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鼻腔鼻窦恶性黑色素瘤临床病理特征及肿瘤浸润淋巴细胞亚群相关性

2025-03-27 66 上传者：管理员

摘要：目的总结鼻腔鼻窦恶性黑色素瘤(MMNS)的临床病理学特点,提出MMNS预后预测因子;观察并分析CD4､CD8､CD20的表达､定位以及其与预后的关系｡方法回顾分析87例MMNS患者临床病理资料,总结其临床病理特征;采用EnVision免疫组织化学(IHC)染色方法观察CD4､CD8､CD20在MMNS中的表达及定位情况｡结果 87例MMNS患者中,男性46例,女性41例,年龄在43至81岁之间,中位年龄60岁｡鼻腔合并鼻窦及周围组织浸润､肿瘤体积大及AJCC分期高则预后差(P<0.05);统计结果显示性别､年龄､组织学类型､黑色素颗粒､核分裂象等与生存期之间无显著相关性(P>0.05)｡CD4+､CD8+及CD20+肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)免疫亚型在瘤内间质与肿瘤基底分组之间差异均有统计学意义(P<0.05),且瘤内间质CD4+､CD8+及CD20+TILs的阳性计数的高低与肿瘤基底部TILs密度呈正相关(P<0.01)｡不管是瘤内间质还是肿瘤基底部CD20+B细胞与CD4+､CD8+T细胞分布于同一区域,为较均匀的掺杂分布,CD20+B细胞没有中心聚集形成三级淋巴结构的趋势｡不同亚型分组的总生存期之间的差异无统计学意义｡结论不论是瘤内间质还是肿瘤基底部间质,CD20+B细胞的数量均明显少于CD4+､CD8+T细胞,不能形成三级淋巴结构,与皮肤恶性黑色素瘤不同,可能是MMNS预后差的一个原因｡

关键词：
CD20
CD4
CD8
肿瘤浸润淋巴细胞
鼻腔鼻窦黏膜黑色素瘤
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鼻腔鼻窦恶性黑色素瘤(malignant melanoma innasal cavity and paranasal sinuses,MMNS)是一种罕见的恶性肿瘤,预后不良｡肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytes, TILs)在表型和功能上都存在异质性,TILs的数量经常被用来提示患者预后,对MMNS肿瘤中TILs亚型与预后的研究较少｡本研究总结MMNS的临床病理学特点,提出MMNS预后的预测因子,观察并分析CD4､CD8､CD20的表达､定位及与生存期之间关系,为临床选择､调整治疗方案提供支持｡

1、材料与方法

1. 1研究对象

收集2008年6月至2018年6月期间原发性MMNS病例87例的临床及病理资料(首都医科大学附属北京同仁医院85例,北京市垂杨柳医院2例) ,行临床病理学观察､随访及免疫组织化学染色｡本研究经北京同仁医院伦理委员会批准(TRECKY2019⁃215)｡

1. 2方法

1. 2. 1临床病理学观察:

87例MMNS均由两名副高级以上病理医师进行独立阅片复查,经过S100､HMB45､melan⁃A免疫组织化学染色证实｡所有患者术前均无辅助治疗｡采用电话随访方式,随访时间为2007年6月至2020年12月,随访0~77个月,死亡73例,存活6例,8例随访观察失败｡

1. 2. 2 CD4､CD8､CD20免疫组织化学染色:

首先对其中48例含有黑色素颗粒的石蜡切片进行褪黑处理,实验步骤是用0. 3%高锰酸钾滴染10 min,随即2%草酸滴染2~3 min｡CONFIRM CD4( SP35)小鼠单克隆抗体､CON⁃FIRM CD8 ( SP57)小鼠单克隆抗体及CONFIRMCD20( L26)小鼠单克隆抗体(罗氏制药公司)在BenchMark ULTRA仪器上配合ultraView UniversalDAB检测试剂盒的染色步骤｡

1. 2. 3 CD4､CD8､CD20判读方法:

细胞膜出现棕黄色或棕褐色着色为阳性表达｡瘤内间质TILs的判读参照文献[1⁃2]的计数方法｡肿瘤基底部TILs(肿瘤边缘与周围间质相邻区,淋巴细胞必须与肿瘤细胞相邻)相对瘤内间质TILs密度增高,并且部分有聚集倾向,实际工作中不利于计数,为了便于分组,根据参考文献[3]分为活跃组､不活跃组及缺失组｡

1. 3统计学分析

采用SPSS 24. 0软件进行统计学分析｡数据分析采用χ2检验和Fisher精确检验｡生存分析采用的Kaplan⁃Meier分析｡所有统计检验均为双侧,P<0. 05认为差异具有统计学意义｡

2、结果

2. 1临床病理特征

研究组包括87例MMNS患者(表1) ,41例女性和46例男性,年龄在43至81岁之间,中位年龄60岁｡鼻腔为好发解剖位置,中位生存时间是28个月;鼻腔合并鼻窦者16个月,发生于鼻腔合并鼻窦的患者预后更差(P = 0. 001)｡MMNS标本形状不规则,取材时准确测量肿瘤大小较困难,本研究根据计算机断层成像报告描述,肿瘤大小范围为0. 2 cm至9. 7 cm,中位数为2. 5 cm,肿瘤越大预后越差(P = 0. 032)｡周围组织被浸润12例(13. 8%) ,相对容易侵犯上颌､颅底､腭底､眼眶､鼻泪管和其他周围组织,该组中位生存时间是13个月,远低于周围组织未侵犯病例的26个月(P = 0. 001)｡在79例获得随访的患者中,中位生存期为21个月(范围0 ~ 76个月)｡1年､2年､3年和5年生存率分别为74. 7%､34. 5%､13. 8%和6. 9%,在2年左右的时间生存率有显著下降｡Ⅲ､ⅣA和ⅣB期的平均生存时间分别为27､21和12个月｡ Ⅲ与 ⅣB,ⅣA和 ⅣB分期总生存期( over survival,OS)的差异具有统计学意义( P <0. 05)｡本研究中组织学亚型包括上皮样细胞型(64例,73. 6%)､梭形细胞型( 10例,11. 5%)､小细胞型( 4例, 4. 6%)和多形性细胞型( 9例,10. 3%) (图1)｡统计结果显示性别､年龄､有无淋巴结转移､脉管癌栓､组织学类型､黑色素颗粒､核分裂象与生存率无显著相关性｡

2. 2 CD4､CD8､CD20在MMNS中表达情况

鼻腔鼻窦肿瘤标本较不规则, 48例能够观察到肿瘤基底部,瘤内间质及肿瘤基底TILs分布情况如表2所示,CD4+､CD8+及CD20+TILs免疫亚型在瘤内间质与肿瘤基底分组之间差异均有统计学意义(P<0. 05),且瘤内间质CD4+､CD8+及CD20+TILs的阳性计数的高低与肿瘤基底部TILs密度呈正相关(P<0. 01)｡

2. 3 CD4､CD8､CD20在MMNS中定位情况

无论是瘤内间质还是肿瘤基底部CD20+B细胞与CD4+､CD8+T细胞分布于同一区域,为较均匀的掺杂分布,CD20+B细胞没有中心聚集形成三级淋巴结构的趋势(图2)｡

2. 4 CD4､CD8､CD20在MMNS中阳性表达与生存期的关系

CD4+､CD8+､CD20+细胞计数分组的各个组别之间的OS无显著统计学差异(图3)｡

表1 87例MMNS临床病理特征

图1鼻腔鼻窦恶性黑色素瘤的组织学类型

表2瘤内间质及肿瘤基底TILs分布情况

图2 CD4､CD8､CD20在MMNS中定位情况

图3 CD4､CD8､CD20在MMNS中阳性表达与生存期的关系

3､讨论

本研究与文献报道一致, MMNS没有性别偏好[4],男女之间的预后没有差异｡与皮肤黑色素瘤(发病年龄55岁)相比,黏膜黑色素瘤的检出时间较晚(发病年龄70岁),并且与较低的生存率相关[5]｡本研究数据显示, MMNS发病的中位年龄为60岁,比美国MMNS年轻10岁,并且年龄对预后没有影响｡在中国进行的一项80例MMNS的研究中[6],中位年龄为61岁,这与本研究基本一致｡可能是由于地区和种族的差异导致中国MMNS发病年龄更低｡鼻腔是MMNS最常见的发病部位,鼻窦是MMNS的不良预后因素,由于其隐蔽的解剖位置,鼻窦病变可能比鼻腔病变更晚发现[7]｡本研究结果与文献报道一致,合并鼻窦病变的预后更差｡

TILs在黑色素瘤中的研究大多集中于皮肤黑色素瘤,对TILs在鼻窦粘膜黑色素瘤的研究还不够充分｡目前用于对肿瘤中的TILs亚群进行评分的技术多种多样,其在肿瘤中的预后相关性出现相互矛盾的结果[8⁃10]｡本研究回顾了主要TILs亚群在MMNS中的表达情况, T细胞主要亚群( CD8+､CD4+)和B细胞(CD20+)与OS无关｡对于不同分布区域的TILs的临床意义,文献中讨论了肿瘤内和肿瘤周围TILs的生物学和临床意义[9,11⁃12]｡Weiss等[13]为了确定TILs是否影响预后,对原发性黑色素瘤进行CD45染色,以定量肿瘤内和瘤周的TILs｡

本研究观察到肿瘤基底部TILs相对瘤内间质TILs密度增高,并且部分有聚集倾向,对于肿瘤基底缺失TILs的病例,可能与肿瘤边缘较不规则有关,无法观察到肿瘤基底｡作为“肿瘤抗原”,本研究推测肿瘤基底部都会有TILs浸润,只是由于手术标本不完整或外检取材时基底部没有取到,所以无法观察到肿瘤基底｡综上,在本研究中,鼻腔合并鼻窦､周围组织侵犯､肿瘤越大及AJCC分期越高预后越差;MMNS具有较为特殊的临床病理特征,不同于皮肤恶性黑素瘤｡

基金资助:北京市医管局扬帆计划重点医学专业—头颈部病理(ZYLX201814);

文章来源:王丽宁,刘红刚.鼻腔鼻窦恶性黑色素瘤临床病理特征及其与肿瘤浸润淋巴细胞亚群的相关性[J].基础医学与临床,2025,45(04):527-531.