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体外受精-胚胎移植临床结局与精子DNA碎片指数的相关研究

2020-07-31 224 上传者：管理员

摘要：目的探讨精子DNA碎片指数（DFI）对体外受精-胚胎移植（IVF-ET）临床结局的影响。方法选自2017年1月至2019年2月在本院生殖中心行IVF-ET新鲜及解冻周期移植的不孕症患者1 885例，通过检测男方精液常规与DFI，比较精液参数、不同年龄、不同受精方式等临床资料，观察其临床结局。结果①精液参数中，DFI>30组精子密度、（a+b）活力、畸形率、流产率与其他两组≤15/15～30比较有统计学意义（P <0.05）；②年龄≥35岁组DFI值、流产率、临床妊娠率，与其他两组（21～29）岁、（30～34）岁比较有统计学意义（P <0.05）；③ICSI组DFI值、流产率，与其他两组IVF/RICSI比较，差异有统计学意义（P <0.05），但三组间临床妊娠率比较，差异无统计学意义P>0.05。结论 DFI>30能引起精子密度、（a+b）活力下降，精子畸形率增高，虽不显著影响临床妊娠率，却会增加流产率。

关键词：
临床妊娠率
体外受精-胚胎移植
流产率
精子DNA碎片指数
辅助生殖技术
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辅助生殖技术（ART）在过去几十年的发展中取得了巨大的突破，尤其是卵细胞胞质单精子注射技术（ICSI）的运用[1]。大量研究表明精子DNA损伤（SDF）在不育男性中普遍存在,一般认为，体内氧化应激、精子凋亡异常和精子染色质组装异常等机制主要参与了精子DNA损伤的过程[2]。SDF研究发现精子DNA碎片指数(DNA fragmentation index,DFI)能更好的评估男性生育力，同时在预测ART结局上具有尤为重要的作用[3]。目前，有关DFI研究的论点尚不十分明确，本文研究了DFI对IVF-ET的影响效果，并对临床结局进行初步总结分析，以期为DFI在IVF-ET的实际应用提供参考信息。

资料与方法

1.一般资料：

选自2017年1月至2019年2月在河南省焦作市妇幼保健院生殖中心，行IVF-ET新鲜及解冻周期移植的不孕症患者1 885例为研究对象，分别分成DFI检测值组、年龄组、受精组三种类型，其中DFI检测值组依据检测值分为≤15、15～30、>30三个亚组；年龄组分为（21～29）岁、（30～34）岁、≥35岁三个亚组；受精组分为IVF、卵细胞质内单精子注射（ICSI）、补救-卵细胞质内单精子注射（RICSI）三个亚组；分别比较各组间临床结局。纳入标准：(1)女方及男方年龄≤45岁，双方染色体检查均为正常核型；(2)具有正常的月经周期和排卵功能；(3)男性检查（包括第二性征、阴茎、阴囊、精索、输精管、睾丸等）均无异常，内分泌激素测定在正常范围。

2.方法

(1）精子DNA碎片检测：采用EPICSXL流式细胞仪（美国，BD公司）检测精子染色质扩散试验（SCSA）检测精子DFI。

(2）精液分析：采用精子彩色分析仪（北京伟力WL9000），记录精液量、密度及前向运动精子率。男方均禁欲（2～7）天，以手淫法收集全部精液，每份标本严格按照第五版《WHO人类精液检验与处理实验室手册》执行。

(3）精子形态分析：巴氏染色法，染色液由珠海贝索公司生产，记录畸形精子数量，并计算其在各组中所占比率。

(4)IVF/ICSI/RISI程序：新鲜周期采用长长方案及长方案超促排卵，使用促性腺激素4 d后开始B超监测卵泡发育；当有2～3个卵泡直径大于18 mm时，当天扳机，36～37 h后取卵，常规方法行IVF/ICSI/RISI，第三天（D3）挑选适宜胚胎行移植；解冻周期采用降调节加人工周期或人工周期，监测激素与内膜达标后，行D3胚胎解冻移植。

(5）精子处理：采用上游、梯度离心法的方法收集活动精子。

(6）妊娠及随访结局：移植后（12～14)d，若尿和血hCG阳性，诊断为生化妊娠；移植后28 d,B超下见孕囊诊断为临床妊娠。

3.统计学分析：使用的统计软件为spss 22.0，计量资料采用（χ±s）表示，多组间比较采用方差分析；计数资料采用构成比或率表示，组间比较采用卡方检验，按检验水准P<0.05表示差异具有统计学意义。

结果

1.不同DFI值分组间精液参数及临床结局：

三组间精液量与临床妊娠率比较，差异无统计学意义（P>0.05);DFI>30组精液密度、（a+b）活力、畸形率、流产率与其他两组比较，差异有统计学意义（P<0.01）；随着DFI增高，精液密度、（a+b）活力下降，畸形率与流产率增高。≤15组与15～30组间比较，差异无统计学意义（P>0.05），见表1。

表1不同DFI值分组间精液参数及临床结局的比较

2.不同年龄间DFI值及临床结局：

(21～29）岁与（30～34）岁两组比较DFI值、临床妊娠率、流产率，差异无统计学意义（P>0.05）；年龄≥35岁组与其他两组比较，差异均有统计学意义（P=0.000,P=0.000,P=0.000）。见表2。

3.不同受精方式间DFI值及临床结局：

三组间受精率、卵裂率、优胚率和利用胚胎率均无差异（P>0.05),ICSI组中DFI值、流产率与其他两组比较有统计学差异（P=0.000,P=0.002），虽然三组临床妊娠率比较并无差异（P=0.606），但较高的DFI值显示会增加流产率。IVF组与RICSI组比较，差异无统计学意义（P>0.05），见表3。

表2不同年龄间DFI值及临床结局的比较

表3不同受精方式间DFI值及临床结局的比较

讨论

本文结果显示，当DFI>30，其密度、（a+b）活力、畸形率与其他两组比较，有差异。DFI增高，与精子密度、（a+b）活力呈负相关，与畸形率呈正相关。≥35岁组与ICSI组中，DFI值分别较其他两组均有统计学差异。因此，DFI能预测精液质量，评估生育力。这有可能与本文分组选择的人群及精液质量下降相关。有研究认为：随着男性年龄增长，生殖器官的老化，导致活性氧自由基（ROS）增多及抗氧化能力下降，破坏其完整性[4]。本文结果也显示：≥35岁组，随着DFI值的增高，妊娠率下降，流产率增高，与其他两组比较均有显著性差异；由此得出结论：精子DFI与男性年龄可能存在相关性。

本研究显示：DFI与不同受精方式中受精率、卵裂率、优胚率、利用胚胎率及妊娠率均无相关性。这与文献中精子DNA碎片率高会影响受精[5]、卵裂、优质胚胎[6]结论相反，推测这可能与纳入的数据量有关，也可能是精子DNA碎片率对早期胚胎影响不明显有关。Oleszczuk等[7]认为对于高DFI的患者，ICSI可能是更好的治疗方法，这与本文分析结论相符。IVF受精时，卵母细胞透明带能规避较高DNA缺陷的精子，RICSI与IVF精子的DFI维持相同水平；当ICSI助孕时，减少了精子释放ROS对卵子的有害刺激，受精后卵母细胞且能够对损伤的精子DNA进行修复。因此，DFI高值采用ICSI治疗不降低临床妊娠率。

本数据进一步发现：当DFI>30、年龄≥35及ICSI助孕时，虽不影响妊娠率，但都会增加流产率，与精液量及受精方式不相关，与流产率呈正相关，可以表明：年龄与精子DFI不仅能影响精液质量，也会对辅助生殖技术治疗结局产生消极影响。Casanovas等[8]研究认为，即使DNA损伤不能在短时间内修复，胚胎分裂亦可进行，但双链的损伤会延续，导致染色体碎片的拆分、重排或复杂重排。由此观点联合本文数据表明：DFI高值不降低IVF-ET临床妊娠率，但会对妊娠结局造成影响。

本文局限性在于影响男性精子DFI值的因素较多，如超负荷运动[9]、减肥[10]，甚至心理因素等，另外研究数据中未统计移植优质胚胎的妊娠结局，是否高值的DFI与优胚、非优胚有明显的变化趋势，仍需进一步的数据分析。

综上所述，对DFI进行研究有意义，结合精子质量，选择合适的受精方式，可提高助孕的有效性。由于本研究纳入的样本量及人群选择性，结果会有一定的偏倚和不足，因此，精子DFI异常增加是否对妊娠结局造成不利影响及能否预测ART结局，还需临床人员严格统一方法，进行更多中心、更大样本量的深入研究。

参考文献：

[1]曾兰,叶飞,李运星,等.精子DNA完整性与精液常规参数相关性分析[J].中国计划生育学杂志,2014,6(4):47-50.

[5]熊露.精子DNA碎片指数对体外受精结局的预测价值[J].泰山医学院学报,2018,39:1408-1409.

[6]谭志国,孙健,张丹,等.DNA碎片对体外受精-胚胎移植妊娠结局的影响[J].生殖医学杂志,2019,28(12):1444-1448.

王娟,吕玉珍,田可可,闫虹,杜威.精子DNA碎片指数与体外受精-胚胎移植临床结局的相关研究[J].中国妇产科临床杂志,2020,21(04):406-408.