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CD73+单核细胞在肺结核患者表达水平及临床诊疗价值评价

2023-12-11 218 上传者：管理员

摘要：目的探究健康组（HC）与活动性肺结核组（PTB）外周血CD73+单核细胞表达水平差异，并对临床诊疗价值进行评价。方法选取2022年1月至12月我院100例患者为研究对象，根据《肺结核诊断》（WS288-2017），收集病人的痰液标本涂片镜检用于临床诊断健康组和活动性肺结核组。采血后分别检测血常规和制备CD73+标本用于后续流式细胞检测。对比分组人群临床指标及流式细胞术检测CD73+的结果。结果与HC相比，PTB男性患者明显高于女性。其中血常规检验中PTB组有4个临床指标与正常范围差异较大，血红蛋白（HGB），红细胞比容（HCT）和淋巴细胞百分率LYMPH降低，单核细胞绝对值（MONO#）升高。此外HC与PTB组志愿者外周血中CD73+流式检测结分别为（29.14±8.00）%和（18.32±8.49）%,PTB组外周血中CD73+单核细胞表达水平较HC组显著降低。t检验两组间P<0.0001表明两组间有显著性差异。结论与HC组相比PTB组志愿者外周血中CD73+单核细胞显著降低，可发展成为结核疾病免疫治疗的新靶点，将为建立新的、更有效的临床结核病诊疗提供科学依据。

关键词：
CD73+单核细胞
临床诊疗
感染
肺结核
表达水平
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结核病是由结核分枝杆菌（MTB）感染引起的慢性传染病。结核病的发病、转阴及预后具体机制尚不清楚。单核和巨噬细胞是机体的天然免疫细胞，可通过Toll样受体（TLR）等模式识别感染MTB抗原启动抗结核免疫，抑制或清除体内的MTB[1]。CD73在体内参与以多个方面的生理作用，临床研究表明靶向CD73能够产生良好的抗肿瘤作用。在HIV感染患者外周血中CD73+细胞的表达水平在T细胞亚群中明显降低，且CD73在细胞表面、细胞内和基因水平均有所下降。目前CD73与感染性疾病发生发展的相关性研究较少，特别是与结核感染疾病的相关性研究几乎没有。因此，本研究将收集活动性肺结核患者及健康志愿者外周血，采用流式细胞术检测CD73+单核细胞在结核患者和健康人外周血中的表达量，并探究MTB感染对机体外周血中CD73+单核细胞中表达水平的影响，为MTB感染患者临床诊疗与防控提供新线索。

1、资料与方法

1.1 一般资料

选取2022年1月至2023年6月我院100患者作为研究对象，按照痰涂镜检结果分为健康组和活动性肺结核组。本实验通过纳入/排除标准，最终入组人数100人，其中健康组（HC)62人，男性及女性入组人数分别为32和30人；活动性肺结核组（PTB)38人，男性及女性入组人数分别为26和12人。PTB组所有患者痰培养、痰涂片和MTB-Ag检测阳性，HIV检测阴性，所有样本未经抗结核治疗。

1.2 方法

一般临床信息收集：志愿者入组时询问、测量等手段，对人口学相关资料进行记录登记；血常规数据：志愿者采血后，按现行血常规检测指标进行检测，并由临床患者电子病例导出；外周血中CD73+细胞检测：取一支流式上样管，取100μL充分混匀的抗凝全血加入管底；加入20μL抗体（Ig G1-FITC(Cat.349041),Ig G1-PE(Cat.349043),CD3-FITC(Cat.349201),CD4-PE(Cat.347327）），抗体均购置于BD Pharmingen。混匀后室温避光孵育；加入10倍稀释的2 m L红细胞裂解液（Bio Legend,Cat.349202），离心后弃上清；加入2m L的PBS(Sangon Biotech,E607008）混匀后离心弃上清；加入0.5 m L PBS,4 o C避光1 h内上机检测。实验采用流式细胞仪检测（BD FACS Calibur II），并使用Flow Jo 7.6软件进行分析。

1.3 观察指标

观察两组一般临床指标及外周血中CD73+细胞亚群比例。

1.4 统计学分析

采用Graphpad Prism 8.0统计学软件进行数据分析，计量资料用表示，组间比较用t检验；组间比较用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1 临床样本痰液涂片镜检

收集病人的三份痰液标本（晨痰，夜痰和及时痰）用于涂片镜检。痰膜自然干燥后染色镜检。已有检测数据表明在淡蓝色背景下，抗酸菌（结核分支杆菌）呈红色，其它细菌和细胞呈蓝色。只有其它细菌及细胞呈现的亮蓝色为镜检阴性涂片，除蓝色背景之外，视野还分散着被染成红色的结核分枝杆菌，为镜检阳涂片。涂片观察到的红色染色部分越多，对应的结核分支杆菌阳性等级越高。

2.2 研究对象基本信息

本实验按照纳入/排除标准，最终入组100人，其中健康组（HC)62人，活动性肺结核组（PTB)38人。PTB组所有患者痰培养、痰涂片和MTB-Ag检测阳性，HIV检测阴性，所有样本未经抗结核治疗。从统计结果可以看出，性别比例上，HC男女比例较为一致，PTB男性患者明显高于女性。其它指标HC均处于正常范围。PTB有4个指标与正常范围有较大差别，血红蛋白（HGB），红细胞比容（HCT）和淋巴细胞百分率LYMPH降低，而单核细胞绝对值（MONO#）升高。这些指标均与疾病导致体内炎症相关，但与结核病无直接对应关系。

2.3 HC与PTB组研究对象外周血中CD73+流式检测结果对比

根据淋巴细胞亚群表面抗原分布的不同，利用双色荧光抗体与抗原结合，然后用流式细胞仪检测，并计算各淋巴细胞亚群的百分比，评估结核感染组及健康组志愿者外周血中CD73+单核细胞。采集志愿者血液样本后，流式细胞术检测HC和PTB全血标本中CD73+单核细胞。流式结果图可做如下区分，左下角区域为健康细胞数量，左上角为CD73+单核细胞。通过统计分析HC和PTB组志愿者外周血中CD73+细胞占比。HC和PTB组志愿者外周血中CD73+细胞统计结果分别为29.14±8.00%和18.32±8.49%,PTB组志愿者外周血的CD73+单核细胞表达水平较HC组有显著降低。t检验分析表明两组间P<0.0001，两组间有显著性差异。

表1 研究对象基本信息统计表

3、讨论

与HC相比，PTB男性患者明显高于女性。PTB有4个指标与正常范围有较大差别，血红蛋白（HGB）、红细胞比容（HCT）和淋巴细胞百分率LYMPH降低，以及单核细胞绝对值（MONO#）升高。此外，HC与PTB研究对象CD73+流式检测结果对比，PTB外周血的CD73+单核细胞表达水平较HC有显著降低。t检验分析表明两组间有显著性差异。

目前CD73与感染性疾病发生发展的相关性研究较少，但在CD73与肿瘤疾病的相关性研究中发现，CD73是肿瘤发生发展中免疫抑制的主要分子，且CD39和CD73协同产生腺苷与CD8+T细胞作用，抑制其产生IFN-γ和细胞毒性作用。在CD73与弓形体的相关研究中还发现，CD73介导的腺苷与其受体作用，可引起一系列细胞因子的分泌，同时还可调控T淋巴细胞分化为Th1和Th17细胞[2]。上述免疫细胞及细胞因子均与结核病的感染和发病过程密切相关，因此，本项目采用流式细胞术评估CD73+单核细胞在不同群体外周血中的表达量，发现相比于健康组，结核感染患者组外周血中CD73+单核细胞显著性下调。

综上所述，与HC组相比PTB组志愿者外周血中CD73+单核细胞显著降低，可发展成为结核疾病免疫治疗的新靶点，将为建立新的、更有效的临床结核病诊疗提供科学依据。

参考文献

[1]张福业,任跃进.肺结核的病原､发病机制和病理[J].社区医学杂志,2006(8):5-7.

基金资助:佛山市卫生健康局医学科研课题,项目编号:(20210365);

文章来源:田红虹,张金枚,林炳耀等.CD73+单核细胞在肺结核患者表达水平及临床诊疗价值评价[J].当代临床医刊,2023,36(06):59-60.