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HPV16-E6、ID-1及Pin1在宫颈癌组织中的表达及相关性分析

2024-12-26 41 上传者：管理员

摘要：目的:分析人乳头瘤病毒16型E6蛋白(Human papillomavirus type 16 E6 protein, HPV16-E6)、细胞分化抑制因子-1(Inhibitor of intracellular differentiation-1,ID-1)及脯氨酰顺反异构酶1(Prolylcis-trans isomerase1,Pin1)在宫颈癌组织中的表达及相关性。方法:选择2017年3月至2022年3月莆田学院附属医院收治的宫颈癌65例，所有患者均在我院进行手术切除癌组织，并留取宫颈癌组织和距离癌组织边缘2 cm以上癌旁组织。通过免疫组化法对癌组织、癌旁组织标本HPV16-E6、ID-1、Pin1阳性表达率进行检测。分析HPV16-E6、ID-1、Pin1与临床特征的关系。结果:与癌旁组织相比，癌组织中HPV16-E6、ID-1、Pin1阳性率较高(P<0.05)。HPV16-E6、ID-1、Pin1与肌层浸润深度、组织学分级、临床分期、淋巴结转移、肿瘤直径呈正相关(P<0.05)。将年龄、病理类型等因素控制后，HPV16-E6、ID-1、Pin1与肌层浸润深度、组织学分级、临床分期、淋巴结转移、肿瘤直径相关(P<0.05)。结论:HPV16-E6、ID-1、Pin1在宫颈癌患者中均呈高表达，且HPV16-E6、ID-1、Pin1与宫颈癌患者肌层浸润深度、组织学分级、临床分期、淋巴结转移、肿瘤直径相关。

关键词：
HPV
人乳头瘤病毒16型E6蛋白
内细胞分化抑制因子-1
宫颈癌
脯氨酰顺反异构酶1
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宫颈癌的发生与阴道菌群失调､免疫功能低下､多个性伴侣､高危人乳头状瘤病毒( High - risk human papilloma virus,HPV) 感染等因素存在联系[1]｡宫颈癌早期可能无任何症状,随病情的发展患者可出现肛门坠胀感､接触性出血､阴道排液等症状,进而对患者日常生活､生命安全造成了不良影响｡因此,早期准确诊断对患者临床治疗､预后改善具有关键作用[2 - 3]｡高危人乳头状瘤病毒( High - risk human papilloma virus,HPV) 16 是人乳头瘤病毒的一种,可刺激致癌基因分泌人乳头瘤病毒 16 型 E6 蛋白( Human papillomavirus type 16 E6 protein,HPV16 - E6) ,增加 HPV 感染者癌变风险[4]｡细胞分化抑制因子 - 1 ( Inhibitor of intracellular differentiation - 1,ID - 1) 与多种恶性肿瘤的细胞分化存在联系,可使肿瘤细胞凋亡进程阻滞,进而推动了恶性肿瘤的发展[5]｡脯氨酰顺反异构酶 1 ( Prolylcis - trans isomerase1,Pin1) 可破坏肿瘤抑制基因､癌基因间的平衡,进而推动了多种恶性肿瘤的发生､发展[6]｡目前临床关于 HPV16 - E6､ID - 1､Pin1 在宫颈癌中表达研究较少,基于此,本文研究分析了宫颈癌组织中 HPV16 - E6､ID - 1､Pin1 表达及与临床特征的关系,以期为宫颈癌早期诊治提供借鉴｡

1、对象与方法

1. 1 研究对象

选择2017 年 3 月至 2022 年 3 月莆田学院附属医院收治的宫颈癌 65 例,年龄 37 ~ 65 岁,平均年龄( 49. 08 ± 9. 52) 岁,所有患者均在我院进行手术切除癌组织,并留取宫颈癌组织和距离癌组织边缘 2 cm 以上癌旁组织｡患者对本研究内容均已知情并签署知情同意书｡本研究经我院伦理委员会审核通过｡纳入标准: 所有患者符合《宫颈癌诊断与治疗指南( 第 4 版) 》[7]中的诊断标准,均经病理学确诊｡排除标准: 合并疾病妇科炎症者; 入院前的 3 个月内接受过放化疗治疗者; 患有其他恶性肿瘤者; 非首次确诊者; 存在宫颈手术史者｡

1. 2 方法

1. 2. 1 病理学检查取宫颈癌组织,经脱水､石蜡包埋处理后,做 HE 染色,显微镜下观察染色切片组织｡分别诊断为鳞状细胞癌､腺癌､透明细胞癌等｡

1. 2. 2 免疫组化法检测 HPV16 - E6､ID - 1､Pin1 表达通过免疫组化法对宫颈癌旁组织､宫颈癌组织标本 HPV16 - E6､ID - 1､Pin1 表达情况进行检测｡将 HPV16 - E6､ID - 1､Pin1 多克隆抗体稀释为 1∶ 100,将所采集的组织标本在福尔马林( 10% ) 中进行固定,脱水､包埋,制作 4 μm 组织切片,将切片通过二甲苯浸泡､经酒精 3 次脱蜡､脱水,每次持续 5 min,蒸馏水冲洗后浸泡于 H2O2 中 15 min,用 PBS 溶液进行冲洗,每次持续 5 min｡分别滴加( 1∶ 200) 的 HPV16 - E6､ID - 1､Pin1 抗体,在湿盒( 4 ℃ ) 中过夜保存,第 2 天将湿盒取出后复温处理 1 h,采用 PBS 洗片 3 次,5 min /次｡之后加入二氨基联苯胺 ( 1∶ 50) 进行 1 min 的显色处理,最后加入蒸馏水终止反应｡复染采用苏木素,盐酸乙醇分化后,采用梯度乙醇进行脱水,采用二甲苯冲洗片 3 次,直至透明,采用中性树脂封片处理,在显微镜下对免疫组化染色情况进行观察｡随机选择 6 个高倍视野,观察阳性细胞百分比和染色强度评分: 阳性细胞数 < 10% 为( - ) ,10% ~ 25% 为( + ) ,26% ~ 75% 为 ( + + ) ,> 75% 为( + + + )｡

1. 3 统计学处理

使用SPSS 22. 0 软件进行数据分析,应用 Kolmogorov - Smirnov 检验数据是否符合正态分布,符合正态分布的计量资料采用均数 ± 标准差( x ± s) 描述,levene 法进行方差齐性检验,两组间比较采用独立样本 t 检验,不符合正态分布的运用中位数､四分位间距 M( Q1,Q3 ) ,组间采用 Wilcoxon 比较｡计数资料以 n( % ) 表示,用 χ 2 检验｡采用 Pearson 相关性分析 HPV16 - E6､ID - 1､Pin1 与宫颈癌临床特征的相关性,应用多元线性逐步回归分析 HPV16 - E6､ID - 1､Pin1 的影响因素｡以 P < 0. 05为差异具有统计学意义｡

2、结果

2. 1 病理学检查结果

宫颈癌组织HE 染色后在显微镜下观察,分别诊断为鳞状细胞癌､腺癌､透明细胞癌｡见图 1｡

图1 宫颈癌组织的苏木素 - 伊红( HE) 染色图

2. 2 癌旁组织､癌组织中 HPV16 - E6､ID - 1､Pin1 阳性率对比

与癌旁组织相比,癌组织中 HPV16 - E6､ID - 1､Pin1 阳性率较高,具有统计学差异 ( P < 0. 05) ｡见表 1｡

表1 癌旁组织､癌组织中 HPV16 - E6､ID - 1､ Pin1 阳性率对比

2. 3 HPV16 - E6､ID - 1､Pin1 与宫颈癌临床特征的关系分析通过 Pearson 相关性分析｡HPV16 - E6､ID - 1､Pin1 与肌层浸润深度､组织学分级､临床分期､淋巴结转移､肿瘤直径呈正相关,具有统计学差异( P < 0. 05) ｡见表 2,表 3,表 4｡

2. 4 多元线性逐步回归分析将年龄､病理类型等因素控制后,以肌层浸润深度( < 1 /2 = 1,≥1 /2 = 2) ､组织学分级( 高分化 = 1,中低分化 = 2) ､临床分期( Ⅰ期 - Ⅱ期 = 1,Ⅲ - Ⅳ期 = 2) ､淋巴结转移 ( 无 = 1,有 = 2) ､肿瘤直径( < 4 cm = 1,≥4 cm = 2) 为因变量,将 HPV16 - E6､ID - 1､Pin1 作为自变量, 纳入多元线性回归模型,结果显示宫颈癌组织中 HPV16 - E6､ID - 1､Pin1 与肌层浸润深度､组织学分级､临床分期､淋巴结转移､肿瘤直径相关,具有统计学差异( P < 0. 05) ｡见表 5｡

表2 HPV16 - E6 与宫颈癌临床特征的关系分析

表3 ID - 1 与宫颈癌临床特征的关系分析

表4 Pin1 与宫颈癌临床特征的关系分析

表5 多元线性逐步回归分析

3、讨论

宫颈癌是具有预后效果差､侵袭力强､易转移等特点的女性高发恶性肿瘤,具有较高的病死率,严重威胁着女性的生命安全,因此早期准确诊断宫颈癌对患者治疗方案制定､预后改善具有重要意义[8 - 10]｡

高危人乳头瘤病毒感染为宫颈癌发生的主要原因之一,HPV16 作为机体感染概率较高的高危人乳头瘤病毒亚型,在侵入机体后可对致癌基因形成刺激,促进 HPV16 - E6 的生成,而高表达的 HPV16 - E6 可对机体细胞周期调节蛋白表达水平造成影响, 进而增加了感染者癌变风险[11 - 12]｡本文研究发现, 宫颈癌患者 HPV16 - E6 表达较高,且 HPV16 - E6 表达与患者肌层浸润深度､组织学分级､临床分期､淋巴结转移､肿瘤直径相关｡相关学者研究发现[13 - 14],HPV16 - E6 对血管内皮生长因子的合成､分泌具有促进作用,进而促进了血管新生､血管内皮细胞分化､浸润､增生,参与了宫颈癌的发生､发展, 增加了患者癌细胞转移的风险,与本文研究结果一致｡表明宫颈癌中 HPV16 - E6 异常高表达,可参与宫颈癌发生､发展｡

宫颈癌发展过程中癌基因与抑癌基因失衡发挥着重要作用,而 ID - 1 对抑癌基因表达､细胞老化及凋亡具有抑制作用,同时可促进瘤体血管新生及癌细胞转移,在多种恶性肿瘤中均呈异常表达[15 - 16]｡本文研究发现,ID - 1 在宫颈癌患者中阳性表达较高,且与肌层浸润深度､组织学分级､临床分期､淋巴结转移､肿瘤直径相关｡相关学者研究发现[17 - 18], ID - 1 对基质金属蛋白酶 - 9 具有诱导作用,进而促进了肿瘤微血管的形成,为宫颈癌浸润､转移提供了有利条件,同时 ID - 1 对患者组织细胞分化具有抑制作用,使得细胞衰老延迟,促使宫颈癌向高度恶化发展,最终对患者预后造成了不利影响,与本文研究结果保持一致｡表明 ID - 1 表达与宫颈癌患者临床特征存在联系｡

Pin1 是一种细胞周期具有调节作用的功能蛋白,在多种恶性肿瘤中均呈高表达,高表达的 Pin1 可使致癌信号增强,进而造成了细胞增殖､转化失控,推动了恶性肿瘤的发生､发展[19 - 20]｡本文研究发现,宫颈癌患者中 Pin1 表达较高,且肌层浸润 ≥1 /2､中低分化､Ⅲ - Ⅳ期､肿瘤直径≥4 cm 的宫颈癌患者 Pin1 阳性表达率较高｡相关学者研究发现[21 - 22],Pin1 可促进靶基因 Cyclin D1 的转录,使 Cyclin D1 过表达,进而对癌细胞增殖起到了促进作用,推动了宫颈癌患者病情发展,对患者预后造成了不利影响,与本文研究结果保持一致｡表明在宫颈癌患者中 Pin1 表达较高,且 Pin1 表达情况与宫颈癌患者临床特征相关｡

综上所述,HPV16 - E6､ID - 1､Pin1 在宫颈癌患者中高表达,HPV16 - E6､ID - 1､Pin1 与肌层浸润深度､组织学分级､临床分期､淋巴结转移､肿瘤直径相关｡但因样本量过少,且未对其作用机制进行分析,因此还需后续进一步分析 HPV16 - E6､ ID - 1､Pin1 参与宫颈癌发生､发展的具体机制,造福于更多的宫颈癌患者｡

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