首页 > 论文范文 > 医药卫生论文 > 医学毕业论文 > 中药学毕业论文 > 复方甘露清热合剂质量标准研究

复方甘露清热合剂质量标准研究

2023-07-10 86 上传者：管理员

摘要：建立复方甘露清热合剂的质量标准。方法:采用薄层色谱法(TLC法)对复方甘露清热合剂中青蒿、黄芩和连翘进行定性鉴别；应用HPLC法对复方甘露清合剂中黄芩主要成分黄芩苷进行含量测定和方法学验证，并对复方甘露清合剂的相对密度和pH值进行检测。结果:TLC法能够有效鉴别处方中青蒿、黄芩和连翘，对应斑点显色清晰，分离度好，阴性对照无干扰；含量测定中，黄芩苷在0.0749～0.7486 mg/L浓度范围内线性关系良好，线性方程为y=4049.9936x-8.5246(R2=1.0000),平均回收率为100.93%, RSD为0.28%;复方甘露清热合剂相对密度和pH值均符合既定规定。结论:薄层色谱法进行定性分析、HPLC法进行定量分析简单易操作，专属性强，灵敏度高，重现性好，可用于复方甘露清热合剂的质量控制。

关键词：
复方甘露清热合剂
清热解毒
薄层色谱法
质量标准
高效液相色谱法
加入收藏

复方甘露清热合剂由青蒿、黄芩、连翘、滑石、茵陈等多味药材组成，具有清热解毒、利湿化浊等功效，主要用于疫毒闭肺、湿热内蕴型等证，在临床上取得良好的治疗效果。作为本院新开发的院内中药制剂，为了进一步对制剂的质量进行控制，确保患者的用药安全有效，课题组根据《中国药典》2020年版一部和四部及相关法规要求[1],对复方甘露清热合剂的质量标准进行了研究。

在建立质量标准研究中，对于定性鉴别的药味选择，考虑复方甘露清热合剂方中主要药味和特色药味，通过多次预实验的筛选，最终将青蒿、黄芩、连翘确定为薄层鉴别方法定性质量控制指标。由于君药黄芩中的黄芩苷含量较高，故以黄芩苷为指标，采用HPLC法进行黄芩苷含量测定[2,3,4],为进一步制定规范、科学的复方甘露清热合剂质量标准提供重要参考依据。

1、材料

KQ-500DB数控超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司；硅胶G板：青岛海洋化工厂；U3000高效液相色谱仪：Thermo; AL204型电子天平：METTLER TOLEDO。

黄芩苷对照品(批号：110715-201318,93.3%)、青蒿对照药材(批号：121016-201005)、连翘苷对照品(批号：110821-201514):中国食品药品检定研究院；复方甘露清热合剂(批号：200101、200102、200103):杭州市西溪医院)。

甲醇为色谱纯，水为纯化水，甲苯、乙酸乙酯、丁酮、三氯化铁、甲醇、无水乙醇、甲酸、冰醋酸、盐酸、硫酸等试剂均为分析纯。

2、方法与结果

2.1薄层色谱法鉴别

2.1.1青蒿[5]

取复方甘露清热合剂适量蒸干，研细，取粉末2.0 g,加乙醇20 mL,超声处理30 min,滤过，滤液浓缩至1.5 mL,作为供试品溶液。另取青蒿对照药材1 g,加水20 mL,煮沸30 min,滤过，滤液蒸干，残渣加入乙醇20 mL,同法制备成对照药材溶液。按处方(除青蒿外)的工艺和制法制成阴性对照品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。参照《中国药典》2020年版四部(通则0502)中的薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液5μL和对照药材溶液5μL,分别点于同一块硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(8∶3∶0.5)作为展开剂展开，取出，晾干，置于紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显现相同颜色的斑点，且阴性对照无干扰。见图1。

图1青蒿的薄层色谱鉴别

1.青蒿对照药材；2.阴性样品；3～5.复方甘露清热合剂(200101,200102,200103)

2.1.2黄芩[6,7]

量取复方甘露清热合剂30 mL,加入盐酸调节pH值至1～2,置80℃水浴上加热15 min,用15 mL乙酸乙酯振摇提取，重复2次，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇5 mL溶解，作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的对照品溶液。按处方(除黄芩外)的工艺与制法制成阴性对照品，按供试品溶液的制备方法制备，作为阴性对照品溶液。参照《中国药典》2020年版四部(通则0502)中的薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μL,分别点于同一块硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)作为展开剂展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显现相同颜色的斑点，且阴性对照无干扰。见图2。

图2黄芩的薄层色谱鉴别

1.黄芩对照药材；2.阴性样品；3～5.复方甘露清热合剂(200101,200102,200103)

2.1.3连翘[8,9]

取复方甘露清热合剂10 mL,加入20 mL乙酸乙酯振摇提取，重复2次，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣中加入甲醇2 mL溶解，作为供试品溶液。另取连翘苷对照品，加入甲醇制成每1 mL含1 mg的对照品溶液。按处方(除连翘外)工艺与制法，制成阴性对照品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。参照《中国药典》2020年版四部(通则0502)中的薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μL,分别点于同一块硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水(9∶1∶1)为展开剂展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，于日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显现相同颜色的斑点，且阴性对照无干扰。见图3。

图3连翘的薄层色谱鉴别

1.连翘对照药材；2.阴性样品；3～5.复方甘露清热合剂(200101,200102,200103)

2.2黄芩苷含量测定

2.2.1色谱条件

C18色谱柱(Diamonsil plus, 250 mm×4.6 mm, 5μm),流动相为甲醇-0.2%磷酸(47∶53),流速1.0 mL/min,检测波长280 nm;柱温25℃,进样量10μL。

2.2.2溶液制备

对照品溶液配制：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加入甲醇制成每1 mL含黄芩苷对照品40μg,即得。

供试品溶液制备：精密量取复方甘露清热合剂1 mL,置50 mL容量瓶中，加70%乙醇适量超声处理(250 W,40 kHz)30 min,放冷，定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

阴性样品溶液制备：按处方量制成不含黄芩苷的阴性溶液，按供试品溶液的制备方法制备，即得。

2.2.3专属性试验

按拟定的方法取同一批样品(批号：200101)制备供试品溶液、对照品溶液、阴性样品溶液，在拟定色谱条件下检测，结果显示黄芩苷对照品与样品中其他组分的色谱峰可基线分离，分离度大于1.5;按黄芩苷峰计算，理论板数应≥2 500。在黄芩苷色谱峰位置处阴性样品溶液无相应峰出现，对其无干扰，方法专属性良好。见图4。

图4复方甘露清热合剂HPLC色谱图

2.2.4线性关系考察

精密称取黄芩苷对照品进样，测定峰面积，并以色谱峰面积值(A)对进样量(μg)进行回归，以进样量(μg)为横坐标，得线性方程为：y=4049.9936x-8.5246,R2=1.0000(n=5)。结果说明黄芩苷的进样量在0.0749～0.7486 mg/L范围内与色谱峰面积线性关系良好。

2.2.5精密度试验

精密吸取同一黄芩苷对照品溶液，按“2.2.1”项下条件重复进样5次，测得黄芩苷峰面积，结果峰面积RSD=0.87%(n=5),显示本实验所用仪器的精密度良好。

2.2.6重复性试验

取相同批号药材制备6份复方甘露清热合剂，依据供试品溶液的制备方法制备6份黄芩苷供试品溶液，测定样品中黄芩苷峰面积，测得黄芩苷平均含量为0.4393 g/L,RSD=1.85%(n=6),表明本检测方法的重复性较好。

2.2.7稳定性试验

取同一复方甘露清热合剂，按供试品溶液的制备方法制备黄芩苷供试品溶液，按“2.2.1”项下条件分别在0、2、4、8、12、24 h进样，测定样品中黄芩苷峰面积，测得供试品中黄芩苷的峰面积RSD=0.52%,供试品溶液放置0、2、4、8、12、24h进样主峰面积无明显变化(n=6),说明供试品溶液室温下放置至少24 h内是稳定。

2.2.8加样回收率试验

精密量取已知含量的样品(200101)0.5 mL共6份，分别加入一定量黄芩苷标准品，按照供试品溶液的制备方法制备，作为加样回收供试品溶液，按精密度的方法注入液相色谱仪，用以下公式计算加样回收率，测得平均回收率为100.93%,RSD=0.28%(n=6),表明本方法具有良好的回收率。见表1。

表1黄芩苷加样回收率试验结果(n=6)

2.2.9样品含量测定

取3批复方甘露清热合剂，精密量取1 mL,按“2.2.2溶液配制”项下供试品溶液的制备方法制成供试液，分别进样10μL,测定峰面积，计算得3批样品平均含量分别为2.3544、2.3505、2.3620 g/L。见表2。

表2样品含量测定(n=3)

2.3相对密度检测试验

取复方甘露清热合剂3批(200101、200102、200103)样品，按相对密度测定法(《中国药典》2020年版四部通则0601的比重瓶法)检测，测得3批复方甘露清热合剂样品相对密度均为1.03,表明相对密度测定值均在1.02以上，故将其相对密度限度值设定为：应不低于1.02。

2.4 pH值检测试验

取复方甘露清热合剂3批(200101、200102、200103)样品，依照《中国药典》2020年版四部通则0631的pH值测定法进行测定，测得3批复方甘露清热合剂样品pH值均为5.0,故将其相对密度限度值设定为4.0～6.0。

3、讨论

复方甘露清热合剂主要是针对病毒性肺炎疫毒闭肺的临床表现而开发。由多味中药材组成，其中黄芩、青蒿、连翘为主要药味。黄芩善清心、肺之湿热与气分之实热，尤善清肺经气分之热[10,11,12],具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤作用[13,14,15,16,17,18];青蒿含有倍半萜、二萜、黄酮、挥发油等多种化学成分，具有抗疟疾、抗炎、免疫调节、抗真菌、抗病毒等药理作用[19,20];连翘具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗病毒和保护肝脏等多种药理作用[21]。

课题组采用TCL法对黄芩、连翘和青蒿3味主要药材进行鉴别。考虑同一湿度条件下的低温、常温，常温条件下低湿、高湿和不同厂家的薄层板对试验的影响，前期试验中将3味药材在上述条件下进行薄层鉴别，结果表明不同品牌的薄层色谱板、温度和湿度的变化可导致色谱效果略有不同，但均能达到良好分离效果，方法的耐用性和复方甘露清热合剂的稳定性良好。本文仅列举青蒿、黄芩和连翘3味药材在常温下的薄层鉴别，结果显示复方甘露清热合剂色谱中与对照药材色谱相应位置显相同颜色的荧光斑点，分离度好，主斑点Rf值适中，无其他药味干扰。

复方甘露清热合剂中黄芩是君药，黄芩苷是黄芩的主要活性成分之一，故选取其作为复方甘露清热合剂含量测定指标。根据中国药典2020年版一部及文献，采用HPLC测定黄芩苷含量，由于HPLC在测定过程中具有高效、高灵敏度等优点，因此，HPLC也是目前应用最为广泛的黄芩苷测定方法[22,23]。黄芩苷含量测定实验中，对黄芩苷对照品在紫外吸收区域进行扫描，黄芩苷在280 nm波长处有最大吸收峰，供试液中其他成分对测定无干扰，故确定高效液相的吸收波长为280 nm。HPLC法测定黄芩苷灵敏度高，稳定，且保留时间适中、峰型良好。在色谱条件的选取过程中，参照《中国药典(一部)》(2020年版)黄芩药材含量测定项下的色谱条件，即色谱柱选择为C18柱，流动相选择为甲醇-0.2%磷酸溶液(47∶53,V/V),以此为基础，考察了不同浓度的磷酸溶液对黄芩苷含量测定结果的影响。实验结果表明，以甲醇-0.2%磷酸溶液为流动相，于280 nm波长下检测，复方甘露清热合剂黄芩苷分离效果良好，且其他成分对其无干扰。

本实验采用HPLC法对3批复方甘露清热合剂中的黄芩苷含量进行测定，黄芩苷平均含量在2.35～2.37 g/L之间，含量稳定，批间差距也较小。实验表明70%乙醇提取条件下进行专属性检测、精密度、重复性、回收率、含量测定等均符合相关要求，本方法检测复方甘露清热合剂中黄芩苷含量准确可靠。

参考文献:

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部和四部)[M].北京:中国医药科技出版社,2020.

[2]龙宇,向燕,谭裕君,等.黄芩苷药理作用及新剂型的研究进展[J].中草药,2019,50(24):6142-6148.

[3]邹沫君,任磊.RP-HPLC法同时测定三黄片中4中有效成分含量测定[J].国际中医中药杂志,2019,41(3);279-283.

[4]钟东铃,卢小燕,蔡丹燕,等.HPLC法测定久芝清心丸中黄芩苷的含量[J].质量安全与检验检测,2020,30(6):13-15.

[5]周衡,宋祺,申金燕,等.优化五味常青颗粒中青蒿的提取工艺研究[J].科技创新与应用,2021,11(14):84-86

[6]罗晖明,聂平,丁野,等.基于供试液多维使用的炎可宁丸鉴别优化研究[J].药品评价,2021,18(16);977-979.

[7]靳贝贝,裴香萍,梁惠珍,等.门氏柴胡理中颗粒的薄层鉴别及含量测定[J].世界中医药,2020,15(7):1012-1015.

[8]特格喜白音,敖登其木格,田吉,等.蒙药嘎日西散质量标准研究[J].世界中医药,2021,16(19);:2871-2875.

[9]胡亮,陈征,李瑞莲,等.连知解毒胶囊质量标准研究[J].中国药事,2020,34(11):1308-1313.

基金资助:浙江省杭州市生物医药和健康产业发展扶持科技专项(2021WJCY185);过建春名老中医专家传承工作室(GZS2020035);