摘要:为了解2021年河南省济源市规模化猪场PCV2血清流行病学情况,本研究选取5家规模化养猪场中的外观健康、未免疫PCV2疫苗的不同生长阶段生猪,共采集血清1 332份,利用ELISA法进行血清抗体检测。结果显示,共检测出阳性血清样本444份,平均阳性率为33.33%,猪场阳性率为100%。种公猪、母猪、仔猪、育肥猪平均阳性率分别为21.57%、 36.78%、 18.01%、 42.62%。结果表明,济源市规模化猪场普遍存在PCV2感染情况。本研究为济源市PCV2防控提供参考,提示应引起重视,加强PCV2病综合防治。
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猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)属圆环病毒科、圆环病毒属,病毒基因组为单股负链环状DNA,病毒呈二十面体对称,无囊膜结构,是迄今为止发现的一种最小的动物病毒[1,2,3]。猪圆环病毒2型(PCV2)是4个PCV基因型中的一个[4],也是引起猪圆环病毒病和猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)的主要致病原,通常造成猪皮炎肾病综合征(PDNS)、断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、猪呼吸道综合征(PRDC)、猪繁殖障碍、猪增生性坏死性肺炎(PNP)和新生仔猪先天性震颤(PCT)等多系统功能性障碍疾病[5]。病猪表现为渐进性消瘦、呼吸困难、淋巴结肿大、贫血等多种症状。目前已有研究报道PCV单独感染动物不会导致明显的PCVAD[6],但是,PCV2主要破坏猪免疫系统,导致感染猪产生免疫抑制,容易继发感染猪细小病毒病、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸障碍病、猪瘟等病毒性疾病和链球菌、大肠杆菌、副猪嗜血杆菌等细菌性疾病[7,8,9],使猪病诊断和防治复杂化,严重危害养猪业健康发展。1997年,PCV2首先在加拿大被分离鉴定出来,2001年,郎洪武等[10]首次从我国猪体内分离到PCV2,目前该病广泛分布于我国各地养猪场,成为重点关注和防控的临床常见疫病。
为了解济源市规模化养猪场PCV2流行情况,本研究选取5家规模化未免疫PCV2的养猪场中不同生长阶段的猪1 332头,采用ELISA法检测血清PCV2抗体,旨在为PCV2防治提供基础性参考资料。
1、试验材料与方法
1.1 样品来源
2021年2—8月,从河南省济源市5家未接种免疫PCV2的规模化养猪场,按5%比例选取健康仔猪、育肥猪、母猪、种公猪,进行前腔静脉或耳静脉采血5 m L,室温静置2 h,3 500 rpm离心3 min,取上清血清,-20℃下保存备用。试验共采集血清样本1 332份,按猪场来源、猪群不同生长阶段进行编号。
1.2 试剂和仪器
猪PCV2酶联免疫吸附抗体检测(ELISA)试剂盒为武汉科前动物生物制品有限责任公司生产,Varioskan LUX多功能酶标仪为赛默飞世尔科技(中国)有限公司生产。实验室备有离心机、微量振荡器、37℃恒温箱、自动洗板机等。
1.3 试验方法
PCV2血清抗体ELISA检测方法按照试剂盒说明书操作。取预包被抗原的微孔酶标板,室温平衡20 min后,设置样本孔和标准孔,将10μL待检血清和40μL样本稀释液加入样本孔,标准孔加入50μL不同浓度的标准品,设空白孔,加稀释液100μL。将辣根过氧化酶(HRP)标记过的检测抗体分别加入样本孔和标准品孔,100μL/孔,用封板膜密封板孔。37℃恒温箱温育1 h,弃封板膜,吸水纸拍干液体,再加入用去离子水20倍稀释的20×洗涤缓冲液,静置3 min,用吸水纸拍干液体,反复5次,每孔加入底物A、B液各50 m L,混匀,37℃避光孵育显色15 min。每孔内加50μL终止液终止反应。以空白对照孔调零,在酶标仪上10 min内以630 nm波长测定各孔的吸光度OD630 nm值。结果判定:试验成立条件为阴性对照孔平均OD630 nm值<0.25,阳性对照孔平均OD630 nm值≥1.0。待检血清孔OD630 nm值>0.42时,结果判定为阳性,待检血清孔OD630 nm值<0.38时,结果判定为阴性,待检血清孔OD630 nm值为0.38~0.42,结果判为可疑,需再检测。
2、结果与分析
2.1 5家规模化猪场PCV2血清抗体检测结果
由表1可知,1 332份血清中有444份抗体阳性血清,平均阳性率为33.33%,阳性率介于28.25%~41.67%。在5家规模化猪场均检测到阳性血清,表明猪场阳性率为100%。
2.2 5家规模化猪场不同生长阶段猪PCV2血清抗体检测结果
由表2可知,按照不同生产阶段PCV2抗体检测结果统计分析,种公猪、母猪、仔猪、育肥猪平均阳性率分别为21.57%、36.78%、18.01%、42.62%,种公猪阳性率以1号猪场最高,为28.57%;母猪阳性率以2号猪场最高,为44.44%;仔猪阳性率以2号猪场最高,为26.53%;育肥猪阳性率以1号猪场最高,为50.00%。每个猪场的不同生长阶段猪群都有血清阳性样品。
表1 5家规模化猪场PCV2血清抗体检测结果
3、讨论
本次调查选择5家未免疫PCV2的规模化猪场中外观健康的猪群,对1 332份血样采用ELISA方法进行PCV2抗体检测,共检出阳性血清样本444份,总平均阳性率为33.33%,猪场阳性率为100%。虽然抽样个体数较少,但是具有一定代表性,表明河南济源市规模化猪场广泛存在PCV2,有的猪场相当严重,比如1号猪场阳性率达到41.67%,高于平均值8.34个百分点,应引起畜牧兽医部门和养殖场注意。胡慧等[11]对来自河南12个地区的226份猪血清样品PCV2抗体检测,结果显示总抗体的阳性率为53.10%。刘琨等[12]报道,河南信阳地区猪PCV2总体阳性率为48.9%。尽管本次研究的总体阳性率低于上述地区检测结果,但是PCV2感染猪群是潜在的带毒者,病毒可以通过分泌物、鼻液和粪尿等排出,是威胁其他猪群健康的主要传染源,一旦这些携带病毒的猪群受到外界应激,机体免疫机能会下降,很容易转化为明显症状的发病猪,且继发其他致病性微生物感染。
从生猪不同生长阶段的PCV2抗体检测结果看,种公猪、母猪、仔猪、育肥猪均存在PCV2感染情况,仔猪阳性率最低,为18.01%,这与仔猪受母源抗体的保护有关。种公猪阳性率为21.57%,表明由于种公猪价值较高,在猪场生产中的具有重要作用,5家猪场比较重视种公猪的饲养管理和疫苗接种。母猪、育肥猪平均阳性率分别为36.78%、42.62%,均高于平均阳性率,可能与母猪饲养周期长增加PCV2感染机会和育肥猪后期临近出栏饲养管理不严格等因素有关,需要进一步具体检测。连慧香等[13]报道,在河南部分地区的非疫苗免疫猪群中,种用公、母猪的PCV2抗体阳性率最低,育肥猪和断奶仔猪抗体阳性率较高。施德兰[14]等对15家规模化猪场PCV2抗体检测,发现哺乳仔猪总阳性率为7.20%,商品猪总阳性率为11.00%,育成猪总阳性率为40.00%,种公猪总阳性率为38.57%,种母猪总阳性率为40.76%。上述学者报道与本研究在不同阶段猪群PCV2结果有所差异,这与受检猪场饲养管理、抽样设计等不同有关,但是在不同生长阶段的猪群均有PCV2感染方面的研究结果一致。
表2不同生长阶段猪PCV2血清抗体检测结果
根据本次研究检测结果,建议济源市规模化猪场应强化商品化PCV2疫苗接种,定期开展检测,加强饲养管理,降低或避免应激因素,提高猪群营养水平,严格消毒防疫,提高猪体免疫力,重点采取药物预防方案控制如副猪嗜血杆菌等病原菌的继发感染[15],最大限度地降低猪群的死亡率,减少经济损失。
4、小结
本研究对2021年济源市5家未接种免疫PCV2的规模化养猪场采用ELISA进行PCV2抗体检测,结果发现猪场感染PCV2比较严重,猪场阳性率为100%,不同生长阶段猪群均有PCV2感染。研究为开展PCV2疾病的诊断与防控奠定了基础。
参考文献:
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文章来源:栗卫东,许军.河南省济源市规模化猪场猪圆环病毒2型流行病学调查[J].中国猪业,2023,18(05):115-117.
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