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锌指蛋白582与老年宫颈癌患者放疗敏感性的相关性

  2021-12-07    47  上传者:管理员

摘要:目的观察老年宫颈癌患者血清锌指蛋白(ZNF)582表达及甲基化程度,探讨其与老年宫颈癌患者放疗敏感性的关系。方法237例老年宫颈癌患者均行标准根治性放疗联合同步增敏化疗方案治疗,治疗期间出现严重化疗不良反应者停止增敏化疗,行单纯根治性标准放疗方案治疗。放疗完成后根据疗效分为放疗敏感组207例(完全缓解+部分缓解)和放疗耐受组30例(疾病稳定+疾病进展)。比较2组年龄、体质量指数、肿瘤直径、FIGO分期、病理类型、淋巴结转移及完成同步增敏化疗比率等临床资料;采用实时荧光定量PCR法检测2组患者放疗前血清ZNF582mRNA相对表达量;检测2组患者放疗前血清ZNF582甲基化阳性率;采用多因素logistic回归分析老年宫颈癌患者发生放疗耐受的影响因素。结果放疗期间放疗敏感组35例、放疗耐受组11例发生化疗严重不良反应停止增敏化疗,采用单纯放疗。放疗敏感组FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期(36.23%)、完成同步增敏化疗比率(83.09%)均高于放疗耐受组(16.67%、63.33%)(χ2=4.485,P=0.034;χ2=6.539,P=0.011);2组年龄、体质量指数、肿瘤直径、浸润深度、病理类型、人乳头瘤病毒阳性、淋巴结转移比率比较差异均无统计学意义(P>0.05);放疗敏感组血清ZNF582mRNA相对表达量(0.99±0.24)高于放疗耐受组(0.78±0.22)(t=4.973,P<0.001),ZNF582甲基化阳性率(58.45%)低于放疗耐受组(90.00%)(t=11.119,P<0.001);血清ZNF582mRNA相对表达量(OR=0.012,95%CI:0.008~0.397,P<0.001)、ZNF582甲基化(OR=7.704,95%CI:2.141~27.731,P=0.002)是老年宫颈癌患者发生放疗耐受的影响因素。结论老年宫颈癌患者放疗敏感者FIGO分期早,放疗联合同步增敏化疗可提高放疗疗效;血清ZNF582低表达及甲基化是老年宫颈癌患者发生放疗耐受的危险因素。

  • 关键词:
  • 同步增敏化疗
  • 宫颈癌
  • 标准放疗
  • 甲基化
  • 老年患者
  • 锌指蛋白582
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早期宫颈癌患者可行手术或根治性放疗治疗,但宫颈癌手术切除范围广、创伤大,部分患者因年龄和身体状况无法行手术治疗;中晚期宫颈癌患者临床以根治性放疗为主[1]。放疗同步化疗可提高放疗敏感性,延长患者生存时间[2]。评估放疗敏感性对老年宫颈癌患者制定治疗方案有重要意义。锌指蛋白(ZNF)家族是人类基因组中主要转录因子家族,其结构基序具有多样化组合和功能,参与人体多种生物过程[3]。研究[4]发现,宫颈癌患者病灶中ZNF582表达水平降低,可能与其启动子甲基化水平有关。本研究观察老年宫颈癌患者血清ZNF582表达水平及甲基化情况,探讨其与老年宫颈癌患者放疗敏感性的相关性,报道如下。


1、资料与方法


1.1 一般资料

2018年1月—2020年6月新疆维吾尔自治区人民医院诊治的老年宫颈癌患者237例,年龄(67.3±6.3)岁;FIGO分期[5]:Ⅰ期39例,Ⅱ期41例,Ⅲ期76例,Ⅳ期81例。入选标准:(1)经组织病理检查确诊为宫颈癌[6];(2)具有放疗指征,行标准根治性放疗联合增敏化疗方案;(3)功能状态评分>70分;(4)年龄>60岁。排除标准:(1)既往有放射源接触史或曾经接受过放疗者;(2)有严重全身性慢性疾病者;(3)放疗不耐受者;(4)有其他系统恶性肿瘤者;(5)有严重肝、肾功能障碍者。本研究经新疆维吾尔自治区人民医院医学伦理委员会批准通过,研究对象均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 放疗方法

放疗方案依据文献[6]制定,采用盆腔外照射和腔内后装治疗。(1)应用60Co机进行盆腔外照射,单次1.8Gy,每周4~5次,6周为1个疗程,每个疗程总剂量≥45Gy,对有既往宫颈癌根治术未切除肿块的患者给予高适性度照射补,每周总剂量10~15Gy,分散加入每次治疗。(2)将放射源改为192Ir进行腔内后装治疗,单次计量6Gy,每周5~6次,6周为1个疗程;(3)A点照射总剂量在30~36Gy,每周1次,6周为1个疗程。所有患者均行1个疗程根治性放疗治疗。

1.2.2 同步增敏化疗方法

放疗同期采用紫杉醇+顺铂方案化疗增加放疗敏感性[7]。紫杉醇注射液(海南海药股份有限公司,国药准字20043122,5mL:30mg)135mg/m2,静脉滴注时间>3h,第1天,21d为1个疗程;顺铂注射液(云南植物药业有限公司,国药准字H53021740,2mL:10mg)50mg/m2,静脉滴注时间>1h,第2天,21d为1个疗程。依据文献[5]标准,观察患者同步化疗期间严重骨髓抑制、消化道不良反应、低蛋白血症、器官功能障碍等不良反应发生情况,化疗期间出现严重不良反应者停止化疗,继续行单纯放疗。

1.2.3 疗效评估及分组

放疗后根据CT及MRI检查结果评估疗效[6]:(1)完全缓解为所有靶病灶消失,无新病灶出现,且肿瘤标志物水平正常,维持4周以上;(2)部分缓解为靶病灶肿瘤体积缩小50%以上,维持4周以上;(3)疾病稳定为靶病灶体积缩小<50%或增大<25%;(4)疾病进展为靶病灶体积增大>25%,或出现新病灶。放疗敏感为完全缓解+部分缓解,放疗耐受为疾病稳定+疾病进展。237例老年宫颈癌患者中完全缓解127例、部分缓解80例为放疗敏感组,疾病稳定21例、疾病进展9例为放疗耐受组。

1.2.4 血清ZNF582

mRNA相对表达量检测抽取2组患者治疗前空腹外周静脉血3~4mL,采用PureLinkPro96总RNA纯化试剂盒(美国赛默飞世尔公司)提取总RNA,SuperScriptⅣ反转录酶(美国赛默飞世尔公司)按照试剂盒说明将其转录为cDNA,应用ABIVeriti7500型实时荧光定量PCR仪(美国赛默飞世尔公司),采用实时荧光定量PCR法检测血清ZNF582mRNA相对表达量,引物合成及序列测定由上海生工生物工程有限公司完成(表1)。反应体系:共20μL,包括SYBRGreenⅠmix10μL,cDNA3μL,上、下游引物各1μL,无酶水H2O5μL。反应条件:95℃30s,95℃5s,60℃44s,40个循环。以GAPDH为内参,采用2-ΔΔCt计算ZNF582mRNA相对表达量。

1.2.5 ZNF582甲基化检测

取2组患者治疗前空腹外周静脉血3~4mL,采用PureLinkPro96总RNA纯化试剂盒(美国赛默飞世尔公司)提取总RNA,应用紫外分光光度仪检测DNA浓度。甲基转移酶处理单个核细胞基因组DNA,取ThermoScientific甲基转移酶(美国赛默飞世尔公司)处理单个核细胞基因组DNA进行亚硫酸氢盐修饰,按照ThermoScientific甲基转移酶(美国赛默飞世尔公司)说明书进行操作,修饰后的DNA用溴化乙锭重新溶解,用于甲基化特异性检测。引物由上海生工生物工程有限公司合成,甲基化的ZNF582基因引物序列见表2。反应体系:10×M.SssIBuffer2μL,50×SAM0.4μL,样本1μg,M.SssI1μL,加无核酸酶水至20μL。反应条件:94℃5min,94℃30s,62℃30s,70℃1min,35个循环。PCR扩增结束后,对扩增产物行质量分数2.5%琼脂糖凝胶电泳,电泳结束后紫外检测仪下观察并拍照。基因甲基化判断:仅出现甲基化产物判定为完全甲基化;甲基化产物和非甲基化产物均出现判定为不完全甲基化;以上均为甲基化阳性。仅出现非甲基化产物为非甲基化,为甲基化阴性。

1.2.6 观察指标

(1)收集2组患者临床资料,包括年龄、体质量指数、肿瘤直径、外周浸润深度及FIGO分期、人乳头瘤病毒阳性、病理类型(鳞癌、腺癌、腺鳞癌、其他)、淋巴结转移、完成同步增敏化疗情况;(2)比较2组血清ZNF582mRNA相对表达量及甲基化阳性率。

1.3 统计学处理

应用SPSS25.0软件进行统计分析,计量资料以均数±标准差(x¯±s)表示,比较采用独立样本t检验;计数资料比较采用χ2检验;检验水准α=0.05。


2、结果


2.1 2组放疗联合同步增敏化疗情况

237例老年宫颈癌患者中放疗敏感207例,放疗耐受30例,放疗敏感率为87.3%(207/237),放疗时间(37.49±1.47)d。放疗敏感组放疗期间无严重放疗不良反应发生,35例同步增敏化疗期间发生化疗严重不良反应停止增敏化疗,行单纯放疗。放疗耐受组放疗期间无严重放疗不良反应发生,11例同步增敏化疗期间发生化疗严重不良反应停止增敏化疗,行单纯放疗。

2.2 2组FIGO分期、完成同步增敏化疗比率等临床资料比较

放疗敏感组FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、完成同步增敏化疗比率均高于放疗耐受组(P<0.05);2组年龄、体质量指数、肿瘤直径、浸润深度、病理类型、人乳头瘤病毒阳性、淋巴结转移比率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。见表3。

2.3 2组血清ZNF582

mRNA相对表达量及甲基化阳性率比较放疗敏感组血清ZNF582mRNA相对表达量(0.99±0.24)高于放疗耐受组(0.78±0.22)(t=4.973,P<0.001)。放疗敏感组ZNF582甲基化阳性率为58.45%(121/207),低于放疗耐受组的90.00%(27/30)(χ2=11.119,P<0.001)。

2.4 老年宫颈癌患者发生放疗耐受影响因素的多因素logistic回归分析

以放疗是否敏感为因变量,以是否完成同步增敏化疗、FIGO分期、ZNF582mRNA相对表达量、ZNF582甲基化为自变量,进行多因素logistic回归分析,结果显示ZNF582mRNA相对表达量、ZNF582甲基化是老年宫颈癌患者放疗耐受的影响因素。见表4-5。


3、讨论


采用放疗联合增敏化疗方案治疗宫颈癌患者临床敏感率可达90%以上[8]。本研究结果显示,237例老年宫颈癌患者中放疗敏感207例,放疗耐受30例,放疗敏感率为87.3%,低于上述文献报道,可能与本研究FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期患者较多有关[9]。多数恶性肿瘤患者体内恶性肿瘤细胞处于不同细胞周期,对放射线敏感性不一致,采用增敏同步化疗可干扰体内肿瘤细胞的细胞周期,提高肿瘤细胞对放射线的敏感性。有研究[10]发现,顺铂可促进休眠期细胞进入有放射敏感性的增殖周期,杀灭放疗敏感性差的乏氧细胞,改变肿瘤细胞的氧合状态,同时改变肿瘤细胞的微循环,增加放疗敏感性。FIGO分期是临床宫颈癌进展程度常用评价方式,FIGO分期晚的患者病灶体积大、浸润程度深,发生转移概率高。

有研究[11]发现,FIGO分期较晚的宫颈癌患者放疗对病灶影响程度较小,残余的宫颈癌细胞可再次分裂,导致病情复发,提示FIGO分期晚可影响宫颈癌患者放疗效果。有研究[12]发现,单纯放疗对早期宫颈癌患者疗效较好,对中晚期宫颈癌放疗联合增敏化疗可延长患者无病生存期。本研究结果显示,放疗敏感组FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、完成同步增敏化疗比率均高于放疗耐受组,表明老年宫颈癌患者放疗敏感者FIGO分期早,放疗联合同步增敏化疗可提高放疗敏感性,放疗敏感者疗效佳。

ZNF作为参与人体基因转录的重要因素,超过1/3的不同种类ZNF均含有KRBA结构,此结构是参与上皮-间质转化调控的重要因素,而ZNF582的KRAB结构域位于第19号染色体,在结肠癌、食管癌及宫颈癌细胞中呈高表达,ZNF582可能通过改善局部上皮-间质转化而干预宫颈癌的病理过程[13]。E盒结合锌指蛋白(zincfingerE-box-bindinghomebox,ZEB)作为ZNF家族结构域中重要组成部分,ZEB亚型ZEB2可与上皮钙黏附蛋白基因启动子特异性结合,抑制上皮钙黏附蛋白表达,促进癌细胞转移[14]。ZNF582作为抑制肿瘤扩散的重要因子,其对ZEB有明显抑制作用,可防止癌细胞扩散,进而增加点放疗的疗效[15]。本研究结果显示,放疗耐受组ZNF582mRNA相对表达量低于放疗敏感组,提示ZNF582表达降低可能导致患者放疗敏感性降低。

基因启动子区甲基化是影响基因表达的重要因素。研究[16]发现,宫颈癌患者病灶内ZNF582甲基化率明显高于正常组织,提示宫颈癌细胞异常增生,通过累积效应使ZNF582甲基化发生,从而导致癌细胞的扩散。本研究结果显示,放疗敏感组ZNF582甲基化阳性率低于放疗耐受组,可能是因为ZNF582甲基化导致ZNF582表达下降,引起宫颈癌细胞浸润及扩散程度加重,导致放疗不敏感。本研究多因素logistic回归分析结果显示,ZNF582mRNA相对表达量、ZNF582甲基化是老年宫颈癌患者放疗耐受的影响因素,提示血清ZNF582低表达及甲基化是老年宫颈癌患者发生放疗耐受的危险因素,临床检测宫颈癌患者ZNF582表达及甲基化情况可为早期制定放疗方案提供参考。但本研究为单中心研究,样本量小,ZNF582对宫颈癌患者放疗敏感性的影响机制有待进一步研究。


参考文献:

[1]邓晶,王敏,谢环.宫颈癌患者组织和血液miR-21和miR-34a表达及诊断意义[J].中华实用诊断与治疗杂志,2019,33(6):566-568

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文章来源:祁小丽,开丽曼·阿布都巴热,热伊拉·麦买提伊敏,普拉提·努尔别克.锌指蛋白582与老年宫颈癌患者放疗敏感性的相关性[J].中华实用诊断与治疗杂志,2021,35(12):1229-1232.

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