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TAP1基因单核苷酸多态性与肺结核四联方案耐药性的关系探讨

2025-08-15 45 上传者：管理员

摘要：目的分析抗原肽转运蛋白1(TAP1)基因单核苷酸多态性与肺结核四联方案耐药性的关系。方法选取本院收治的200例肺结核患者，检测患者TAP1基因rs1135216位点单核苷酸多态性。患者均实施四联方案治疗，依据临床疗效将其分为耐药组(n=60)、敏感组(n=140)。采用Hardy-Weinberg遗传平衡检验两组基因型分布，比较两组TAP1基因单核苷酸多态性情况及一般资料，肺结核四联方案耐药性的影响因素采用多因素Logistic回归进行分析。结果 200肺结核患者经四联方案治疗后，耐药发生率为30.00%。耐药组和敏感组患者TAP1基因单核苷酸多态性均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律(P>0.05),具有群体代表性；耐药组TAP1基因rs1135216位点AA基因型、A等位基因频率均低于敏感组(P<0.05),AG基因型、G等位基因频率高于敏感组(P<0.05)。耐药组年龄以及吸烟史、复治占比均高于敏感组(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示，TAP1基因rs1135216位点AG基因型、G等位基因以及年龄、吸烟史、复治均是影响肺结核四联方案耐药性的危险因素(P<0.05)。结论 TAP1基因rs1135216位点基因型和等位基因在肺结核四联方案耐药患者中分布存在一定差异，且TAP1基因rs1135216位点AG基因型及G等位基因可能会增加肺结核四联方案耐药风险。

关键词：
四联方案
基因多态性
抗原肽转运蛋白1
耐药性
肺结核
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肺结核是临床常见的呼吸系统疾病,具有较高的传染率和病死率,若不及时控制病情,不仅影响患者自身生命安全,甚至威胁社会公共安全[1]｡四联方案可在一定程度上消灭结核分枝杆菌,促进病情转归,但仍有部分患者会产生一定耐药性,不仅降低治疗效果,甚至加重病情[2]｡因此,明确影响肺结核四联方案耐药性的因素,以期指导临床治疗,提高临床效果｡抗原肽转运蛋白(TAP)于抗原提呈细胞内发现,TAP1为其中一种形式,具有遗传多态性[3]｡既往文献[4]研究与肺结核易感性的基因时发现,TAP1基因与其存在一定相关性,但关于肺结核四联方案耐药性是否与TAP1基因单核苷酸多态性有关尚无明确定论｡因此,本研究通过检测经四联方案治疗的肺结核患者的TAP1基因单核苷酸多态性,探讨其与肺结核四联方案耐药性的关系,以期为临床治疗提供参考依据｡

1、对象与方法

1.1研究对象选取2019年9月至2023年9月本院收治的200例肺结核患者,根据临床疗效将其分为耐药组(n=60)､敏感组(n=140)｡纳入标准:符合肺结核诊断[5],且经痰培养确诊为结核分枝杆菌感染者;临床治疗拟采用四联方案;年龄>18岁｡排除标准:合并恶性肿瘤者;酗酒或吸毒者;滥用抗生素者;合并其他重大脏器功能障碍者;肺炎等具备结核相似病症者;艾滋病患者;接受免疫抑制治疗者;精神障碍者｡

1.2方法

1.2.1TAP1基因单核苷酸多态性检测抽取研究对象外周静脉血5.0mL至乙二胺四乙酸管内并进行分离,提取基因组DNA｡采用紫外分析装置对DNA样本进行质量检查,将DNA含量调整至100ng/L,置于-20℃保存｡TAP1基因的rs1135216位点单核苷酸多态性采用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度技术检测｡引物设计,TAP1基因正向引物序列:5′-TTCTCATCTTGGCCCTTTGCTCT-3′,反向引物序列:5′-TGCCTCACCTGTAACTGGCTGT-3′｡聚合酶链式反应(PCR)反应体系10μl,包括3.0mmol/LMg+､0.3mmol/LdNTP､1倍GC缓冲液､1μLPCR引物､1UTapDNA聚合酶｡PCR扩增条件:95℃变性2min,94℃变性20s,0.5~65℃循环40s,72℃延伸90s,循环11次,4℃保存｡PCR扩增产物纯化,加入限制性内切酶37℃消化12h,取酶切产物在3%琼脂糖凝胶中电泳分带,分析基因型｡

1.2.2资料收集收集患者性别､年龄､职业､户口类型､文化程度､吸烟史､糖尿病､高血压､结核病接触史､治疗史临床资料｡

1.2.3肺结核四联方案耐药性的判定及分组所有患者均采用四联方案[异烟肼(每次0.3g,每天1次)+利福平(每次0.45g,每天3次)+吡嗪酰胺(每次15mg/kg,每天1次)+乙胺丁醇(每次0.75g,每天1次),口服异烟肼､利福平､吡嗪酰胺､乙胺丁醇2个月,再持续口服异烟肼､利福平4个月]进行治疗,连续治疗6个月｡结核化疗开始后每两周进行一次痰涂片结核菌检查[6],连续两次检查为阴性,且不再转阳者为阴转｡将痰菌阴转者归为敏感组,其余患者归为耐药组｡

1.3统计学方法采用SPSS20.0软件进行数据分析,计量资料表示为(x-±s),采用t检验;计数资料表示为n(%),采用χ2检验;采用Hardy-Wein-berg遗传平衡定律验证各基因型频率分布的群体代表性;采用多因素Logistic回归分析法分析肺结核四联方案耐药性的影响因素;以P<0.05为差异有统计学意义｡

2、结果

2.1肺结核四联方案耐药情况以及两组患者TAP1基因Hardy-Weinberg遗传平衡检验200例肺结核患者经四联方案治疗后,共有60例患者出现耐药性,耐药发生率为30.00%｡TAP1基因rs1135216位点包含有(A､G)2种等位基因和(AA､AG､GG)3种基因型｡两组TAP1基因rs1135216位点的3种基因型AA､AG､GG分布均符合Hardy-Weinberg遗传平衡检验(P>0.05),具有群体代表性｡见表1｡

表1两组患者TAP1基因Hardy-Weinberg遗传平衡检验[n(%)

2.2患者TAP1基因rs1135216位点的基因型和等位基因分布比较耐药组TAP1基因rs1135216位点AA基因型､A等位基因频率均低于敏感组(P<0.05),AG基因型､G等位基因频率高于敏感组(P<0.05)｡见表2｡

表2两组TAP1基因rs1135216位点的基因型和等位基因分布比较[n(%)]

2.3一般资料比较耐药组年龄以及吸烟史､复治占比均高于敏感组(P<0.05)｡见表3｡

表3两组患者一般资料比较[(x-±s),n(%)

2.4肺结核四联方案耐药性的影响因素分析将表2､3中P<0.05的项目记为自变量并进行赋值:TAP1基因rs1135216位点基因型[以AA基因型为参照,V(1)=1代表AG基因型,V(1)=0代表非AG基因型;V(2)=1代表GG基因型,V(2)=0代表非GG基因型]､TAP1基因rs1135216位点等位基因(A=0,G=1)､年龄(实测值)､吸烟史(否=0,是=1)､治疗史(初治=0,复治=1),将肺结核四联方案耐药情况作为因变量进行赋值(敏感=0,耐药=1),进行多因素Logistic回归分析,结果显示TAP1基因rs1135216位点AG基因型及G等位基因､年龄､吸烟史､复治均是影响肺结核四联方案耐药性的危险因素(P<0.05)｡见表4｡

表4肺结核四联方案耐药性的影响因素分析

3、讨论

随着人类基因组计划的完成,基因在肺结核疾病中的研究也日趋广泛,其中TAP1基因参与机体抗原呈递过程,且对内源性抗原主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类分子的加工､提呈均有重要作用,参与机体免疫过程[7]｡

本研究结果显示,耐药组和敏感组TAP1基因rs1135216位点存在AA､AG､GG三种基因型,且两组TAP1基因rs1135216位点各基因型频率均符合Hardy-Weinberg遗传平衡检验,具有群体代表性｡本研究结果显示耐药组TAP1基因rs1135216位点AA基因型､A等位基因频率均低于敏感组,AG基因型､G等位基因频率高于敏感组,且经多因素分析发现,TAP1基因rs1135216位点AG基因型及G等位基因均为肺结核四联方案耐药性的危险因素(P<0.05),与胡宽等[8]的研究结果相似,表明临床可将TAP1基因单核苷酸多态性作为肺结核四联方案耐药性风险评估的分子遗传性指标｡目前已证明[9]MHCⅠ类介导的分化簇8+CTL可识别､裂解被结核分枝杆菌感染的细胞,而TAP1基因主要通过与TAP2基因形成异二聚体从而参与抗原肽MHCⅠ类分子的提呈过程,而其中异二聚体结构异常会受任一基因型改变的影响,导致体内抗原提呈过程出现偏差[10]｡TAP1基因rs1135216位点AG基因型及G等位基因可能通过改变底物转运的特异性以及基因编码区蛋白的空间结构,从而影响TAP1发挥生物学功能及四联方案治疗疗效,导致病情难以控制产生一定耐药性｡

本研究结果还显示,年龄､吸烟史､复治均是肺结核四联方案耐药性的危险因素(P<0.05)｡有研究[11]表明,耐药风险随年龄增加呈增加趋势｡年龄较大患者产生耐药性的原因一方面可能与患者抵抗力较低易造成耐药菌群繁殖有关,另一方面年龄越大患者病情往往越严重,自身恢复能力较弱,从而导致临床治疗效果较差｡吸烟患者会给肺部造成一定损伤,降低机体免疫功能,降低治疗效果,从而产生耐药性｡而复治患者肺结核治疗周期长,长时间应用相同药物会造成耐药菌株逐渐繁殖成为优势菌群,增加机体耐药稳定性[12]｡

综上所述,TAP1基因rs1135216位点基因型和等位基因在肺结核四联方案耐药性中分布存在异常,TAP1基因rs1135216位点AG基因型及G等位基因可能与肺结核四联方案耐药性有关｡

参考文献:

[2]张瑞霞,陈瑞锋,邓巧娟.参麦注射液联合HRZE方案治疗肺结核的效果及对XOD､MMP-9水平的影响[J].中华中医药学刊,2021,39(5):70-73.

[4]廖寅谦,张开漩,胡宽,等.TAP1基因多态性与结核病易感关联性的家系病例对照研究[J].现代预防医学,2022,49(12):2135-2142.

[5]张培元.肺结核诊断和治疗指南[J].中华结核和呼吸杂志,2001,24(2):70-74.

[6]邓海清,杨蕾,陈成,等.结核病细菌学实验室设置要求探讨[J].中国防痨杂志,2015,37(2):117-121.

[8]胡宽,罗芳,张开漩,等.TAP1基因多态性与被动吸烟的交互作用对肺结核发病的影响[J].医学研究生学报,2021,34(7):721-726.

[10]盛浩,卢玉峰,包永明.基于TAP分子亲和力模型预测MHCⅠ类分子提呈短肽的免疫原性[J].生物化学与生物物理进展,2020,47(2):157-168.

[11]梁雅雪,王华.耐多药肺结核患者氟喹诺酮耐药因素分析[J].实用医学杂志,2022,38(13):1604-1608.

[12]赵慧,王志锐,巨韩芳,等.2020年天津市肺结核耐药流行病学特征及影响因素分析[J].疾病监测,2023,38(1):57-63.

文章来源:贾飞,张虎.TAP1基因单核苷酸多态性与肺结核四联方案耐药性的关系探讨[J].贵州医药,2025,49(08):1268-1270.