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高效液相-串联质谱技术在新生儿遗传代谢性疾病筛查中的应用

2023-12-25 17 上传者：管理员

摘要：目的探讨高效液相-串联质谱技术(HPLC-MS/MS)在新生儿遗传代谢性疾病筛查的应用价值。方法选取我院就诊的301例新生儿，新生儿出生48 h～7 d内采集足底血制作血斑样本，采用HPLC-MS/MS技术对样本中多种氨基酸代谢、有机酸代谢和脂肪酸代谢进行筛查，初筛阳性结果患儿召回复查并做进一步诊断。结果 301例筛查样本中初筛可疑阳性21例(0.70%),召回20例进行复查，最终进行基因诊断确诊3种遗传代谢性疾病，其中1例甲基丙二酸血症(MMA),1例精氨酸血症，1例瓜氨酸血症。结论 HPLC-MS/MS技术应用于新生儿遗传代谢性疾病筛查，具有高效、准确、快速等优势，本地可能是此病的高发地区，大力推广新生儿遗传代谢性疾病筛查，做到早发现、早诊断、早治疗，对降低本地出生缺陷，提高人口素质有重大意义。

关键词：
先天代谢缺陷
新生儿时期
新生儿遗传代谢性疾病
筛查
高效液相-串联质谱
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遗传代谢性疾病又称先天代谢缺陷，多发生于新生儿时期。因机体遗传物质发生突变，造成多种酶、转运蛋白异常或细胞功能缺陷或异常，最终出现体内生化代谢途径异常的一种疾病[1,2]。由于新生儿遗传代谢性疾病的筛查包含氨基酸、脂肪酸、有机酸等40多种物质，传统的生化免疫法检测一次只能检测一种物质，耗时较长、费用较高，且由于受新生儿刚出生机体代谢物浓度影响，生化免疫法检测时机体容易出现误诊、漏诊，导致此病诊断的难度加大[3]。高效液相-串联质谱(HPLC-MS/MS)技术可在5 min内对几十种代谢性小分子物质进行定性和定量检测，有效提高了筛查的精准度和效率，已成为目前新生儿遗传代谢性疾病的筛查的主要手段[4]。本文探讨高效液相-串联质谱技术(HPLC-MS/MS)在新生儿遗传代谢性疾病筛查的应用价值。

1、资料与方法

1.1 一般资料

选取2021年9月至2022年4月我院接受遗传代谢性疾病筛查的301例新生儿，其中男167例，女134例，均出生3～9 d, 平均出生时间(4.53±0.38)d, 早产儿8例，足月儿293例，门诊新生儿30例，住院部新生儿271例。本研究经医院伦理委员会批准通过，新生儿监护人均知情同意。

1.2 标本采集

新生儿出生2～7 d内，经充足喂养48 h后，新生儿科专业护士将新生儿足跟采血部位进行酒精消毒，然后用无菌采血针采集样本，取第二滴血滴于干血片，晾干后继续滴第二个孔位，至少采集三个血斑，采集过程中，重复滴血的样本视为不合格样本，会影响实验结果，应重新采集[5];采集的血斑直径应大于8 mm, 血斑自然晾干后放置4℃冰箱保存，并及时检测；对初筛阳性结果的标本，要求立即召回重新采集样本进行复查。

1.3 检测及筛查方法

1.3.1 仪器与试剂

高效液相-三重四级杆串联质谱仪(型号：QSight 210MD,厂家：perkinelmer),自动进样器(型号：QSight HC Autosample MD;厂家：perkinelmer);手动打孔器；非衍生化多种氨基酸、肉碱和琥珀酰丙酮测试试剂盒 (串联质谱法)试剂盒(厂家：perkinelmer),甲醇、水等试剂均购自Oceanpak。

1.3.2 检测方法

手动打孔器打孔后，将样本置于96孔聚丙烯板内，每孔加入经甲醇溶解的内标萃取液100 μl ,封口膜封闭96孔板后，45℃恒温震荡30～45 min; 吸取75 uL萃取液至新的96孔板中，封口膜封闭96孔板，HPLC-MS/MS上机检测。

1.4 结果判定

质谱结果参照健康儿童分析结果的参照范围确定，对初筛结果高于、低于参考范围的，均认定为阳性结果，要及时联系患者家属进行二次复查，并结合尿液有机酸检测、酶活性检测，如再次复查为阳性，建议通过基因检测进行诊断。

1.5 统计学方法

本研究数据通过EXCEL表格统计并分析，初筛阳性率(%)=初筛阳性例数/总筛查人数，召回率(%)=初筛阳性召回例数/总初筛阳性例数；各类型遗传代谢性疾病初筛阳性率(%)=各类型初筛阳性例数/总初筛阳性例数；各类型遗传代谢性疾病确诊率(%)=确诊例数/总筛查例数。

2、结果

2.1 新生儿遗传代谢性疾病筛查情况

301例参与新生儿遗传代谢性疾病筛查的标本中，初筛阳性例数共21例，初筛阳性率为0.70%,初筛阳性患儿共召回20例，召回率为95.24%,召回患儿再次采用HPLC-MS/MS进行新生儿遗传代谢性疾病复查，10例患儿仍为阳性，复查患儿全部进行基因测序诊断，最后诊断结果有3例为确诊患儿，见表1。

表1 新生儿遗传代谢性疾病筛查情况n(%)

2.2 新生儿遗传代谢性疾病筛确诊患儿详细情况

HPLC-MS/MS二次复查后，经基因诊断，3例新生儿遗传代谢性疾病确诊的标本中，2例为氨基酸代谢异常病种，分别为精氨酸血症和瓜氨酸血症，1例为有机酸代谢异常病种，即甲基丙二酸血症，具体复查结果及基因诊断结果如表2所示：

表2 新生儿遗传代谢性疾病筛确诊患儿的详细情况

3、讨论

遗传代谢性疾病可发病于任何年龄段，但多见于新生儿，早期无特征性临床表现，常被误诊为感染、精神疾病、心血管疾病等常见的其他疾病，耽误最佳治疗时间[6]。因此，早筛查、早发现新生儿遗传代谢性疾病，对临床早干预、早防控患儿病情恶化意义重大。HPLC-MS/MS技术作为目前新生儿遗传代谢性疾病筛查的最佳手段，主要是通过液相将待检测物质进行初步分离，后将物质电离为带电粒子，识别并定量测定带电粒子的离子峰强度，在短时间内将几十种代谢产物精准识别，实现了临床新生儿遗传代谢性疾病精准、快速检测的要求[7]。

本文结果显示，对301例新生儿进行遗传代谢性疾病筛查，初筛阳性患儿21例，初筛阳性率为0.70%,其中召回复查的患儿中，经二次复查，仍有10例为阳性，这和已有报道的上海、淄博等地的筛查结果差异较大，其原因可能是不同地区新生儿足跟血采集方式、参考范围、文化水平不同引起。经基因诊断结果显示，复查阳性病例中，有3例被确诊，确诊率为0.9%,总阳性确诊率高于文献中报道多个地区的总阳性确诊率，由此分析，本地区属新生儿遗传代谢性疾病的高发地区，应大范围开展此项目的筛查，同时应普及此项目筛查的重要性。

本文结果还显示，确诊患儿分别患有精氨酸血症，瓜氨酸血症和甲基丙二酸血症，这符合以往的研究结果，即HPLC-MS/MS技术在新生儿遗传代谢性疾病干血片筛查中，对判定精氨酸血症、瓜氨酸血症、以及甲基丙二酸血症有显著特异性[8]。但本结果中，HPLC-MS/MS技术假阳性率较高，为进一步提升筛查性能，需确保标本采集质量、合理优化技术方法，严格控制实验流程、加强实验室管理，与多个相关实验平台协作交流，降低HPLC-MS/MS技术在新生儿遗传代谢性疾病筛查的假阳性率。

综上，采用HPLC-MS/MS技术提高了新生儿遗传代谢性疾病的筛查效率，对临床早发现、早治疗患儿尤为重要，对降低出生缺陷、提高全民健康素质意义深远，值得在临床大力推广应用。

参考文献:

[1]吴金曦,黄素,王玲玲.21 024例新生儿遗传代谢病串联质谱结果回顾分析[J].中国优生与遗传杂志,2020,28(02):203-204.

[2]吴姗姗,唐萍,吴龙艳.基于家庭为中心的护理干预对新生儿红臀发生率及护理质量的影响[J].贵州医药,2019,43(01):161-163.

[3]郑国兵,梁睿,唐家彦,等.串联质谱技术在新生儿遗传代谢病筛查中的应用分析[J].分子诊断与治疗杂志,2021,13(11):1809-1812.

[4]侯有矶,邓勇莹,黄洁颜,等.串联质谱用于顺德区新生儿代谢遗传病筛查工作的临床价值[J].检验医学与临床,2016,13(21):3111-3113+3116.

[5]徐章云,王小雪.PDCA护理干预对新生儿疾病筛查血片采集成功率的影响分析[J].贵州医药,2021,45(10):1663-1664.

[6]孙松阳,汪希珂.高通量测序与遗传代谢疾病的研究进展[J].贵州药,2020,44(08):1198-1201.

[7]王兴,孙小红,闫有圣,等.串联质谱技术在甘肃地区遗传代谢病筛查中的应用[J].中国妇幼保健,2018,33(04):861-863.

[8]谭举方,朱晓芳,周艳玲,等.高效液相串联质谱技术在新生儿遗传代谢病早期筛查中的应用价值分析[J].中国妇幼保健,2022,37(05):909-912.

文章来源:于青,罗少龙,屈萍等.高效液相-串联质谱技术在新生儿遗传代谢性疾病筛查中的应用价值[J].贵州医药,2023,47(12):1924-1925.