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血浆miR-125a-3p、miR-140-5p在子宫内膜异位症患者中的水平变化及临床意义

2020-06-29 365 上传者：管理员

摘要：目的探讨子宫内膜异位症患者血浆微小RNA-125a-3p(miR-125a-3p)、微小RNA-140-5p(miR-140-5p)的水平变化及临床意义。方法选取该院收治的60例子宫内膜异位症患者作为研究组,选取同期体检健康女性50例作为对照组。比较两组miR-125a-3p、miR-140-5p、糖类抗原125(CA125)、血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;采用Pearson相关分析探讨研究组miR-125a-3p、miR-140-5p水平与CA125、VEGF、TNF-α、IL-1β水平的相关性;采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析各指标对子宫内膜异位症的诊断价值。结果研究组miR-125a-3p、miR-140-5p、VEGF、CA125、TNF-α、IL-1β水平均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-125a-3p、miR-140-5p水平与VEGF、CA125、TNF-α、IL-1β水平均呈正相关(P<0.05),miR-125a-3p水平与miR-140-5p水平呈正相关(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,miR-125a-3p诊断子宫内膜异位症的曲线下面积(AUC)为0.862,灵敏度为86.7%,特异度为78.0%;miR-140-5p诊断子宫内膜异位症的AUC为0.759,灵敏度为71.7%,特异度为72.0%。结论子宫内膜异位症患者存在血浆miR-125a-3p、miR-140-5p高表达,对子宫内膜异位症具有一定的诊断价值。

关键词：
妇科疾病
子宫内膜异位症
微小RNA-125a-3p
微小RNA-140-5p
诊断价值
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子宫内膜异位症是指有活性的内膜组织（腺体和间质）种植在子宫内膜以外的位置而导致的一种女性常见妇科疾病[1,2]。目前，该病的发病机制有多种学说，其中被普遍认可的是子宫内膜种植学说[3,4]，但其具体机制仍在不断研究中。微小RNA(miRNA）是一类序列具有高度保守性的非编码单链RNA，其长度一般为18～30个核苷酸，主要通过作用于靶基因3′端非编码区来抑制mRNA的翻译或导致mRNA降解，通过调节细胞增殖、分化、凋亡、迁移、信号转导等重要的生物学活动来参与多种疾病的病理、生理过程[5,6]。已有研究发现，多种miRNA与子宫内膜异位症的发生、发展密切相关[7,8,9]。但微小RNA-125a-3p(miR-125a-3p）与微小RNA-140-5p(miR-140-5p）是否与子宫内膜异位症相关目前尚不明确。本研究通过检测子宫内膜异位症患者血浆miR-125a-3p与miR-140-5p的表达水平，探讨其与子宫内膜异位症的关系，以期为临床诊断、治疗提供参考。

1、资料与方法

1.1一般资料

选取2016年11月至2018年11月本院妇科门诊收治的60例子宫内膜异位症患者为研究组，年龄21～45岁，平均（34.61±6.92）岁；体质量52～65kg，平均（58.43±6.49)kg。另选取同期体检健康女性50例为对照组，年龄22～46岁，平均（35.29±7.06）岁；体质量51～63kg，平均（57.23±6.35)kg。纳入标准：（1）研究组患者均经临床病理、影像学检查确诊为子宫内膜异位症；（2）月经周期正常者；（3）患者及家属同意加入本研究，并签署知情同意书。排除标准：（1）近期服用过激素类药物者；（2）伴有严重器质性疾病者；（3）合并其他妇科疾病者。两组年龄、体质量等一般资料比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。本研究经本院伦理委员会批准。

1.2仪器与试剂

miRNA提取试剂盒购自北京全式金生物技术有限公司；miRNA反转录试剂盒、miR-NA实时荧光定量PCR(qRT-PCR）试剂盒购自哈尔滨海基生物科技有限公司；miR-125a-3p、miR-140-5p、U6（内参）引物购自上海生工生物工程有限公司；糖类抗原125(CA125）、血管内皮生长因子（VEGF）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）ELISA试剂盒均购自上海碧云天生物技术有限公司；DNA扩增仪（型号：Bio-RadS1000）购自伯乐生命医学产品（上海）有限公司，qRT-PCR仪（型号：ABI7500）购自北京欣兴强森生物科技有限公司；全自动生化分析仪（型号：PUZS-300）购自北京佳康时代医疗器械有限公司；酶标仪（型号：CN61M/GF-M2000）购自上海迪奥生物科技有限公司。

1.3方法

1.3.1标本采集

所有研究对象均于清晨空腹采集静脉血5mL，置于含乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）或柠檬酸钠抗凝剂的聚乙烯试管中，在常温3000r/min离心15min，吸取上层血浆并分装于无菌EP管中，于-80℃冰箱保存待测。

1.3.2miR-125a-3p、miR-140-5p水平检测

按照miRNA试剂盒说明书提取miRNA，反转录及qRT-PCR操作步骤具体如下。反转录体系共20μL:miR-NA(100ng/μL)6μL,4×OnestepmiRNARTSolution5μL,10×miRNARTPrimer2μL,RNaseFreeH2O7μL。反应条件：37℃60min,95℃5min。以cDNA为模板，采用qRT-PCR仪对miRNA进行扩增。qRT-PCR反应体系共20μL:5×GoldenHSSYBRGreenqPCRMix4μL，正向引物（10μmol/L)0.5μL，反向引物（10μmol/L)0.5μL,cDNA2μL,ddH2O13μL。反应条件分为两步：第一步95℃15min；第二步95℃5s,60℃30s,30个循环。采用2-ΔΔCt对miR-125a-3p、miR-140-5p相对表达水平进行定量分析。qRT-PCR引物序列见表1。

表1qRT-PCR引物序列

1.3.3CA125、VEGF、TNF-α、IL-1β水平检测

采用ELISA检测CA125、VEGF、TNF-α、IL-1β水平，操作过程严格按照试剂盒说明书进行。

1.4统计学处理

采用SPSS23.0软件进行数据分析。计数资料以例数或百分率表示，组间比较采用χ2检验；正态分布的计量资料以±s表示，两组间比较采用t检验；相关性采用Pearson相关分析；采用受试者工作特征曲线（ROC曲线）评价miR-125a-3p、miR-140-5p、CA125、VEGF、TNF-α和IL-1β对子宫内膜异位症的诊断价值。以P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1两组各指标水平比较

研究组miR-125a-3p、miR-140-5p、VEGF、CA125、TNF-α、IL-1β水平均明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

表2两组各指标水平比较

2.2研究组miR-125a-3p、miR-140-5p与CA125、VEGF、TNF-α、IL-1β的相关性

Pearson相关分析结果显示，miR-125a-3p水平与miR-140-5p水平呈正相关（P<0.05）。miR-125a-3p、miR-140-5p水平与VEGF、CA125、TNF-α、IL-1β水平均呈正相关（P<0.05）。见表3。

表3研究组miR-125a-3p、miR-140-5p与CA125、VEGF、TNF-α、IL-1β的相关性（r)

2.3各指标对子宫内膜异位症的诊断价值

ROC曲线分析结果显示，CA125诊断子宫内膜异位症的曲线下面积（AUC）最大，为0.898，灵敏度为80.0%，特异度为94.0%。其次为miR-125a-3p，其AUC为0.862，灵敏度为86.7%，特异度为78.0%。miR-140-5p的AUC为0.759，灵敏度为71.7%，特异度为72.0%。见图2、表4。

表4各指标对子宫内膜异位症的诊断价值

图2各指标诊断子宫内膜异位症的ROC曲线

3、讨论

子宫内膜异位症发病原因至今尚不明确，目前被广泛接受的理论学说是异位种植学说。该学说认为子宫内膜异位症是由于子宫内膜碎片随经血逆流，通过输卵管进入盆腔而种植于卵巢或盆腔其他部位所导致的[3,4,10]。腹腔镜下病灶直视及病理检查是目前临床诊断子宫内膜异位症的“金标准”，但其均为有创性检查，对患者造成的创伤较大[8]。CA125属于糖蛋白，来源于胚胎体腔上皮，多见于子宫内膜异位症患者血清中，具有较高的灵敏度，为临床诊断常用指标[11,12]。VEGF作为一种糖基化细胞分裂素，表达于子宫内膜细胞，在子宫内膜异位症发生、发展过程中发挥着重要作用。TNF-α是由巨噬细胞产生的关键炎症因子，可参与炎性反应、细胞分化及免疫调节等。IL-1β同样在炎症进展、免疫调节等方面发挥重要作用，与疾病引起的急性炎性反应存在密切联系。上述指标均对子宫内膜异位症具有一定的辅助诊断作用，但诊断的特异度低，效果不理想[13]。因此，近年来关于寻找子宫内膜异位症特异性诊断标志物的研究成为热点。

miRNA是近年来发现的具有调控基因表达功能的RNA，可稳定存在于血清、血浆、尿液等体液中[5,6]。目前已知有2000余种miRNA参与调节机体各种疾病的病理、生理过程。miRNA在子宫内膜异位症患者血清中存在差异性表达，可调控子宫内膜异位症细胞外间质形成、血管形成、组织修复、炎症发生等过程[8,14]。纪娜等[15]证实miR-155在异位内膜中高度表达，可能通过调控Bax、Bcl-2、基质金属蛋白酶（MMP)-2、MMP-9的表达水平增强子宫内膜细胞增生、黏附、侵袭的能力。DAI等[16]发现miR-199a在异位内膜中表达水平下调，可作用于HIF-1α/VEGF-A通路，从而提高子宫内膜间质细胞的血管生成潜能。此外，miR-125b-5p、miR-154b-5p、miR-451a、miR-122等多种miRNA均参与子宫内膜异位症的发生、发展[7]。miR-125a-3p、miR-140-5p在肿瘤中也发挥着重要作用。万晓龙等[17]研究发现，miR-125a-3p不仅能够阻碍结肠癌细胞的增殖生长，而且还可以抑制结肠癌细胞的迁移与侵袭，其在结肠癌进展中发挥重要调控作用。丁建花等[18]研究发现，miR-140-5p在肝细胞癌组织中低表达，并且与肝细胞癌的恶性程度密切相关。但miR-125a-3p、miR-140-5p是否参与子宫内膜异位症的发生、发展，以及机制如何，目前尚不清楚。本研究结果显示，子宫内膜异位症患者血浆中miR-125a-3p与miR-140-5p水平均高于对照组（P<0.05），提示miR-125a-3p与miR-140-5p与子宫内膜异位症的发生、发展有关。

进一步研究发现，子宫内膜异位症患者VEGF、CA125、TNF-α、IL-1β水平均高于对照组（P<0.05),miR-125a-3p、miR-140-5p水平与VEGF、CA125、TNF-α、IL-1β水平均呈正相关（P<0.05），提示miR-125a-3p与miR-140-5p可能通过调控VEGF、CA125、TNF-α、IL-1β的水平变化来参与子宫内膜异位症的发病过程。ROC曲线分析结果显示，CA125诊断子宫内膜异位症的价值最高，其次为miR-125a-3p、miR-140-5p，提示miR-125a-3p、miR-140-5p对子宫内膜异位症具有一定的诊断价值，可作为临床辅助诊断指标。

4、结论

综上所述，子宫内膜异位症患者血浆miR-125a-3p、miR-140-5p高表达，对子宫内膜异位症具有一定的诊断价值。后期将继续对miR-125a-3p、miR-140-5p在子宫内膜异位症中发挥作用的具体机制进行研究，进一步探讨其在疾病诊断、治疗、预后评估中的应用价值。

参考文献：

[1]中华医学会妇产科学分会子宫内膜异位症协作组.子宫内膜异位症的诊治指南[J].中华妇产科杂志,2015,50(3):161-169.

[2]庄翡翠.子宫内膜异位症患者盆腔疼痛和病灶特点的相关性研究[J].中国医药科学,2015,5(14):81-83.

[3]周洋,吴玉仙,金志军.子宫内膜异位症发病机制的研究进展[J].国际妇产科学杂志,2017,44(1):103-107.

[4]张若楠,游存厚,姜雯.子宫内膜异位症病因学的研究进展[J].内蒙古医学杂志,2018,50(8):911-912.

[7]李雅洁,高颖.miRNA与子宫内膜异位症的最新研究进展[J].生殖医学杂志,2019,28(4):428-434.

[8]郑玉丹,尹香花.microRNAs在子宫内膜异位症早期诊断中的研究进展[J/CD].实用妇科内分泌杂志(电子版),2018,5(28):11-14.

[10]曹军民,李娟芳,崔宇红,等.子宫内膜异位症痛经发病机制及中西医治疗研究进展[J].亚太传统医药,2018,14(2):117-119.

[11]宋建平.子宫内膜异位症与卵巢癌相关性临床分析[J].现代肿瘤医学,2015,23(10):1432-1434.

[12]银琪,生秀杰.子宫内膜异位症相关卵巢癌病因研究进展[J].国际妇产科学杂志,2016,43(6):681-685.