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活动性肺结核患者血清miR-708、miR-99a水平及临床意义

2025-02-17 93 上传者：管理员

摘要：目的探讨活动性肺结核（APTB）患者血清微小核糖核酸-708（miR-708）、微小核糖核酸-99a（miR-99a）水平及临床意义。方法选取2020年6月至2021年6月该院收治的APTB患者94例作为APTB组，另选取同期于该院体检中心进行体检的健康志愿者94例作为对照组。根据APTB患者病情严重程度分为轻度组、中度组、重度组。根据预后结果分为预后不良组、预后良好组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-708、miR-99a的相对表达量。采用Spearman相关分析miR-708、miR-99a水平与疾病严重程度的关系。绘制受试者工作特征（ROC）曲线分析血清miR-708、miR-99a单独及联合检测对APTB预后的评估价值。结果 APTB组血清miR-708、miR-99a水平均低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。重度组纳入31例，中度组纳入30例，轻度组纳入33例。轻度组血清miR-708、miR-99a水平均高于中度组与重度组，且中度组血清miR-708、miR-99a水平均高于重度组，差异均有统计学意义（P<0.05）。Spearman相关分析结果显示，miR-708、miR-99a水平与疾病严重程度均呈负相关（rs=-0.687,P<0.05;rs=-0.523,P<0.05）。预后良好组纳入60例，预后不良组纳入34例。预后不良组血清miR-708、miR-99a水平均明显低于预后良好组，差异均有统计学意义（P<0.05）。ROC曲线分析结果显示，血清miR-708对APTB预后评估的曲线下面积（AUC）为0.883,血清miR-99a对APTB预后评估的AUC为0.909,二者联合检测的AUC为0.957,与miR-708、miR-99a单独检测比较，二者联合检测的AUC更大（Z=6.601、10.832,P<0.001）。结论 APTB患者血清miR-708、miR-99a水平降低，二者与APTB患者病情严重程度及预后有关，可以作为APTB预后评估的辅助生物学标志物。

关键词：
APTB
传染病
微小核糖核酸-708
微小核糖核酸-99a
活动性肺结核
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活动性肺结核(APTB)是全球最常见的传染病之一,巨噬细胞是宿主对抗结核病的主要防御机制参与者[1]｡在感染者无法控制初始肺部感染或免疫系统减弱的情况下,结核分枝杆菌可能导致肺结核或肺外结核[2]｡但只有10%的感染者表现出APTB,这表明宿主免疫防御和遗传因素在防止结核分枝杆菌感染中具有重要作用[3]｡APTB有一定传染性,严重威胁患者的生命健康[4]｡APTB的发病机制较复杂,目前研究认为APTB的发生与免疫系统功能失调相关｡因此,寻找与APTB相关的观测指标对于患者病情及预后评估有重要价值｡微小核糖核酸(miRNA)是小的非编码RNA,其在转录､RNA加工和翻译过程中调节靶基因表达,进而在细胞免疫中发挥重要作用[5]｡有研究表明,一些miRNA与调节巨噬细胞对细菌病原体的免疫反应有关,miR-708参与调节多种生理过程,在APTB患者血清中miR-708高表达能够诱导单核巨噬细胞的凋亡,从而减少肺部炎症及结核分枝杆菌的扩散过程[6]｡miR-708在类风湿关节炎患者滑膜组织中呈低表达,能够抑制细胞的增殖及诱导细胞凋亡[7]｡miR-99a作为多种癌症中众所周知的肿瘤抑制因子,已被证明可影响巨噬细胞的M1表型极化,并参与脂肪组织炎症调节[8]｡miR-99a水平在急性呼吸窘迫综合征患者血清中下调,其能够预测急性呼吸窘迫综合征的发生[9]｡但目前有关miR-708､miR-99a在APTB患者预后方面的研究较少见｡基于此,本研究探讨了miR-708､miR-99a在APTB患者血清中的变化情况,旨在为APTB诊治提供理论依据｡

1、资料与方法

1.1一般资料选取2020年6月至2021年6月本院收治的APTB患者94例作为APTB组,其中男52例,女42例;年龄54~71岁,平均(62.10±6.42)岁;平均体质量指数(BMI)为(22.10±2.30)kg/m2;有饮酒史20例;有吸烟史40例｡另选取同期于本院体检中心进行体检的健康志愿者94例作为对照组,其中男54例,女40例,年龄55~70岁,平均(62.11±6.30)岁;平均BMI为(22.13±2.28)kg/m2;有饮酒史18例;有吸烟史42例｡两组性别､年龄､BMI､饮酒史､吸烟史等一般资料比较,差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性｡根据APTB患者严重程度[10],将APTB组分为轻度组(肺部病灶数量3个),中度组(肺部病灶数量3~5个),重度组(肺部病灶数量为5~6个)｡纳入标准:(1)APTB患者符合《肺结核诊断和治疗指南》[11]中有关APTB的诊断标准;(2)经过胸部CT检查确诊为APTB;(3)初次患病｡排除标准:(1)合并其他慢性疾病的患者;(2)合并其他部位结核疾病的患者;(3)精神异常无法进行正常交流的患者;(4)伴恶性肿瘤患者;(5)合并免疫性疾病的患者;(6)其他呼吸性疾病的患者｡所有研究对象及其亲属均知情同意本研究并签署知情同意书｡本研究通过本院医学伦理委员会审核批准(院字2020-0416)｡

1.2方法

1.2.1血液标本采集收集所有APTB患者入院次日清晨和健康志愿者体检当天空腹静脉血5mL,以4000r/m的速度离心15min,离心半径为10cm,取上清液,置于—80℃冰箱中保存待用｡

1.2.2实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血清miR-708､miR-99a的相对表达量取血清样本,加入1mLTrizol试剂(美国Invitrogen公司)提取总RNA,使用反转录试剂盒(含gDNA去除,诺唯赞生物科技有限公司)反转录为cDNA,采用qRT-PCR对miR-708､miR-99a进行扩增,使用2×HieffⓇRobustPCRMasterMix(翌圣生物科技股份有限公司)进行qRT-PCR｡20μL反应体系:cDNA1μL,上下引物(10pmol/μL)各1μL,2×HieffⓇRobustPCRMasterMix10μL,ddH2O7μL｡反应条件为:95℃10s;95℃5s,58℃20s,72℃20s,45个循环｡所有操作均严格按照试剂盒说明书进行｡所有引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成,引物序列见表1｡采用2-ΔΔCt法分析miR-708､miR-99a的表达水平｡

表1引物序列

1.2.3预后经过2个月强化治疗以及4个月巩固治疗后,对患者进行门诊复诊,进行痰涂片检测,痰涂片为阳性且APTB症状未好转即为预后不良组;痰涂片为阴性且APTB症状消失即为预后良好组｡

1.3统计学处理采用SPSS25.0统计软件进行数据处理与统计分析｡符合正态分布的计量资料以x±s表示,两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,多组间进一步两两比较采用SNK-q检验｡计数资料以例数或百分率表示,组间比较采用χ2检验｡采用Spearman相关分析miR708､miR-99a水平与疾病严重程度的关系｡绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-708､miR-99a单独及联合检测对APTB预后的评估价值,检验水准取α=0.05｡以P<0.05为差异有统计学意义｡

2、结果

2.1APTB组､对照组血清miR-708､miR-99a水平比较APTB组血清miR-708､miR-99a水平均低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)｡见表2｡

表2APTB组､对照组miR-708､miR-99a水平比较

2.2轻度组､中度组､重度组血清miR-708､miR-99a水平比较重度组纳入31例,中度组纳入30例,轻度组纳入33例｡轻度组血清miR-708､miR-99a水平均高于中度组和重度组,且中度组血清miR-708､miR-99a水平均高于重度组,差异均有统计学意义(P<0.05)｡见表3｡

2.3miR-708､miR-99a水平与疾病严重程度的相关性Spearman相关性分析结果显示,miR-708､miR99a水平与疾病严重程度均呈负相关(rs=—0.687,P<0.05)｡

表3轻度组､中度组､重度组血清miR-708､miR-99a水平比较

2.4预后良好组与预后不良组血清miR-708､miR99a水平比较预后良好组纳入60例,预后不良组纳入34例｡预后不良组血清miR-708､miR-99a水平均明显低于预后良好组,差异均有统计学意义(P<0.05)｡见表4｡

表4不同预后患者血清miR-708､miR-99a水平比较

2.5血清miR-708､miR-99a单独及联合检测对APTB预后的评估价值以APTB预后是否良好为状态变量(1=预后不良,0=预后良好),以miR-708､miR-99a水平为检验变量进行ROC曲线分析,结果显示,血清miR-708对APTB预后评估的曲线下面积(AUC)为0.883,灵敏度为84.30%,特异度为91.70%,血清miR-99a对APTB预后评估的AUC为0.909,灵敏度为85.30%,特异度为88.30%;二者联合检测的AUC为0.957,灵敏度为94.10%,特异度为88.30%,与miR-708､miR-99a单独检测比较,二者联合检测的AUC更大(Z=6.601､10.832,P<0.001)｡见表5

表5血清miR-708､miR-99a单独及联合检测对APTB预后的评估价值

3、讨论

APTB属于迟发型免疫性疾病,机体内结核分枝杆菌感染能够特异性地激活免疫细胞,产生大量炎症因子[12]｡由于APTB病灶处于活动期,能够使机体释放大量的结核分枝杆菌,病毒活性较强,有严重传染性,且威胁APTB患者的生命健康[13]｡因此,寻找与APTB有关的无创生物学指标,对于患者病情及预后评估有重要的价值｡

miR-708是一种与免疫性疾病有关的因子[14]｡miR-708能够通过靶向核胞浆转运蛋白α-4(KPNA4)调节炎症因子表达,从而影响巨噬细胞的生成[15]｡miR-708可通过靶向调控IkB激酶β(IKKβ)通路,强烈抑制炎症反应[16]｡本研究结果显示,APTB组血清miR-708水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)｡miR-708参与APTB的发生过程,推测其可能通过影响炎症反应从而参加APTB的发生,与既往研究结果类似[16]｡轻度组血清miR-708水平高于中度组,且中度组血清miR-708水平高于重度组,差异均有统计学意义(P

MiR-99a是一种与癌症､局灶性脑缺血再灌注损伤等疾病相关的miRNA,可干扰细胞增殖､凋亡和炎症过程[8]｡有研究表明细菌脂多糖,一种广为人知的促炎性细胞因子,抑制miR-99a的表达[18]｡已被证明miR-99a可以抑制巨噬细胞的M1表型极化,并参与脂肪组织炎症和胰岛素敏感性的调节,尽管miR-99a在自身免疫性疾病中的潜在作用尚不清楚,但miR99a在自身免疫性疾病类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮的炎症性病变中表达降低[19]｡miR-99a在体外促进调节性T淋巴细胞分化[20]｡本研究结果显示,APTB组血清miR-99a水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)｡Spearman相关分析结果显示,miR-99a水平与疾病严重程度均呈负相关(rs=—0.523,P<0.05)｡进一步提示miR-99a能够成为监控APTB病情严重程度的生物学指标｡预后不良组血清miR-99a水平明显低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)｡表明miR-99a影响APTB患者预后,其能够成为预后相关的标志物｡

本研究进一步通过ROC曲线分析结果显示,miR-708､miR-99a联合对APTB预后评估的AUC显著高于二者单独检测,表明联合检测更有利于提高APTB的预后评估效能,二者可作为APTB预后评估的辅助生物标志物且联合检测能弥补单一指标的不足｡

综上所述,APTB患者血清中miR-708､miR-99a水平降低,二者与APTB患者病情严重程度以及预后状况有关,可以作为APTB预后评估的生物学标志物,有较高的预测价值｡但本次研究的样本量有限,后期将扩大样本量深入探究APTB的有关机制｡

参考文献:

[1]肖朗,刘慧敏,胡清亮.活动性肺结核患者巨噬细胞相关细胞因子与外周血单个核细胞中沉默信息调节因子1和叉头框蛋白O3水平的相关性[J].中国热带医学,2022,22(12):1179-1183.

[2]肖筱,陈静,饶立歆,等.大学生肺结核患者密切接触者结核分枝杆菌潜伏感染检测方法研究[J].结核病与肺部健康杂志,2021,2(4):311-316.

[3]胡晓光,陈灿灿,张亚男,等.机体抗结核分枝杆菌感染的主要免疫细胞及其作用机制[J].结核病与肺部健康杂志,2020,1(2):71-77.

[4]刘懿,谢炎红,郑如添,等.T2DM伴活动性肺结核患者肺部感染的病原学特征及CD64､S100A9检测的诊断价值[J].中国病原生物学杂志,2022,17(2):229-232.

[5]贾丹,曹伟丽,黄立娟.microRNA调节血管平滑肌细胞在动脉粥样硬化中的作用[J].国际免疫学杂志,2023,46(3):341-345.

[7]范文强,马玲,吴洁,等.miR-708-5p对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡､炎症因子分泌和TLR4/NF-κB信号通路的影响[J].郑州大学学报(医学版),2020,55(5):705710.

[8]张玮,陈罗泉,叶治国,等.miR-99a对乳腺癌细胞侵袭和迁移的负向调控机制研究[J].浙江医学,2016,38(5):317-321.

[10]张秀军,陶晓东,孙金军.血小板/淋巴细胞比值与肺结核病情严重程度的相关性研究[J].中国卫生检验杂志,2021,31(6):708-710.

[11]中华医学会结核病学分会.肺结核诊断和治疗指南[J].中国实用乡村医生杂志,2013,20(2):7-11.