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Bcl-2和GPER在子宫内膜息肉患者组织中表达及相关性分析

2024-04-26 6 上传者：管理员

摘要：目的分析B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和G蛋白耦联雌激素受体(GPER)在子宫内膜息肉患者组织中的表达及相关性，为临床诊治提供参考。方法选取2010年10月—2012年4月绍兴市妇幼保健院收治的子宫内膜息肉患者30例为研究组，正常子宫内膜的30例患者为对照组。使用免疫组化Envision法检测Bcl-2、GPER阳性率，分析二者的相关性。结果 Bcl-2在研究组和对照组的阳性率分别为66.67%和26.67%,研究组的阳性率高于对照组，差异有统计学意义(χ2=10.545,P<0.05)。Bcl-2在研究组增生期和分泌期的阳性率分别为68.75%和64.29%,差异无统计学意义(P>0.05)。Bcl-2在对照组增生期和分泌期的阳性率分别为43.75%和7.14%,增生期的阳性率高于分泌期，差异有统计学意义(P<0.05)。GPER在研究组和对照组的阳性率分别为73.33%和16.67%,研究组的阳性率高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。GPER在对照组增生期与分泌期的阳性率分别为18.75%和14.29%,差异无统计学意义(P>0.05)。GPER在研究组增生期和分泌期的阳性率分别为56.25%和92.86%,分泌期的阳性率高于增生期，差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析结果表明：Bcl-2与GPER在子宫内膜息肉患者中的表达呈正相关(rs=0.933,0.872,均P<0.05)。结论 Bcl-2和GPER高表达使子宫内膜息肉组织凋亡减弱、增生加强，进而导致子宫内膜息肉的发生，并促进其发展。

关键词：
B细胞淋巴瘤/白血病-2
G蛋白耦联雌激素受体
子宫内膜息肉
子宫异常出血
良性增生性病变
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子宫内膜息肉由腺体、间质及厚壁血管组成，是一种良性增生性病变，可引起子宫异常出血、不孕[1]。部分子宫内膜息肉患者无症状，故实际人群的发病率无法准确统计，有研究[2]报道子宫内膜息肉在青春期后女性中的发病率约为25%。伴随临床诊疗技术及宫腔镜的深入应用，子宫内膜息肉的检出率呈升高趋势，但发病机制仍尚无明确定论，目前比较流行的假说有雌激素及相关受体、凋亡及炎性反应以及细胞因子等[3,4]。B细胞淋巴瘤/白血病-2 (Bcl-2)基因是一种癌基因，能够抑制细胞凋亡。20世纪90年代后期，4个单独的团队分别从几种细胞系中分离获得G蛋白耦联雌激素受体(GPER)。GPER在多种对女性激素产生影响的系统中广泛存在，其中也包含生殖器官[5,6],且其在多种癌细胞包括卵巢癌中均有表达。目前已有多项报道[7]证实GPER在推动癌细胞增殖、迁移中的潜在作用。基于此，本研究选取2010年10月—2012年4月绍兴市妇幼保健院收治的30例子宫内膜息肉患者为研究对象，旨在分析Bcl-2和GPER在子宫内膜息肉患者组织中的表达及相关性。

1、资料与方法

1.1资料来源

选取2010年10月—2012年4月绍兴市妇幼保健院收治的因子宫内膜息肉接受宫腔镜检查和切除的30例患者为研究组，均经术后病理诊断确诊为子宫内膜息肉。随机选择因不孕症在绍兴市妇幼保健院行宫腔镜检查以及因子宫肌瘤等非子宫内膜疾病行子宫切除的30例患者为对照组，均经术后病理诊断确诊为正常子宫内膜。所有研究对象的临床、病理资料完整，月经周期正常，未服用激素类药物，无节育环，手术前6个月无其他疾病。

1.2方法

1.2.1试剂

Bcl-2单克隆抗体购自丹麦Dako公司(即用型),GPER多克隆抗体购自爱必信(上海)生物科技有限公司(浓缩型，1∶200稀释)。

1.2.1方法

全部标本经10%中性甲醛固定，石蜡包埋，3μm切片，用于免疫组化检测。组织经65℃烤片3 h后二甲苯脱蜡，梯度酒精至水化，pH值8.0的EDTA高压抗原修复，PBS冲洗，滴加相应抗体，室温下孵育1 h, PBS冲洗，滴加二抗，室温下孵育30 min, PBS冲洗，DAB染色，苏木素复染，脱水，透明，封片。阳性对照用已知的阳性片试剂盒，用PBS代替一抗阴性对照进行镜下观察。

1.2.2图像分析

使用免疫组化Envision法。由两名有10年以上阅片经验的病理医师共同判定图像，各切片无序抽选10个中倍视野，依照染色细胞百分率及染色程度评价。染色细胞百分率分为5个评分等级：无阳性着色细胞0分，染色细胞百分率1%～25%为1分，染色细胞百分率26%～50%为2分，染色细胞百分率51%～75%为3分，染色细胞百分率76%～100%为4分。细胞染色程度分为4级：无着色0分，淡黄色1分，棕黄色2分，黄褐色3分。最终得分=染色细胞百分比×染色强度[8]。0～2分为(-),3～5分为(+),6～8分为(++),9～12分为(+++),其中0～2分判为阴性，3～12分判为阳性。

1.3统计学分析

本研究所得数据均采用SPSS 22.0版统计学软件进行处理。计数资料以百分率(%)的形式表示，组间比较采用χ2检验。采用Spearman相关性分析法分析Bcl-2与GPER在子宫内膜息肉患者中表达的相关性。P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1 Bcl-2阳性率

研究组和对照组Bcl-2阳性率比较差异有统计学意义(χ2=10.545,P<0.05)。研究组中，增生期和分泌期Bcl-2阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。对照组中，增生期和分泌期Bcl-2阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表1、表2、图1。

表1研究组和对照组Bcl-2阳性率[例(%)]

表2两组增生期和分泌期Bcl-2阳性率比较

图1 Bcl-2在子宫内膜息肉中的表达(Envision染色，×200)

2.2 GPER阳性率

研究组和对照组GPER阳性率比较差异有统计学意义(χ2=12.154,P<0.05)。研究组中，增生期和分泌期GPER阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。对照组中，增生期和分泌期GPER阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表3、表4、图2。

表3研究组和对照组GPER阳性率[例(%)]

表4两组增生期和分泌期GPER阳性率比较

图2 GPER在子宫内膜息肉中的表达(Envision染色，×200)

2.3 Bcl-2与GPER在子宫内膜息肉患者中表达的相关性

Spearman相关性分析结果表明：Bcl-2与GPER在子宫内膜息肉患者中的表达呈正相关(rs=0.933,0.872,均P<0.05)。

3、讨论

3.1 Bcl-2与子宫内膜息肉

近年来，在子宫内膜息肉发病机制的探索中，细胞凋亡缺陷假说越来越受到重视。Bcl-2可以促进细胞凋亡，Bcl-2基因定位于人类染色体18q21上，大小为270 kb,含3个外显子和2个开放阅读框架(220 bp、370 bp的启动子),在动物进化中高度保守，且伴随着细胞凋亡的始终，而染色体易位导致的Bcl-2激活又与人类恶性疾病密切相关，因此Bcl-2被认为是抑制细胞凋亡的标志物。Bcl-2抑制细胞凋亡的机制：(1)细胞色素C作为呼吸链中重要的电子传递体，从线粒体内膜上的释放会阻断电子向下游传递危及呼吸链的功能并导致超氧阴离子的加速产生；Bcl-2可以抑制促进细胞凋亡的细胞色素C从膜蛋白到细胞核以及膜内外阳离子的释放，从而抑制了超氧阴离子的产生[9]。蛋白质膜处于平衡状态，对于线粒体基质而言，其正离子具有高渗性，引发肿胀及外膜分裂后，加速促凋亡蛋白相细胞核的释放，进入细胞核的促凋亡蛋白破坏细胞质中的染色质或刺激Caspase因子，导致体细胞发生凋亡[10]。(2)调节体细胞的跨膜运输，影响钠离子向细胞质内外的扩散，而钠离子可对谷氨酰转移酶产生刺激，使细胞凋亡。Kim等[11]研究结果表明，Bcl-2通过破坏离子稳态在抑制NaCl诱导的细胞程序性死亡中发挥了重要作用。(3)可以用作抗氧化剂以改变体细胞的氧化还原反应，并进一步防止体细胞成分受氧化还原作用的影响。在去除生长因子诱发的凋亡中，活性氧(ROS)损伤是细胞死亡的主要诱因，Bcl-2过表达可以减少氧自由基的产生和脂质过氧化物的形成，对多种氧化损伤如γ射线照射、叔丁基过氧化氢、氰化物、低血糖、缺血等具有显著的保护作用[12]。在新陈代谢过程中，子宫内膜凋亡会增多，从而加速其脱落。因此，Bcl-2在整个子宫内膜息肉的形成和发展中发挥着重要作用。

3.2 GPER与子宫内膜息肉

GPER基因序列位于7p22上，包括1 128 bp的可读代码框，广泛分布于乳腺、心脏、脑及血管内皮等对雌激素有反应的组织。长期接触雌激素是多种癌症发展的主要原因，包括卵巢癌、子宫内膜癌、宫颈癌、乳腺癌。GPER与肿瘤的发生过程有关，如细胞存活、增殖、迁移。GPER是一种发挥快速信号作用的非基因组受体，被归类为膜结合蛋白，但是在某些情况下可以在内质网和细胞核中表达。GPER可连续激活MAPK和PI3K/Akt,以促进与细胞存活、增殖、分化、迁移、侵袭相关的几个基因的表达[13,14]。目前，已有的一些研究[15]表明GPER与女性特定的雌激素结合时，会产生“不遗传的转录”作用。已有研究[16]证实：GPER与雌激素结合后，相关生长基因c-Fos高表达，为肿瘤细胞生长提供了有利途径。本研究结果表明：研究组和对照组GPER阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05),说明GPER在子宫内膜息肉发生和发展过程中发挥了重要作用。

子宫内膜息肉患者的子宫内膜凋亡呈紊乱状态，高增殖、低凋亡促进了病变的发生、发展。Bcl-2和GPER可能参与子宫内膜息肉的发生和发展，并发挥重要功能。

参考文献:

[1]李娟清,黄秀峰.子宫内膜息肉发病机制､高危因素等基础研究进展[J].中国计划生育和妇产科,2021,13(7):27-29.

[3]刘颖燕,马薇,齐瑶.子宫内膜息肉恶变发病机制的分子研究进展[J].牡丹江医学院学报,2020,41(1):123-125

[5]张燕彩,郭瑞霞,葛新,等.GPER在雌激素激活的子宫内膜癌细胞内PI3K/Akt信号通路中的作用[J].中华妇产科杂志,2012,47(4):292-296.

[7]张静,鲁波,汤淑敏,等.子宫内膜息肉中GPER和c-jun的表达及其意义[J].浙江医学教育,2021,20(5):55-57,63.

[8]女性生殖道病理学[M].薛德彬,译.第6版.北京北京科学技术出版社,2014:192-197.

基金资助:浙江省医药卫生科技计划项目(2019KY719);

文章来源:王潇洒,张静,盛理超,等.Bcl-2和GPER在子宫内膜息肉患者组织中的表达及相关性分析[J].中国妇幼保健,2024,39(09):1686-1689.