胞黏附能力，促进癌细胞游走、转移。近期研究发现，Ets-1在子宫内膜癌等多种癌瘤中异常表达，与癌分化程度及临床分期相关[14,15,16]。张蕾等[17]研究认为，Ets-1高表达可加速宫颈癌侵袭转移进程。Survivin基因定位于染色体17q25,编码的蛋白质具有显著的抗凋亡作用。Survivin在正常组织不表达或低表达，在许多恶性肿瘤组织表达上调，参与G2/M期调节，其高水平表达有利于肿瘤细胞脱离监控机制，抑制其凋亡，导致异常增殖[18,19]。赵艳玲等[20]研究发现，临床病理分期越高的宫颈癌survivin表达水平也越高。本研究结果表明，Ets-1和survivin阳性率在患者不同年龄(以平均年龄46岁为界分为≥46岁组和<46岁组)及癌灶大小(以最大直径平均3 cm为界分为≥3 cm组和<3 cm组)各组间差异无统计学意义，说明宫颈鳞癌无论发生在任何年龄，无论生长至任何大小，两者均可能呈高水平表达。在不同浸润深度、分化等级、TNM分期、术前淋巴转移、术后5年内复发转移各组间阳性率差异有统计学意义，间质浸润越深、癌细胞分化越低、TNM分期越高、术前淋巴转移越早，两者表达阳性率越高，表明高水平表达Ets-1和survivin的宫颈鳞癌具有较强的浸润能力，两者均参与了宫颈组织由良性到低度恶性再至高度恶性的发展过程，在早期原位癌向进展期浸润性癌演变发展以及淋巴转移过程中，Ets-1和survivin参与度越来越高，两者的表达水平有助于提高临床病理分期的准确性。随访5年调查发现，术后5年内有复发转移者Ets-1和survivin阳性率显著高于无复发转移者，表明两者高水平表达预示患者生存期短、预后差。通过列联系数相关性对比分析，发现两者表达呈正相关，提示在宫颈鳞癌的恶性发展过程中，两者可能存在一定的协同作用。一些研究表明，对放疗敏感的宫颈鳞癌患者，survivin阳性率明显低于对放疗抵抗的患者，说明survivin表达与放疗敏感性有关[21,22,23]。随着有关试验和临床研究的不断深入，有望确定针对宫颈鳞癌选择性基因抑制治疗的新靶点，推进精准的个体化分子治疗。

综上，Ets-1和survivin在宫颈鳞癌组织中表达显著高于癌旁组织，两者表达呈正相关，其表达强度及共阳率越高，预示癌组织侵袭能力强、分化等级低、临床发展快、淋巴转移早、患者预后差，联合监测两者表达水平对评估患者预后具有一定指导价值。深入探讨两者在宫颈鳞癌发展的生物学机制，有望建立多靶向联合治疗新途径、新方案。

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