首页 > 论文范文 > 医药卫生论文 > 医学毕业论文 > 医学本科毕业论文 > 血清奥氮平浓度受氟伏沙明和CYP1A2*1F基因多态性的影响

血清奥氮平浓度受氟伏沙明和CYP1A2*1F基因多态性的影响

2020-07-18 372 上传者：管理员

摘要：目的研究氟伏沙明与细胞色素P450酶1A2(cytochromeP4501A2,CYP1A2)基因*1F位点多态性对精神分裂症患者血清奥氮平浓度的影响。方法入组精神分裂症患者单用奥氮平者(奥氮平组)92例以及奥氮平联用氟伏沙明者(联合组)103例，采集血液，测定CYP1A2*1F基因型以及血清奥氮平浓度，比较2组以及CYP1A2*1F各个基因型间的血清奥氮平浓度差异。结果奥氮平组血清奥氮平浓度(3.39±2.70)mg·L-1·mg-1显著低于联合组(5.14±3.06)mg·L-1·mg-1(t=4.23,P=0.000)。AA型血清奥氮平浓度比CC型低[奥氮平组：(2.46±1.64)mg·L-1·mg-1vs(4.42±2.88)mg·L-1·mg-1,P<0.05；联合组：(4.06±2.65)mg·L-1·mg-1vs(6.86±3.25)mg·L-1·mg-1,P<0.01]，但是CA型与CC型的差异无统计学显著意义。结论氟伏沙明可升高血清奥氮平浓度；不同基因型个体，血清奥氮平浓度不同；应根据氟伏沙明使用情况和CYP1A2*1F基因型个体化给药。

关键词：
CYP1A2*1F基因多态性
氟伏沙明
精神分裂症
精神疾病
血清奥氮平浓度
加入收藏

精神分裂症是一种常见的精神疾病，全球终身患病率约为1%[1]。奥氮平是常用的第二代抗精神病药物[2]，细胞色素P450酶1A2(cytochromeP4501A2,CYP1A2)是其在体内的主要代谢酶[3]。近年来，代谢酶基因多态性研究很大程度上促进了临床合理用药[4]。研究表明，CYP1A2*1F基因多态性影响奥氮平代谢速度、血药浓度及疗效[5]。

目前临床上单用奥氮平治疗精神分裂症较少，通常采用联合用药以尽快发挥治疗作用，并提高治疗有效率或减少不良反应。联合用药时，可产生药物间的相互作用，影响它们在体内的代谢过程[6]。奥氮平与氟伏沙明联用是临床上常用的策略之一，但未见它们联用时CYP1A2*1F基因多态性对血清奥氮平浓度影响的报道。本研究旨在探讨奥氮平联合氟伏沙明用药时，氟伏沙明和CYP1A2*1F基因多态性对血清奥氮平浓度的影响，为临床上奥氮平药物剂量的选择提供参考。

1、方法

1.1研究对象

研究对象为2016年7月—2018年7月在杭州市第七人民医院住院部就诊的患者，同时符合以下入组标准：经2位副主任以上医师诊断，符合ICD-10精神分裂症的诊断标准；接受奥氮平(商品名：欧兰宁，江苏豪森药业股份有限公司)联合马来酸氟伏沙明(商品名：兰释，荷兰苏威制药)治疗的患者进入联合组，单用奥氮平(商品名：欧兰宁，江苏豪森药业股份有限公司)的患者进入单药组；治疗过程中，患者未接受其他药物以及物理治疗；患者的病情有效控制(PANSS量表得分减分率≥50%)；无明显不良反应；肝肾功能正常；汉族；年龄≥18周岁；非吸烟和非饮酒患者。排除标准：合并其他药物或物理治疗；合并其他精神障碍者；病情未得到有效控制者(PANSS量表得分减分率<50%)；不良反应明显者；肝肾功能异常者；吸烟者；饮酒者；合并重要脏器严重疾病者；妊娠或哺乳期妇女。

本研究通过杭州市第七人民医院伦理委员会的批准，研究对象本人或家属同意参加此研究，并签署知情同意书。

1.2给药方案

奥氮平起始给药剂量为5mg·d-1，根据病情需要可调整剂量。剂量调整结束后，每个研究对象剂量固定，为5～20mg·d-1。奥氮平每天7:30、18:00服药，氟伏沙明每天7:30服药。

1.3研究对象资料收集

收集每个研究对象的性别、年龄、身高、体质量、吸烟情况、饮酒情况、用药种类和剂量等。

1.4CYP1A2基因型测定

1.4.1DNA提取

在含乙二胺四乙酸二钾(K2EDTA)抗凝剂的真空采血管中采集血液1mL，其中0.5mL用于CYP1A2基因分型测定，剩余0.5mL备查。采用天根生化科技(北京)有限公司生产的血液基因组提取试剂盒抽提血液DNA。取K2EDTA抗凝血0.5mL，加入含蔗糖、Tris-HCl、氯化镁的裂解液对细胞进行裂解，11500×g离心1min，弃上清，往白色沉淀中加入20mg·mL-1蛋白酶K20μL以及10%SDS200μL,56℃10min进行蛋白质降解，加无水乙醇200μL沉淀DNA,11500×g离心后用70%乙醇进行清洗，最后将DNA溶解在TE缓冲液(Tris10mmol·L-1、EDTA2mmol·L-1)中，-20℃保存待用。

1.4.2CYP1A2*1F基因型测定

采用PCR-RELP法检测。先进行PCR扩增反应，上游引物5’-CAACCCTGCCAATCTCAAGCAC-3’；下游引物5’-AGAAGCTCTGTGGCCGAGAAGG-3’，由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，用灭菌蒸馏水配成10μmol·L-1。PCR反应体系：总体积25L，其中基因组DNA2L(约50ng),dNTP2L,10×PCRbuffer2.5L，引物各0.75L，用灭菌双蒸水补足至25L。PCR反应条件：94℃预变性5min,94℃变性30s,62℃退火30s,72℃延伸90s，循环35次，最后72℃延伸5min。PCR产物用ApaI酶切，37℃孵育8h，酶切产物用2%琼脂糖凝胶电泳后，采用凝胶成像系统(美国伯乐公司ChemiDocTMXRS+)进行分析。若出现709,211bp2条带，则为野生纯合型(CC)；若出现920,709,211bp，则为杂合型(CA)；若只有920bp1条带，则为突变纯合型(AA)。

1.5血清奥氮平药物浓度测定及校正

固定剂量服药>2周，采集血液测定血清奥氮平浓度。采血时间为6:30—7:00，空腹，尚未服用当天的药物。采集血液2mL于含分离胶和促凝剂的真空采血管中，分离血清，采用LC-MS测定稳态血清奥氮平浓度，由杭州佰辰医学检验所有限公司测定。因研究对象服药剂量不同，理论上，服药量大，则血清药物浓度较高。为消除服药剂量对血清奥氮平浓度的影响，将血清奥氮平浓度对每日服药剂量进行校正，即血清奥氮平浓度除以每日服药剂量，得到每服用1mg奥氮平体内的血清奥氮平浓度。

1.6统计学处理

采用SPSS19.0进行统计分析。组间年龄、体质量指数(BMI)、血清奥氮平浓度比较采用t检验或方差分析，性别比较采用χ2检验，Hardy-Weinberg平衡检验采用拟合优度χ2检验。检验水准α=0.05。

2、结果

2.1研究对象一般特征

本次研究募集符合条件的患者195例，其中奥氮平联用氟伏沙明(联合组)103例，奥氮平组92例，各组一般特征、奥氮平剂量见表1,2组比较均无统计学差异。联合组氟伏沙明剂量为50～100mg·d-1，平均剂量(61.17±20.92)mg·d-1。

表1研究对象一般特征

2.2CYP1A2*1F基因型Hardy-Weinberg平衡检验

经拟合优度χ2检验，2组基因型均符合Hardy-Weinberg平衡定律(奥氮平组：χ2=0.99,df=2,P>0.05；联合组：χ2=0.05,df=2,P>0.05)，见表2。

表2CYP1A2*1F基因型和等位基因分布

2.3氟伏沙明对血清奥氮平浓度的影响

奥氮平组和联合组血清奥氮平浓度分别为(3.39±2.70),(5.14±3.06)g·L-1·mg-1,2组比较，差异具有统计学意义(t=4.23,P=0.000)。

2.4CYP1A2*1F各基因型血药浓度比较

2组研究对象各基因型的血清奥氮平浓度见表3。

奥氮平组各基因型间比较：AA型的血清奥氮平浓度显著低于CC型，差异具有统计学意义(t=2.35,P=0.02)；而CA型与CC型比较，差异无统计学意义(t=1.52,P=0.13)。

联合组各基因型间比较：AA型的血清奥氮平浓度明显低于CC型，差异具有统计学意义(t=2.71,P=0.007);CA型与CC型比较，差异无统计学意义(t=1.16,P=0.25)。

相同基因型的组间比较：联合组的血清奥氮平浓度均显著高于奥氮平组，差异具有统计学意义。CC型：t=2.28,P=0.02;CA型：t=2.13,P=0.03;AA型：t=2.83,P=0.005。

表32组研究对象CYP1A2*1F各基因型血清奥氮平浓度比较

3、讨论

精神分裂症是精神类疾病中较为严重的一种，其主要症状为阳性症状(妄想、幻觉、思维障碍、敌意和猜疑)和(或)阴性症状(情感淡漠、情感和社会退缩、言语贫乏)[7,8]。精神分裂症共患抑郁或焦虑的发生率为40%左右[9]，与没有这些共病的患者相比，共病患者的社会功能受损更严重，自杀企图较高，治疗更困难，预后更差[10]。因此，在使用抗精神病药物如奥氮平的同时，小剂量使用选择性5-羟色胺再摄取抑制剂类药物如氟伏沙明，对病情的控制以及预后是有益的[11]。

CYP是一类主要存在于肝脏中的单加氧酶，多位于细胞内质网上，催化多种内、外源物质(包括大多数临床药物)的代谢[12,13]。CYP1A2是奥氮平在体内的主要代谢酶，奥氮平经CYP1A2代谢成2-羟基甲基奥氮平，经肾脏排出[3]。CYP1A2在体内的表达和活性存在非常大的个体差异，据报道，在人类肝脏中CYP1A2蛋白的表达差异有10～200倍[14]。CYP1A2活性受遗传、药物、吸烟、饮食等因素的影响[15]，其中基因多态性可能是造成差异的基础[16]。编码CYP1A2的基因位于15号染色体上，全长7.8kb，包括7个外显子和6个内含子[17]。CYP1A2内含子1转录起始点下游734位点存在单核苷酸C→A(CYP1A2*1F)多态性[18]。本研究中CYP1A2*1F各基因型的分布为CC型占13.85%,CA型占49.23%,AA型占36.92%，和以往研究结果一致[19]。其中，AA型的血清奥氮平浓度显著低于CC型，表明CYP1A2*1F位点的C→A突变，可使CYP1A2酶活性增加，从而降低体内由该酶代谢的药物浓度[20]。

药物联用可能会影响它们在体内的代谢过程[21]，本次研究中，奥氮平与氟伏沙明联用可明显升高血清奥氮平浓度。分析其原因，可能是因为氟伏沙明为CYP1A2的强抑制剂，它使CYP1A2的酶活性降低，对奥氮平的代谢速度减慢，从而血清奥氮平浓度得到提高[22,23]。因此，笔者认为氟伏沙明除具有抗精神分裂症患者的焦虑和抑郁作用外，可增强奥氮平的抗精神病作用，有利于精神分裂症患者的治疗和预后。

但是奥氮平联合氟伏沙明用药时，CYP1A2*1F基因多态性是否仍然影响奥氮平在体内的代谢，目前尚未可知。本研究显示，奥氮平联合氟伏沙明时，突变杂合子CA型与纯合子AA型的血清奥氮平浓度，均比野生CC型低，且AA型的血清奥氮平浓度降低幅度大于CA型，表明奥氮平与氟伏沙明联用，CYP1A2*1F基因多态性仍然影响奥氮平的血清浓度。

综上所述，氟伏沙明与CYP1A2*1F基因多态性均可影响血清奥氮平浓度。氟伏沙明与奥氮平联用时，既要考虑氟伏沙明对CYP1A2酶活性抑制作用而造成血清奥氮平浓度升高，又要考虑CYP1A2基因型对血清奥氮平浓度的影响。血清中长期高浓度的奥氮平可能使不良反应更加明显或加重，例如体质量增加、肥胖以及代谢综合征等。因此，在奥氮平联用氟伏沙明时，有必要在用药前，进行CYP1A2*1F基因型的测定，根据患者的基因型，调整奥氮平剂量，在达到治疗目的的同时，最大程度地减少不良反应。

参考文献：

[1]李静,袁捷,周雪丽,等.住院精神分裂症患者并发非酒精性脂肪肝的危险因素分析[J].肝脏,2017,22(12):1155-1157.

[14]辛勤.CPY1A2基因多态性对药物代谢的影响[J].国际检验医学杂志,2013,34(24):3378-3380.

[18]温全胜,张传福,卢文芬,等.精神分裂症患者奥氮平治疗的剂量､血药浓度及临床效应之间的关系研究[J].北方药学,2015,12(2):103-104.

[23]钟薇.氟伏沙明对奥氮平治疗精神分裂症的疗效和血药浓度的影响[J].四川精神卫生,2005,18(3):168-169.

张冬阳,宋明芬,闫盼,李静,汪程鹏,王晟东,汤剑平,张丽娜,唐文新,盘圣明,夏泳,谭忠林,施剑飞,朱婉儿.氟伏沙明和CYP1A2~*1F基因多态性对血清奥氮平浓度的影响[J].中国现代应用药学,2020,37(05):591-594.

基金:浙江省科技厅重大科技专项重大社会发展项目(2015C03054)