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膀胱癌组织中TopoⅡα表达水平及与TURBT术后复发的关系

2020-10-13 206 上传者：管理员

摘要：目的:探讨膀胱癌组织中拓扑异构酶Ⅱα(TopoⅡα)表达水平及与经尿道膀胱肿瘤电切术(TURBT)后复发的关系。方法:选取在我院泌尿外科确诊为膀胱癌并行TURBT术的患者90例,术后采用吡柔比星注射液膀胱灌注治疗,根据TopoⅡα表达情况将90例膀胱癌患者分为TopoⅡα高表达组和TopoⅡα低表达组,比较TopoⅡα的表达情况与膀胱癌患者临床病理特征的关系,进行TopoⅡα的表达与吡柔比星膀胱灌注治疗的预后分析。结果:90例膀胱癌患者中有57例TopoⅡα高表达,高表达率为63.33%;膀胱癌患者TopoⅡα高表达率与年龄、肿瘤数目、肿瘤大小和病理分级等临床病理特征参数显著相关(P<0.05)。TopoⅡα高表达组患者1、2、3年复发率(8.77%、14.04%、17.54%)明显低于TopoⅡα低表达组(27.27%、39.39%、51.52%),TopoⅡα高表达组平均复发时间显著高于TopoⅡα低表达组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Cox回归分析显示:肿瘤多发、肿瘤大小>2cm、病理分级和TopoⅡα低表达等4个因素为膀胱癌患者复发的独立危险因素(P<0.05)。结论:TopoⅡα表达与膀胱癌患者年龄、肿瘤数目、肿瘤大小和病理分级等显著相关,在TURBT术后对TopoⅡα高表达患者给予吡柔比星注射液膀胱灌注治疗可以显著减少复发率。

关键词：
吡柔比星
拓扑异构酶Ⅱα
泌尿肿瘤
经尿道膀胱肿瘤电切术
膀胱灌注治疗
膀胱癌
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膀胱癌在全球恶性肿瘤的发病率排名第九,其发病率正逐年递增,呈现出年轻化、低龄化趋势[1,2]。资料显示,每年有超过38万新发膀胱癌病例,有超过15万患者死于膀胱癌[3]。在膀胱癌的病理分型中,非肌层浸润性膀胱癌超过了70%[4]。目前对非肌层浸润性膀胱癌行经尿道膀胱肿瘤电切术可以获得较好的治疗效果,但其术后3～5年的复发率高达40%～80%,严重影响了患者的生存期[5]。非肌层浸润性膀胱癌TURBT术后行蒽环类药物(吡柔比星)膀胱灌注治疗可以有效降低术后肿瘤的复发率,是目前最常用的术后治疗手段,但有较为明显的个体差异[6]。研究影响吡柔比星膀胱灌注治疗效果的机制,对减少膀胱癌术后复发具有重要意义。拓扑异构酶Ⅱα(topoisomeraseⅡα,TopoⅡα)在肿瘤转移和免疫系统调控等方面发挥着重要作用,TopoⅡα表达水平与预后密切相关,直接影响化疗药物的疗效[7]。因此,对TopoⅡα进行深入研究可以指导膀胱癌临床治疗用药和预后判断。本研究通过检测膀胱癌组织中TopoⅡα的表达水平及对TURBT术后吡柔比星注射液膀胱灌注治疗的影响,为膀胱癌患者TURBT术后治疗提供个体化方案。

1、资料与方法

1.1一般资料

选取我院泌尿外科2012年1月至2014年12月期间确诊为膀胱癌并行TURBT术,术后经病理明确诊断为非肌层浸润性膀胱癌的pT1期膀胱尿路上皮癌患者90例,其中男性66例,女性24例,年龄为37～78岁,平均(57.5±10.8)岁,病程为6个月～11年,平均(5.36±2.14)年。依据国际泌尿病理协会(InternationalSocietyofUrological,ISU)制定的尿路上皮癌标准,90例患者中低级别乳头状尿路上皮癌和高级别乳头状尿路上皮癌分别为48例和42例;按照TNM分期,90例患者均为pT1期。

1.2膀胱灌注治疗

所有患者在TURBT术后1周开始用吡柔比星注射液(规则:10mg/支,深圳万乐药业有限公司)进行膀胱灌注治疗。治疗方案如下:患者排空膀胱,在常规消毒后将导尿管置入膀胱,将配置好的吡柔比星注射液(吡柔比星注射液30mg+5%葡萄糖注射液30mL)60mL进行膀胱灌注,患者每5min变换1次体位,灌药后30～60min自行排尿,如遇不适,及时排尿并多喝水,开始为每周1次,持续8次,然后改为每两周1次,持续8次,最后改为每月1次,持续至术后两年。病例纳入标准:①所有患者均行TURBT术,并经病理诊断为pT1期膀胱尿路上皮癌;②所有保存的膀胱癌组织为术后24h内取得的新鲜标本;③能坚持完成整个吡柔比星治疗周期;④所有患者的预计生存期均>3个月;⑤征得研究对象及家属知情同意,签署知情同意书。病例排除标准:①不能配合治疗患者;②患有严重肝肾疾病、心脑血管疾病、精神疾病或其它重大器官疾病的患者;③治疗期间,同步接受其他肿瘤放疗的患者;④对吡柔比星过敏患者。本研究获得医院医学伦理学委员会批准。

1.3免疫组织化学法检测膀胱癌组织中TopoⅡα的表达水平

取膀胱癌组织病理石蜡块进行切片,厚度为2μm。经常规脱蜡、脱水后进行抗原修复,加入TopoⅡα单克隆抗体(购于英国Abcam公司,稀释比1∶100),4℃过夜,加入兔抗人单克隆抗体(IgG)(购于北京中杉金桥生物技术有限公司),室温30分钟,DAB显色(购于北京中杉金桥生物技术有限公司),再进行苏木素复染、酒精梯度脱水、二甲苯透明、封片。TopoⅡα在膀胱癌组织中以细胞核染色呈棕黄色或棕褐色颗粒为主。随机选取5个视野(×400)进行细胞计数,每个视野计数200个细胞,计算阳性细胞百分比(阳性细胞数/1000×100%)。将阳性细胞百分比<25%定义为TopoⅡα低表达,阳性细胞百分比≥25%定义为TopoⅡα高表达。根据TopoⅡα表达情况将膀胱癌患者分为TopoⅡα低表达组和TopoⅡα高表达组。

1.4随访

灌注期间每3个月进行1次随访,检查血、尿常规及肝肾功,行尿脱落细胞学检查确定是否复发。第1年每3个月随访1次,第二年每半年随访1次,此后每年随访1次,共随访3年。若门诊随访失败进行电话随访,询问患者排尿情况。二者均不能随访视为失访。

1.5统计学分析

用SPSS19.0对数据进行统计学分析。计数资料用χ2检验进行判断,计量资料采用均数±标准差(x¯±s),用t检验进行判断,采用Cox回归模型(α入=0.05、α出=0.10)判断影响膀胱癌患者术后复发的危险因素,P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1TopoⅡα在膀胱癌组织中的表达情况

90例膀胱癌患者中有57例TopoⅡα高表达,表达率为63.33%;33例TopoⅡα低表达,表达率为36.67%(图1)。

图1TopoⅡα表达情况

A:TopoⅡα低表达;B:TopoⅡα高表达。

2.2TopoⅡα的表达情况与膀胱癌患者临床病理特征的关系

TopoⅡα表达水平与患者性别不相关,差异无统计学意义(P>0.05);与年龄、肿瘤数目、肿瘤大小和病理分级等临床病理特征参数显著相关,差异有统计学意义(P<0.05)(表1)。

表1TopoⅡα的表达情况与膀胱癌患者临床病理特征的关系n(%)

2.3不同TopoⅡα表达水平的膀胱癌患者复发情况比较

TopoⅡα高表达组患者1、2、3年复发率明显低于TopoⅡα低表达组(P<0.05);TopoⅡα高表达组患者平均复发时间显著高于TopoⅡα低表达组(P<0.05)(表2)。

2.4膀胱癌患者复发影响因素Cox回归分析

膀胱癌TURBT术后灌注治疗患者复发影响因素Cox回归分析显示:肿瘤多发、肿瘤直径>2cm、病理高分级和TopoⅡα低表达等4个因素为膀胱癌患者复发的独立危险因素(P<0.05)(表3)。

3、讨论

膀胱癌术后复发是临床尚待解决的难题,辅助化疗是膀胱癌患者术后重要的治疗方案。研究表明,在膀胱癌患者TURBT术后早期给予蒽环类化疗药物膀胱灌注治疗可以显著降低膀胱癌的复发率[8]。在辅助化疗过程中发现,部分患者出现了不同程度的单药耐药和多药耐药,影响了膀胱癌化疗的疗效,其中多药耐药是影响化疗效果的主要因素。多药耐药是肿瘤细胞对某种化疗药物耐药后会引起其他化疗药物(如作用机制、化学结构及种类均不相同等)出现交叉耐药的现象[9]。引起膀胱癌多药耐药的因素众多,如药物在肿瘤细胞内分布浓度的改变、抗肿瘤药物的激活和灭活发生改变、抗癌药物与肿瘤细胞内酶的亲和力发生改变等均可引起耐药性[10]。

TopoⅡα是多种抗肿瘤药物作用的潜在靶点。拓扑异构酶(topoisomerase,Topo)存在于生物细胞核内,主要有TopoⅠ和TopoⅡ两种类型,TopoⅡ又分为TopoⅡα和TopoⅡβ两个亚型,TopoⅡα和TopoⅡβ在催化活性、空间构象等方面均存在很大差别[11,12]。TopoⅡα其相对分子量为170kD,定位于染色体17q21.3,在G1、G0期降低,而在细胞S期、G2期表达明显升高,对于DNA合成、转录、修复等过程发挥着重要的作用[13]。TopoⅡα可以和断裂的DNA末端通过非供价形式结合形成不稳定的TopoⅡα-DNA聚合体,当这种不稳定的聚合体受到化疗药物作用时,形成稳定的TopoⅡα-DNA聚合体,使DNA保持断裂状态,最终达到抗肿瘤目的[14,15]。TopoⅡα的含量与抗癌药物的疗效呈正相关,而TopoⅡα含量越低,越容易导致耐药的发生[16]。在膀胱癌中,TopoⅡα往往过表达,但其表达率与临床分期、分化程度有关。临床分期越晚,组织分化程度越低,TopoⅡα阳性表达越高,而TopoⅡα在早期或分化高的膀胱癌组织中阳性表达率也较高[17]。

表2不同TopoⅡα表达水平的膀胱癌患者复发情况比较

表3膀胱癌患者复发影响因素Cox回归分析(n=90)

吡柔比星是一种通过在阿霉素氨基糖的4'位上加上四氢吡喃而形成的新型蒽环类抗肿瘤药物,大大提高了其抗癌活性,对浅表性膀胱癌术后复发具有良好的预防作用[18]。吡柔比星通过直接作用于TopoⅡα,形成吡柔比星-TopoⅡα-DNA稳定聚合体,阻碍DNA复制及转录,使肿瘤细胞停留在G2期,抑制肿瘤细胞生长和诱导细胞凋亡[19]。既往有研究发现[20],TopoⅡα高表达患者对吡柔比星的敏感性较TopoⅡα低表达患者增加,预后较好,有望通过检测组织中TopoⅡα的表达状况指导临床合理用药,本项目将在下一步研究中探讨TopoⅡα表达情况与吡柔比星敏感性的关系以及具体如何利用TopoⅡα表达情况指导临床合理用药。

综上所述,TopoⅡα表达情况与膀胱癌患者年龄、肿瘤数目、肿瘤大小和病理分级等显著相关,在TURBT术后对TopoⅡα高表达患者给予吡柔比星注射液膀胱灌注治疗可以显著减少复发率,对TopoⅡα进一步研究可为膀胱癌患者TURBT术后制定个体化治疗方案提供参考。

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