麦冬(Ophiopogon japonicus (L.f) Ker-Gawl.)为百合科多年生草本植物，以干燥块根入药[1],化学成分包括甾体皂苷类[2]、高异黄酮类[3]、多糖类[4]、挥发油类[5]等。药材按产地不同，分为川麦冬、浙麦冬。其中浙江是我国麦冬药材传统产地，集中栽培于慈溪、余姚、萧山等浙东南杭州湾一带，生长周期较长(2～3年),近年栽培面积和产量急剧减少。四川为麦冬主产地之一，商品称之为川麦冬，亦是目前生产规模最大，市场占有率最高的品种，栽培于涪江流域的绵阳、三台等县，由于川麦冬栽培期仅为1年，具有生长期短、产量高的特点，逐渐成为我国最大的麦冬产地。浙麦冬与川麦冬由于生长环境、栽培方式、采收时间及生长年限等不同，药材外观性状及主要化学成分的结构类型和含量存在较大差异，药理作用特点和作用强度也存在明显不同[6,7]。此外，同科沿阶草属植物湖北麦冬(Liriope spicata(Thunb.)Lour.var. prolifera Y.T.Ma)和短葶山麦冬(Liriope muscari(Decne.)Baily)的干燥根为山麦冬药材，因药材性状与麦冬有较高相似性，常被混入麦冬中销售。

目前，对不同产地麦冬及不同基原山麦冬的鉴别研究，多采用性状[6]、薄层鉴别[8]及指纹图谱[9]研究，但性状鉴定需鉴定者具备一定的理论基础和实践经验，推广难度大，且制剂后无法运用性状进行鉴定；指纹图谱鉴别未将不同产地麦冬和不同基原山麦冬同时进行区分。因此，建立一种全面、快速、客观评价内在质量的方法，从而对不同产地麦冬及其近似品山麦冬药材进行鉴别，为麦冬药材质量控制提供理论依据。

1、仪器与材料

1.1 仪器

Thermo Vanquish 超高效液相色谱仪；Thermo Vanquish电雾式检测器(CAD);Agilent Technologies 1290 Infinity超高效液相色谱仪；METTLER TOLEDO XP6百万分之一天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司);KQ-250E超声清洗机(昆山超声仪器有限公司);TGL-16C型离心机(上海安亭科学仪器厂);乙腈(色谱纯，Thermo Fisher公司);磷酸(色谱纯，上海阿拉丁生化科技股份有限公司);Milli-Q超纯水系统(Millipore公司);其他试剂均为分析纯。

1.2 材料

重楼皂苷Ⅵ对照品购自中国食品药品检定研究院(批号：111592-201604);麦冬龙脑苷对照品、麦冬皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷对照品购自上海诗丹德生物技术服务有限公司(批号：9189、6628);麦冬皂苷C对照品购自上海源叶生物技术有限公司(批号：B20830);麦冬皂苷D对照品购自成都普思生物科技股份有限公司(批号：PS01107)。麦冬对照药材购自中国食品药品检定研究院(批号：121013-201711)。

川麦冬药材购于四川，浙麦冬购于浙江，经鉴定均为百合科植物麦冬Ophiopogon japonicus (L.f)Ker-Gawl.的干燥块根；湖北麦冬药材购于山东、湖北等地，经鉴定为百合科沿阶草属植物湖北麦冬Liriope spicata(Thunb.)Lour.var.prolifera Y.T.Ma的干燥块根；短葶山麦冬药材购于福建，经鉴定为百合科沿阶草属植物短葶山麦冬Liriope muscari(Decne.)Baily的干燥块根，所有样品均由江阴天江药业有限公司陈盛君主任中药师鉴定，样品存放于江阴天江药业有限公司。具体样品信息见表1。

2、方法与结果

2.1 色谱条件

采用ACQUITY UPLC BEH Shield RP18(Waters, 2.1 mm×150 mm, 1.7μm)色谱柱；以乙腈为流动相A,以0.08%甲酸溶液为流动相B进行梯度洗脱(0～4 min, 23%→26% A;4～7 min, 26%→33% A;7～15 min, 33% A;15～16 min, 33%→37% A;16～19 min, 37% A;19～29 min, 37%→49% A;29～36 min, 49% A),流速为0.30 mL/min,柱温为40℃,用电雾式检测器检测，进样量10μL。

2.2 供试品溶液的制备

取本品粉末约5.0 g,精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL,密塞，称定质量，超声处理(功率250 W,频率40 kHz)60 min,放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，滤过，滤液蒸干，残渣加水25 mL使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次25 mL,合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次5 mL,弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加30%甲醇使溶解，转移至2 mL量瓶中，加30%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 参照物溶液的制备

取麦冬龙脑苷对照品适量，精密称定，加30%甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液，摇匀，即得。再取麦冬皂苷C对照品、麦冬皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷对照品、重楼皂苷Ⅵ对照品、麦冬皂苷D对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液，摇匀，即得。

2.4 方法学考察

2.4.1 精密度试验

精密称定样品川麦冬(S1)和浙麦冬(S17),按 “2.1.2”项下方法制备供试品溶液。按 “2.1.1”项下色谱条件连续进样6次，每次10μL,以麦冬皂苷C参照物相应的峰4为S峰，计算峰2、峰3、峰6、峰7、峰9与S峰的相对保留时间和相对峰面积。各特征峰的相对保留时间RSD均小于1%,相对峰面积的RSD均小于3%,表明仪器精密度良好。

表1麦冬及山麦冬药材样品信息

2.4.2 重复性试验

精密称定样品川麦冬(S1)和浙麦冬(S17),按 “2.1.2”项下方法平行制备6份供试品溶液，分别进样10μL,以麦冬皂苷C参照物相应的峰4为S峰，计算峰2、峰3、峰6、峰7、峰9与S峰的相对保留时间和相对峰面积。结果各特征峰的相对保留时间RSD均小于1%,相对峰面积的RSD均小于2%,表明仪器重复性良好。

2.4.3 稳定性试验

精密称定样品川麦冬(S1)和浙麦冬(S17),按 “2.1.2”项下方法制备供试品溶液，每隔4 h进样一次，每次进样10μL,共测定24 h,以麦冬皂苷C参照物相应的峰4为S峰，计算峰2、峰3、峰6、峰7、峰9与S峰的相对保留时间和相对峰面积。结果各特征峰的相对保留时间及相对峰面积的RSD均小于2%,表明24 h内样品稳定性良好。

2.4.4 中间精密度试验

精密称定样品川麦冬(S1)和浙麦冬(S17),分别由两个实验员按 “2.1.2”项下方法各制备3份供试品溶液，分别于不同时间、在不同仪器上(Waters UPLC和Agilent 1290)分别进样10μL,以麦冬皂苷C参照物相应的峰4为S峰，计算峰2、峰3、峰6、峰7、峰9与S峰的相对保留时间和相对峰面积。结果各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD值均小于1%,表明中间精密度良好。

2.4.5 特征图谱建立

按 “2.1.2”项下方法分别制备16批川麦冬、19批浙麦冬供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。采用国家药典委员会推荐的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)”对川麦冬色谱进行结果分析，以样品S1的特征图谱为参照，对16批川麦冬和19批浙麦冬分别进行多点校正和峰匹配，川麦冬共标定10个共有峰，见图1。通过质谱指认及对照品确认，指认了其中5个，见图2,确定峰1为麦冬龙脑苷、峰4为麦冬皂苷C、峰5为麦冬皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-( 1→2) -β-D-吡喃葡萄糖苷、峰8为重楼皂苷Ⅵ、峰10为麦冬皂苷D。浙麦冬共标定10个共有峰，见图3。通过质谱指认及对照品确认，指认了其中2个，见图4。确定峰2(S1)为麦冬龙脑苷、峰7(S2)为麦冬皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-( 1→2) -β-D-吡喃葡萄糖苷。

2.4.6 特征图谱的应用

将川麦冬、浙麦冬及短葶山麦冬、湖北麦冬药材特征图谱导入国家药典委员会推荐的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)”分别生成对照特征图谱，再以川麦冬对照图谱为对照，将其与浙麦冬、短葶山麦冬、湖北麦冬对照特征图谱导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)”进行对比分析。

图1 16批川麦冬药材特征图谱  

图2对照品溶液色谱  

图3 19批浙麦冬药材特征图谱  

图4对照品溶液色谱  

结果表明，不同产地麦冬(川麦冬、浙麦冬)及不同基原山麦冬的特征图谱存在以下区别，并可通过差异的色谱峰进行样品鉴别，见图4。①若被检测的样品在麦冬龙脑苷对照品相应保留时间无色谱峰或色谱峰峰面积低于上述对照品的峰面积，在麦冬皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷对照品相应保留时间无色谱峰或色谱峰峰面积低于上述对照品的峰面积，则被检测样品为湖北麦冬；②若被检测的样品在麦冬龙脑苷对照品相应保留时间存在色谱峰，在麦冬皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷对照品相应保留时间无色谱峰或色谱峰峰面积低于上述对照品的峰面积，则被检测样品为短葶山麦冬；③若被检测的样品在麦冬龙脑苷对照品相应保留时间存在色谱峰，在麦冬皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷对照品相应保留时间存在色谱峰，在麦冬皂苷D对照品相应保留时间无色谱峰或色谱峰峰面积低于上述对照品的峰面积，则被检测样品为浙麦冬；④若被检测的样品在麦冬龙脑苷对照品相应保留时间存在色谱峰，在麦冬皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷对照品相应保留时间存在色谱峰，在麦冬皂苷D对照品相应保留时间存在色谱峰，则被检测样品为川麦冬。

图5不同产地麦冬及不同基原山麦冬特征图谱对比  

3、讨论

本研究以麦冬中主要活性成分为目标，为区分不同产地麦冬、不同基原山麦冬的化学成分差异，建立UPLC-CAD麦冬综合质量评价的特征图谱方法。以川麦冬为参照，浙麦冬中有2个共有峰，分别为1号峰麦冬龙脑苷和5号峰麦冬皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-( 1→2) -β-D-吡喃葡萄糖苷，其他共有峰相对较小，暂未定为特征峰，可见川麦冬和浙麦冬虽来源于同一基原植物，但由于其生长环境和种植管理过程不同，导致二者化学成分存在较大差异。川麦冬和浙麦冬除生长年限不同外，采收时间也不一致，结合本草记载及现代对麦冬采收期的研究，2020年版《中华人民共和国药典》规定“夏季采挖”,应为浙麦冬的采收期。《中华本草》等现代著作已分别记载，即“浙江于栽后第三年的小满到夏至采挖，四川在栽后第二年的清明至谷雨季节就可采收”,与实际采收时间更为相符，且川麦冬由于生长环境的特殊性，夏季高温高湿易导致块根腐烂，无法继续生长，因此，川麦冬均为1年采收。研究发现，川麦冬和浙麦冬的薄层色谱图也存在差异，但中国食品药品检定研究院对照药材既有川麦冬也有浙麦冬，且并未注明产地，给样品检验和结果判定带来一定的困扰。因此，建议将川麦冬和浙麦冬的质量标准分别建立，表征各自的专属性成分。目前，国家药典委员会“关于中药配方颗粒国家药品标准(2022年第一期)的公示”中已将麦冬(川麦冬)配方颗粒和麦冬(浙麦冬)配方颗粒分为两个标准[10],也是基于二者物质基础及临床习用的不同。

目前国内市场麦冬类药材有麦冬和山麦冬，主流商品为川麦冬和湖北麦冬，浙麦冬因栽种周期长，成本高，减产严重，短葶山麦冬产量也较少。2020年版《中华人民共和国药典》规定麦冬和山麦冬为不同的药材，应区别使用。山麦冬因价格较低，市场为追逐利润,常有将山麦冬当作麦冬售卖的现象[11],造成不规范用药,甚至影响临床疗效。本研究建立的特征图谱,以川麦冬为参照,短葶山麦冬中有样2个共有峰,分别为1号峰麦冬龙脑苷和9号峰;同以川麦冬为参照,湖北麦冬中有一个共有峰,为9号峰。因此,川麦冬、浙麦冬及湖北麦冬和短葶山麦冬的特征图谱差异较大,通过5号峰麦冬皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D吡喃葡萄糖苷可区分麦冬和山麦冬药材;10号峰麦冬-皂苷D可区分浙麦冬和川麦冬药材,这与余建平等[12]的研究结果一致;1号峰麦冬龙脑苷可区分湖北麦冬和短葶山麦冬药材。本研究采用超高效液相浙-电雾式检测器(麦冬的特征图谱UPLC-CAD)法建立了川麦冬与,该方法专属性强,重复性好,且能够同时鉴别不同产地麦冬(川麦冬、浙麦冬)和近似品山麦冬(湖北麦冬、短葶山麦冬)。

4、结论

本研究采用UPLC-CAD法测定川麦冬和浙麦冬药材的特征图谱,测定方法符合方法学要求,结果准确可靠。通过建立的特征图谱可将川麦冬、浙麦冬及湖北麦冬、短葶山麦冬进行有效区分,为不同产地麦冬及不同基原山麦冬的鉴别和质量控制提供理论依据。同时,研究发现,川麦冬和浙麦冬外观性状及化学成分等均存在较大差异,为确保麦冬药材标准的科学性、合理性和适用性,建议冬20标25年版《中华人民共和国药典》中川麦冬和浙麦准根据其专属性成分分别建立其标准。

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基金资助:江苏省科技成果转化专项资金(BA2021018);

文章来源:周海琴,海丰,胡剑虹等.基于UPLC-CAD的不同产地麦冬及不同基原山麦冬药材鉴别研究[J].亚太传统医药,2024,20(02):24-28.