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早期胚胎发育动力学参数对复苏周期中囊胚移植妊娠结局的影响

2021-10-06 128 上传者：管理员

摘要：目的探讨早期胚胎发育动力学参数对复苏周期中囊胚移植妊娠结局的影响。方法回顾性分析2017年1月-2020年12月该中心复苏周期中单囊胚移植106名妊娠患者（妊娠组）和91名未妊娠患者（未妊娠组）的基本信息和囊胚早期胚胎发育动力学参数。采用二元Logistic回归分析年龄、发育天数及动力学参数中CC2对妊娠结局的影响。结果两组患者FSH、内膜准备方案、优质胚胎占比及移植日子宫内膜厚度比较,差异均无统计学意义（均P>0.05）。妊娠组患者年龄[30.00（28.00～32.75）岁]小于未妊娠组[32.00（29.00～35.00）岁],胚胎发育天数中D5胚胎移植周期占比[D5103例,D63例]高于未妊娠组[D575例,D616例],差异均有统计学意义（Z=-3.382,χ2=12.228,均P<0.05）。对移植囊胚早期胚胎发育动力学参数分析时发现,未妊娠组患者胚胎发育时间（tPNa,tPNf,t2,t3,t4,t5,CC2,S2）逐渐延长,其中CC2差异有统计学意义（P<0.05）,其他差异均无统计学意义（均P>0.05）。二元Logistic回归分析结果显示,年龄、胚胎发育天数及CC2均为妊娠结局的独立影响因素（均P<0.05）。结论年龄、胚胎发育天数及CC2均为妊娠结局的独立影响因素。胚胎第2次卵裂和第1次卵裂的间隔时间的延长预示胚胎种植潜能降低。

关键词：
囊胚种植
复苏周期
早期卵裂
胚胎发育动力学参数
辅助生殖技术
风险
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近年来，辅助生殖技术成功率显著提高。随着妊娠率的升高，多胎率也相应升高，增加了孕产妇和胎儿围生期的风险[1]。目前，单囊胚移植可以维持一定的妊娠率，同时有效降低多胎率[2]。囊胚培养后，根据囊胚形成的时间进行冷冻保存，进行冻胚复苏移植，使囊胚与内膜更具有同步性[3]。目前，选择胚胎的方法，主要以传统形态学评分为主。近年来，延时摄像技术的引入，对胚胎发育的动力学参数，卵裂模式进行分析，以无创的方法评估胚胎。通过延时摄像系统对鲜胚移植周期的胚胎进行分析，建立移植胚胎模型。同时也有研究对胚胎发育的动力学参数分析，对胚胎形成囊胚进行预测。但基于延时摄像技术对胚胎发育动力学分析复苏周期囊胚移植妊娠结局的报道不多。本研究回顾性分析2017年1月-2020年12月本中心在EmbryoScope时差培养箱中培养形成的囊胚冻胚周期移植后，早期胚胎发育动力学参数对囊胚种植的影响。

1、资料与方法

1.1资料来源

回顾性分析本中心2017年1月-2020年12月在EmbryoScope时差培养箱中培养，并在复苏周期单囊胚移植患者的相关资料。纳入标准：①单囊胚移植临床妊娠和未妊娠的患者；②IVF周期。排除标准：①早期卵裂模式为异常，例如1细胞变3细胞，2细胞变5细胞；②ICSI和R-ICSI周期。根据临床妊娠结局分为妊娠组(106例患者)和未妊娠组(91例患者)。

1.2方法

1.2.1胚胎冷冻和复苏

本研究中采用玻璃化冷冻方法进行胚胎冷冻。玻化冷冻液和解冻液购自澳励晶公司(Origio,丹麦),操作过程均按操作说明书进行。囊胚冷冻前使用激光破膜仪皱缩后进行冷冻。解冻2h后，根据囊胚腔重新扩张与否来判定是否存活。

1.2.2内膜准备方案

①降调人工周期内膜准备方案：D1～D2采用B超检查子宫、卵巢、AFC数目及大小等情况，注射长效GnRH-a(生产厂家：益普生法国生物技术公司，注册证号：H20110290,规格：3.75mg/支)3.75mg,28～35d后开始口服戊酸雌二醇(补佳乐，生产厂家：拜耳医药保健有限公司广州分公司，批准文号：国药准字J20171038,规格：1mg×21片)2mg,2次/d,监测内膜1次/(5～7)d,递增2mg/次，至少服用14d后(内膜≥7mm),口服黄体酮(安琪坦，生产厂家：BesinsMaufacturingBelgium,注册证号：H20130336,规格：0.1g×30粒/盒)300mg,2次/d,转化6d后囊胚期胚胎解冻移植。②人工周期内膜准备方案：自月经周期D2～D3口服补佳乐4mg/d,监测内膜1次/(5～7)d,递增2mg/次，至少服用14d后(内膜≥7mm),口服安琪坦300mg,2次/d,转化6d后囊胚期胚胎解冻移植。

1.2.3胚胎发育动力学参数

以授精时间，即加精时间作为起始时间。tPNa表示授精到原核出现的时间；tPNf表示授精到原核消失的时间；t2表示授精到发育至2细胞的时间；t3表示授精到发育至3细胞的时间；t4表示授精到发育至4细胞的时间；t5表示授精到发育至5细胞的时间；CC2=t3-t2,表示2细胞到3细胞的发育时间，反映第1次卵裂与第2次卵裂间隔时间。S2=t4-t3,表示3细胞到4细胞的发育时间，反映第2次细胞分裂的同步性。

1.2.4黄体支持

移植后采用阴道黄体酮凝胶[雪诺酮，生产厂家：英国FleetLaboratoriesLimited,注册证号：H20140552,规格：8%(90mg)×5支]90mg/d,至移植后10～12d,测血β-hCG。移植后4～6周B超观察。

1.2.5临床结局的判定

B超可见孕囊为临床妊娠。

1.3统计学分析

运用SPSS19.0软件包对数据进行统计学分析。对计量资料进行正态性检验，不符合正态分布的数据以中位数和四分位数表示，数据比较采用秩和检验；计数资料以[例(%)]表示，数据比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1患者基本情况

两组患者FSH、内膜准备方案、优质胚胎占比及移植日子宫内膜厚度比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)。妊娠组患者年龄小于未妊娠组，胚胎发育天数中D5胚胎移植周期占比高于未妊娠组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。见表1。

2.2基于胚胎发育动力学参数分析复苏周期囊胚的种植潜能

与未妊娠组囊胚发育动力学参数相比，妊娠组囊胚早期各发育时间均短于未妊娠组，但仅CC2差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

2.3二元Logistic回归分析

基于以上单因素分析筛查出的3个可疑影响因素，进行二元Logistic回归分析。从多因素分析可以得出以下结论：年龄、胚胎发育天数及CC2是复苏周期囊胚移植临床结局的独立影响因素(均P<0.05)。二元Logistic回归分析复苏周期囊胚移植临床结局的影响因素见表3。

3、讨论

对胚胎质量进行正确评估和排序，优先移植潜在的“最佳”胚胎，可缩短受孕时间，同时促进单胚胎移植的实施，从而提高母亲和后代的安全性[4]。选择胚胎的方式主要以形态学评分为主[5]。囊胚培养是一种有效筛选胚胎的方法，但是并不是每个囊胚均能成功种植。有效选择囊胚移植成为新的挑战。非整倍体的植入前遗传学检测(PGT-A)是用于检测胚胎非整倍性的方法[6]。移植整倍体胚胎将有效提高反复种植失败或高龄的患者胚胎种植率[7]。但是此方法对胚胎存在损伤，且由于指征的限制，不能广泛应用。无创选择胚胎的方法便广泛被研究[8],研究主要涉及胚胎培养液中代谢组学、蛋白质组学及基因组学，也有研究运用延时摄像系统对胚胎发育动力学参数和胚胎发育模式进行分析，构建胚胎选择模型，便于快速有效选择胚胎。对于延时摄像系统研究主要集中在鲜胚周期种植胚胎的胚胎动力学参数和胚胎发育卵裂模式的分析，胚胎发育动力学参数对囊胚形成进行预测等[14]。

本研究主要回顾性分析复苏周期移植的囊胚发育动力学参数与妊娠结局的关系。本研究结果显示，从tPNa到t5,未妊娠组的胚胎发育时间逐渐延长，从结果上看发育较快的胚胎更容易种植，但差异无统计学意义。CC2表示第1次卵裂与第2次卵裂间隔时间。卵裂间隔分析中发现，未妊娠组CC2明显长于妊娠组，差异有统计学意义(P<0.05)。Sayed等[15]一项对于鲜胚周期中移植胚胎早期发育动力学参数研究中发现CC2对于胚胎种植具有重要意义，本研究结果与之一致。本研究中发现妊娠组在2细胞时期有多核情况的胚胎种植率为41.67%,相对于没有多核现象的胚胎种植率(55.49%)低，但差异无统计学意义(P>0.05)。表明虽然在2细胞期的胚胎存在多核，但胚胎在后期有自我修复的能力。Orvieto等[16]在研究中发现，胚胎在早期发育的过程中存在嵌合或非整倍体现象，但囊胚期胚胎活检时胚胎为整倍体，再次证明胚胎发育过程中具有自我修复的能力。

基于患者基础信息分析中得出，妊娠组年龄显著低于未妊娠组，在进一步的回归分析中年龄仍为胚胎种植的独立影响因素，与其他研究[17]结果一致。胚胎发育天数统计结果显示，妊娠组D5比例明显高于未妊娠组。在进一步的二元回归模型中胚胎发育天数仍为胚胎种植的独立危险因素，与冼英杰和武龙梅等研究结果一致。但通过PGT-A的检测后，胚胎发育天数对于胚胎种植率的影响差异无统计学意义(P>0.05)。在年龄≥35岁患者中，优质的囊胚并不改善其种植率。

本文的不足之处，首先本文为回顾性分析，未能有效控制患者基本情况，其次本文的样本数较小，不能再将研究结果进行进一步验证或分层分析。本研究对单因素分析中差异有统计学意义的结果进行回归分析后，年龄、发育天数及胚胎动力学参数中CC2仍为复苏周期中单囊胚移植妊娠结局的独立影响因素，回归模型的预测的准确性为67.1%。

综上所述，本研究主要借助胚胎发育动力学为参数，以胚胎种植为终点，对复苏周期中单囊胚移植妊娠结局的影响因素进行分析。女性患者的年龄、胚胎发育天数及CC2对复苏周期中囊胚种植影响较大。在选择囊胚移植时，应尽量选择形成囊胚较早、CC2较短的胚胎进行移植。

文章来源：纪红,何雪梅,梅利斌,邱乒乒,黄娴静,李萍.早期胚胎发育动力学参数对复苏周期中囊胚移植妊娠结局的影响[J].中国妇幼保健,2021,36(19):4499-4502