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黄芪多糖对胆汁淤积性肝损伤大鼠肝功能及氧化应激的影响

2025-05-09 49 上传者：管理员

摘要：目的探究黄芪多糖对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导的胆汁淤积性肝损伤模型大鼠丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆汁酸(TBA)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及肝组织病理的影响。方法将54只雄性SPF级SD大鼠随机分为空白组，模型组，熊去氧胆酸组，黄芪多糖低、中、高剂量组，每组9只。黄芪多糖低、中、高剂量组按照(0.2、0.4、0.8 g/kg)灌胃给药，熊去氧胆酸组按照(100 mg/kg)灌胃给药，连续7 d,模型组和空白组给予生理盐水对照处理。实验第5天，空白组给予等容积橄榄油，其他各组一次性给予1%ANIT橄榄油溶液。在造模后48 h处死实验动物，摘取肝脏并计算肝指数。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中TBA、ALT、AST、ALP、GGT、GSH、MDA、SOD活性，苏木素-伊红(HE)染色镜下观察肝组织病理变化。结果与空白组相比，模型组肝指数、ALT、AST、ALP、GGT、TBA、MDA显著增高，血清SOD、GSH水平降低(P<0.05,P<0.01);与模型组相比，药物干预组SOD、GSH-水平明显升高，肝指数、ALT、AST、ALP、GGT、TBA水平明显降低(P<0.05,P<0.01),尤其以黄芪多糖高剂量组效果更显著(P<0.01)。模型组大鼠肝脏HE染色镜下肝组织结构紊乱，肝小叶内有炎性细胞浸润，其余组大鼠肝组织病理变化均有不同程度改善。结论黄芪多糖对胆汁淤积性肝损伤有明显改善作用，可能与下调ALT、AST、ALP、GGT、TBA表达和抗氧化应激作用有关。

关键词：
α-萘异硫氰酸酯
氧化应激
肝功能
胆汁淤积性肝损伤
黄芪多糖
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胆汁淤积性肝病是一种源自遗传､免疫､环境或其他原因的肝胆系统疾病｡该病的发作机制在于胆汁形成､分泌或排泄存在障碍,从而使得胆汁在肝内淤积而不顺利地排出到肠道｡长期累积会导致器官损伤､代谢失调和功能紊乱等发生〔1,2〕｡临床主要表现为黄疸､瘙痒､浓茶色尿液｡肝内胆汁淤积可单独出现,也可以合并胆管炎,但发病机制尚不明确｡临床上常用熊去氧胆酸(UDCA)治疗,但其用药时间长,不良反应多成为该药的弊端〔3〕,因此从天然药物中寻找替代药物成为新的方向｡黄芪多糖具有补气升阳,固表止汗,利水消肿,脱毒生肌的功效,并被多项研究表明其具有抗氧化､提高免疫力､保护肝损伤的功能〔4〕｡本研究探索黄芪多糖低､中､高剂量对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导的胆汁淤积性肝损伤模型大鼠的肝损伤指标､黄疸指标､氧化应激指标及肝脏组织病理变化的影响｡

1、资料与方法

1.1实验动物健康SPF级SD大鼠54只,雄性8周龄,体质量(220±20)g,动物由河南省实验动物中心提供,实验动物生产许可证编号:SCXK(豫)2017-0001,饲料及垫料由河南省春盈生物科技公司提供,生产批号:20221011069,存放于黄河科技学院医学院实验楼动物房,温度(22±2)℃,湿度40%~55%｡

1.2主要药品及试剂黄芪多糖(西安晋恒化工有限公司,产品批号:JH20220911),UDCA胶囊(安士制药(中山)有限公司,产品批号:G61621),α-萘异硫氰酸酯(上海麦克林生化科技有限公司,产品批号:C14422761),橄榄油(杭州奥利尔进出口贸易有限公司,产品批号:D4/11032023),4%多聚甲醛固定液(XG1050,编号230227912),谷丙转氨酶(ALT)､谷草转氨酶(AST)､总胆汁酸(TBA)､丙二醛(MDA)､超氧化物歧化酶(SOD)､还原性谷胱甘肽(GSH)试剂盒(南京建成生物技术有限公司,生产批号为:20230319､20230320､20230316､20230316､20230218､20230211､20230218),碱性磷酸酶(ALP)､γ-谷氨酰转移酶(GGT)试剂盒(上海酶联生物科技有限公司,生产批号为:20230316､20230317)｡

1.3主要仪器5417R冷冻合式高速离心机(德国Eppendorf公司),伯乐680全自动酶标仪(上海伯乐公司),TS100-F型生物倒置显微镜(日本尼康),脱水机､包埋机(武汉俊杰电子有限公司,型号:JJ12J､JB-P5),石蜡切片机(德国莱卡公司,型号:RM2245),组织摊片机(浙江省金华市科迪仪器设备有限公司,型号:KD-P),DK-80型电热恒温水槽(上海一恒科技有限公司),GT-X5超声波清洗机,54UTP-313电子天平(上海花潮电器有限公司)｡

1.4实验药物配制取适量ANIT粉末与橄榄油混合,超声溶解,配制浓度为10mg/ml试剂｡取适量UDCA胶囊,生理盐水溶解,配制浓度为10mg/ml混悬液,灌胃前充分混匀｡称取适量黄芪多糖固体粉末,生理盐水溶解,配制浓度为20､40､80mg/ml的试剂〔5〕｡

1.5动物分组､给药及模型制备所有大鼠适应性喂养7d,无异常者进行分组｡54只雄性SD大鼠随机分为空白组,模型组,UDCA组､黄芪多糖低､中､高剂量组,每组9只,分笼喂养,每日记录体质量,观测大鼠一般情况｡黄芪多糖低､中､高剂量组和UDCA分别灌服黄芪多糖溶液(0.2､0.4､0.8g/kg)〔6〕和熊去氧胆酸(100mg/kg),空白组及模型组灌胃10ml/kg的生理盐水,固定时间灌胃给药,每日一次,连续7d｡于第5天除空白组外其余各组灌胃给予1%ANIT油溶液(100mg/kg)〔7〕,空白组灌胃给予等容积的橄榄油｡造模48h后,各组于末次给药后12h,称重､记录,予以10%水合氯醛(0.035ml/kg)腹腔麻醉,严格遵守动物实验操作规程,暴露腹腔,行腹主动脉采血,用于血清学检测｡摘取各组肝脏组织,经生理盐水冲洗后,滤纸吸去肝脏组织表面水分,称取湿重,并记录备用｡每组随机选取5只大鼠肝脏组织采用4%多聚甲醛固定保存｡

1.6肝脏指数测定各组末次给药24h后,称重记录,予以10%水合氯醛腹腔麻醉,采血,取肝脏组织,计算肝脏指数,肝脏指数(%)=〔肝脏质量(g)/体质量(g)〕×100%｡

1.7血清生化指标检测大鼠腹主动脉采血,常温静置1h,3000r/min转速下离心15min,取上层血清放置于4℃温度下保存,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测ALT､AST､ALP､GGT､TBA､GSH､MDA､SOD在血清中含量,严格按照试剂盒说明书操作｡

1.8肝脏组织病理学将各组大鼠肝脏组织用生理盐水冲洗,固定于4%多聚甲醛溶液,经脱水､石蜡包埋后,以5μm厚的标本切片,用苏木素-伊红(HE)染色､脱水､封片,在光学显微镜下(×100)观察大鼠肝脏组织形态〔8〕｡

1.9统计学方法采用SPSS25.0软件进行LSD-t检验｡

2、结果

2.1各组体质量､肝质量及肝指数比较与空白组相比,模型组体质量显著降低,肝质量及肝脏指数明显升高(P<0.01);与模型组相比,UDCA组与黄芪多糖各组体质量均显著升高(P<0.05,P<0.01),UDCA组与黄芪多糖中､高剂量组肝质量及肝脏指数均显著降低(P<0.05);与UDCA组相比,黄芪多糖高剂量组体质量､肝质量和肝脏指数均明显下降(P<0.05)｡见表1｡

2.2各组血清ALT､AST､ALP水平比较与空白组相比,模型组ALT､AST､ALP均显著升高(P<0.01);与模型组相比,UDCA组与黄芪多糖各剂量组ALT､AST均显著降低(P<0.01);与UDCA组相比,黄芪多糖低剂量组ALT､AST､ALP均显著升高(P<0.01),黄芪多糖高剂量组ALT､AST均显著降低(P<0.01)､ALP降低但无显著差异(P>0.05)｡见表1｡

2.3各组肝脏组织病理变化比较空白组肝小叶结构清晰,无纤维化变化,肝细胞排列整齐,无脂肪变,细胞核结构正常,无炎性细胞浸润;模型组镜下可见细胞排列杂乱,核固缩,肝小叶内有炎性细胞浸润,较多纤维间隔致肝小叶结构变形,汇管区无坏死灶;熊去氧胆酸组肝小叶内有少量中性粒细胞,汇管区纤维化向周围芒状伸展,肝细胞索呈放射状排列,肝组织细胞无脂肪变,汇管区无坏死灶;黄芪多糖低剂量组肝细胞轻微界面炎症,局部点状坏死,汇管区纤维化向周围芒状伸展;黄芪多糖中､高组剂量组较模型组炎性和纤维病变均不同程度的改善,汇管区纤维化向周围芒状伸展,轻微汇管区炎症和小叶内炎症,肝细胞内未见脂肪变现象｡见图1｡

表1黄芪多糖对各组体质量､肝质量､肝脏指数､ALT､AST､ALP的影响(x±s,n=9)

图1各组肝脏病理学变化(HE染色,×100)

2.4各组血清TBA､GGT水平比较与空白组相比,模型组TBA､GGT均显著升高(P<0.01);与模型组相比,UDCA组与黄芪多糖各剂量组TBA､GGT均显著降低(P<0.01);与UDCA组相比,黄芪多糖低剂量组TBA､GGT均显著升高(P<0.01),黄芪多糖中剂量组TBA显著升高(P<0.01),GGT无统计学意义(P>0.05),黄芪多糖高剂量组GGT显著降低(P<0.05),TBA差异均无统计学意义(P>0.05)｡见表2｡

2.5各组血清GSH､MDA､SOD水平比较与空白组相比,模型组血浆GSH､SOD显著降低,MDA显著升高(P<0.01);与模型组相比,UDCA组与黄芪多糖各剂量组GSH水平均显著升高(P<0.01,P<0.05),UDCA组与黄芪多糖各剂量组血浆中MDA水平显著降低(P<0.01,P<0.05),UDCA组与黄芪多糖中､高剂量组血清中SOD水平显著升高(P<0.01);与UDCA酸组相比,黄芪低剂量组SOD显著降低(P<0.01),黄芪多糖低､中剂量组MDA显著升高(P<0.01),黄芪多糖高剂量组GSH､SOD均显著升高(P<0.01),其余各组的差异均无统计学意义(P>0.05)｡见表2｡

表2黄芪多糖对各组血清TBA､GGT､MDA､GSH和SOD的影响(x±s,n=9)

3、讨论

胆汁淤积性肝病是各种原因引起的胆汁形成､分泌或排泄异常引起的肝脏病变〔9〕｡ANIT是一种经典的肝毒性化学物质〔10〕,可引起肝细胞胆汁淤积､肝细胞坏死等病理生理学变化,因此它被广泛用于肝病和肝癌的研究｡其机制是由于ANIT可形成具有电荷的代谢产物,这些代谢产物可以导致氧自由基和其他有害化学物质的产生,从而导致肝细胞损伤和死亡｡血液中ALT和AST升高可用于诊断肝细胞损伤,而ALP和TBA是胆汁淤积的生物标志物〔11〕｡当胆汁淤积发生时,与活性氧相关的氧化应激参与了胆汁淤积的发生发展〔12〕｡由于胆汁淤积的病因和损伤机制复杂,开发针对胆汁淤积的新药极其困难｡UDCA可有效治疗原发性胆汁性胆管炎,但超过40%的患者对此反应不佳〔13〕,从天然植物中寻找新的替代药物已逐渐成为医学界的热门话题〔14〕｡胡妮娜等〔15〕研究表明,黄芪多糖具有提高免疫力､抗肿瘤､抗氧化应激､保护肝脏等多种功效｡曲敬蓉等〔16〕通过探讨黄芪多糖对大鼠糖尿病性肝损伤的影响,结果表明,与模型组相比,黄芪多糖组大鼠肝脏MDA显著降低,SOD､GSH显著升高,其可能的机制是通过促进转录因子NF-E2相关因子(Nrf)2活化从而上调大鼠肝脏血红素氧合酶(HO)-1表达,从而减轻氧化应激反应,保护肝组织｡既往研究表明〔17〕,黄芪对于慢性胆汁淤积性肝损伤有明显的改善作用,但对于黄芪多糖治疗急性肝内胆汁淤积性肝损伤的治疗记载甚少,本实验以此为创新点,通过一次性给予1%ANIT油溶液灌胃建立胆汁急性肝内胆汁淤积性肝损伤大鼠模型,并通过黄芪多糖灌胃干预治疗｡本研究表明,黄芪多糖可以显著减轻氧化应激反应,从而进一步改善肝损伤｡

综上,黄芪多糖具有良好的保护肝组织的作用,通过改善各项肝功能指标､肝细胞组织形态､降低MDA的过度表达,上调GSH､SOD水平促进其抗氧化能力,来实现其抗氧化应激和减轻肝损伤的作用,对使用黄芪多糖治疗胆汁淤积性肝损伤有一定的参考价值｡

参考文献:

2汪佩文,董育玮.胆汁淤积的定义､病因及分类〔J〕.内科理论与实践,2022;17(1):15-23.

3孙雪林,胡欣,张亚同.熊去氧胆酸的临床应用进展〔J〕.中国药物警戒,2022;19(10):1149-53.

4李珍一,杨关林,闫承慧,等.黄芪多糖应用的相关研究进展〔J〕.辽宁中医杂志,2016;43(7):1553-5.

5孙晓梅.复方赶黄草方对胆汁淤积性肝病的影响及机制研究〔D〕.天津:天津医科大学,2018.

6孙佳石,刘宝磊.黄芪多糖对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的保护作用〔J〕.中国卫生标准管理,2019;10(18):145-7.

7张志荣,张林林,樊玉娟,等.茵甘合剂对ANIT诱导肝内胆汁淤积模型小鼠肝损伤防治作用及机制研究〔J〕.肝脏,2017;22(2):119-24.

8李娜芝,师艺玮,郭敏侠,等.藏药波棱瓜子总木脂素对ANIT诱导的小鼠肝损伤的保护作用及机制研究〔J〕.中药新药与临床药理,2023;34(1):49-56.

10陶艳艳,陈高峰,刘成海.常用急性肝损伤动物模型评价及其在中药药理研究中的应用〔J〕.上海中医药杂志,2019;53(11):12-9,

12王贵阳,李可为.氧化应激在胆汁淤积性肝损伤中的作用及抗氧化治疗研究进展〔J〕.中国现代普通外科进展,2014;17(1):38-41.

14李国栋,杨金玉,马小华,等.清热卡森颗粒对肝内胆汁淤积大鼠模型的治疗作用及机制研究〔J〕.世界科学技术-中医药现代化,2022;24(10):4038-46.