摘要:目的观察老年宫颈癌患者血清锌指蛋白(ZNF)582表达及甲基化程度,探讨其与老年宫颈癌患者放疗敏感性的关系。方法237例老年宫颈癌患者均行标准根治性放疗联合同步增敏化疗方案治疗,治疗期间出现严重化疗不良反应者停止增敏化疗,行单纯根治性标准放疗方案治疗。放疗完成后根据疗效分为放疗敏感组207例(完全缓解+部分缓解)和放疗耐受组30例(疾病稳定+疾病进展)。比较2组年龄、体质量指数、肿瘤直径、FIGO分期、病理类型、淋巴结转移及完成同步增敏化疗比率等临床资料;采用实时荧光定量PCR法检测2组患者放疗前血清ZNF582mRNA相对表达量;检测2组患者放疗前血清ZNF582甲基化阳性率;采用多因素logistic回归分析老年宫颈癌患者发生放疗耐受的影响因素。结果放疗期间放疗敏感组35例、放疗耐受组11例发生化疗严重不良反应停止增敏化疗,采用单纯放疗。放疗敏感组FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期(36.23%)、完成同步增敏化疗比率(83.09%)均高于放疗耐受组(16.67%、63.33%)(χ2=4.485,P=0.034;χ2=6.539,P=0.011);2组年龄、体质量指数、肿瘤直径、浸润深度、病理类型、人乳头瘤病毒阳性、淋巴结转移比率比较差异均无统计学意义(P>0.05);放疗敏感组血清ZNF582mRNA相对表达量(0.99±0.24)高于放疗耐受组(0.78±0.22)(t=4.973,P<0.001),ZNF582甲基化阳性率(58.45%)低于放疗耐受组(90.00%)(t=11.119,P<0.001);血清ZNF582mRNA相对表达量(OR=0.012,95%CI:0.008~0.397,P<0.001)、ZNF582甲基化(OR=7.704,95%CI:2.141~27.731,P=0.002)是老年宫颈癌患者发生放疗耐受的影响因素。结论老年宫颈癌患者放疗敏感者FIGO分期早,放疗联合同步增敏化疗可提高放疗疗效;血清ZNF582低表达及甲基化是老年宫颈癌患者发生放疗耐受的危险因素。
早期宫颈癌患者可行手术或根治性放疗治疗,但宫颈癌手术切除范围广、创伤大,部分患者因年龄和身体状况无法行手术治疗;中晚期宫颈癌患者临床以根治性放疗为主[1]。放疗同步化疗可提高放疗敏感性,延长患者生存时间[2]。评估放疗敏感性对老年宫颈癌患者制定治疗方案有重要意义。锌指蛋白(ZNF)家族是人类基因组中主要转录因子家族,其结构基序具有多样化组合和功能,参与人体多种生物过程[3]。研究[4]发现,宫颈癌患者病灶中ZNF582表达水平降低,可能与其启动子甲基化水平有关。本研究观察老年宫颈癌患者血清ZNF582表达水平及甲基化情况,探讨其与老年宫颈癌患者放疗敏感性的相关性,报道如下。
1、资料与方法
1.1 一般资料
2018年1月—2020年6月新疆维吾尔自治区人民医院诊治的老年宫颈癌患者237例,年龄(67.3±6.3)岁;FIGO分期[5]:Ⅰ期39例,Ⅱ期41例,Ⅲ期76例,Ⅳ期81例。入选标准:(1)经组织病理检查确诊为宫颈癌[6];(2)具有放疗指征,行标准根治性放疗联合增敏化疗方案;(3)功能状态评分>70分;(4)年龄>60岁。排除标准:(1)既往有放射源接触史或曾经接受过放疗者;(2)有严重全身性慢性疾病者;(3)放疗不耐受者;(4)有其他系统恶性肿瘤者;(5)有严重肝、肾功能障碍者。本研究经新疆维吾尔自治区人民医院医学伦理委员会批准通过,研究对象均签署知情同意书。
1.2 方法
1.2.1 放疗方法
放疗方案依据文献[6]制定,采用盆腔外照射和腔内后装治疗。(1)应用60Co机进行盆腔外照射,单次1.8Gy,每周4~5次,6周为1个疗程,每个疗程总剂量≥45Gy,对有既往宫颈癌根治术未切除肿块的患者给予高适性度照射补,每周总剂量10~15Gy,分散加入每次治疗。(2)将放射源改为192Ir进行腔内后装治疗,单次计量6Gy,每周5~6次,6周为1个疗程;(3)A点照射总剂量在30~36Gy,每周1次,6周为1个疗程。所有患者均行1个疗程根治性放疗治疗。
1.2.2 同步增敏化疗方法
放疗同期采用紫杉醇+顺铂方案化疗增加放疗敏感性[7]。紫杉醇注射液(海南海药股份有限公司,国药准字20043122,5mL:30mg)135mg/m2,静脉滴注时间>3h,第1天,21d为1个疗程;顺铂注射液(云南植物药业有限公司,国药准字H53021740,2mL:10mg)50mg/m2,静脉滴注时间>1h,第2天,21d为1个疗程。依据文献[5]标准,观察患者同步化疗期间严重骨髓抑制、消化道不良反应、低蛋白血症、器官功能障碍等不良反应发生情况,化疗期间出现严重不良反应者停止化疗,继续行单纯放疗。
1.2.3 疗效评估及分组
放疗后根据CT及MRI检查结果评估疗效[6]:(1)完全缓解为所有靶病灶消失,无新病灶出现,且肿瘤标志物水平正常,维持4周以上;(2)部分缓解为靶病灶肿瘤体积缩小50%以上,维持4周以上;(3)疾病稳定为靶病灶体积缩小<50%或增大<25%;(4)疾病进展为靶病灶体积增大>25%,或出现新病灶。放疗敏感为完全缓解+部分缓解,放疗耐受为疾病稳定+疾病进展。237例老年宫颈癌患者中完全缓解127例、部分缓解80例为放疗敏感组,疾病稳定21例、疾病进展9例为放疗耐受组。
1.2.4 血清ZNF582
mRNA相对表达量检测抽取2组患者治疗前空腹外周静脉血3~4mL,采用PureLinkPro96总RNA纯化试剂盒(美国赛默飞世尔公司)提取总RNA,SuperScriptⅣ反转录酶(美国赛默飞世尔公司)按照试剂盒说明将其转录为cDNA,应用ABIVeriti7500型实时荧光定量PCR仪(美国赛默飞世尔公司),采用实时荧光定量PCR法检测血清ZNF582mRNA相对表达量,引物合成及序列测定由上海生工生物工程有限公司完成(表1)。反应体系:共20μL,包括SYBRGreenⅠmix10μL,cDNA3μL,上、下游引物各1μL,无酶水H2O5μL。反应条件:95℃30s,95℃5s,60℃44s,40个循环。以GAPDH为内参,采用2-ΔΔCt计算ZNF582mRNA相对表达量。
1.2.5 ZNF582甲基化检测
取2组患者治疗前空腹外周静脉血3~4mL,采用PureLinkPro96总RNA纯化试剂盒(美国赛默飞世尔公司)提取总RNA,应用紫外分光光度仪检测DNA浓度。甲基转移酶处理单个核细胞基因组DNA,取ThermoScientific甲基转移酶(美国赛默飞世尔公司)处理单个核细胞基因组DNA进行亚硫酸氢盐修饰,按照ThermoScientific甲基转移酶(美国赛默飞世尔公司)说明书进行操作,修饰后的DNA用溴化乙锭重新溶解,用于甲基化特异性检测。引物由上海生工生物工程有限公司合成,甲基化的ZNF582基因引物序列见表2。反应体系:10×M.SssIBuffer2μL,50×SAM0.4μL,样本1μg,M.SssI1μL,加无核酸酶水至20μL。反应条件:94℃5min,94℃30s,62℃30s,70℃1min,35个循环。PCR扩增结束后,对扩增产物行质量分数2.5%琼脂糖凝胶电泳,电泳结束后紫外检测仪下观察并拍照。基因甲基化判断:仅出现甲基化产物判定为完全甲基化;甲基化产物和非甲基化产物均出现判定为不完全甲基化;以上均为甲基化阳性。仅出现非甲基化产物为非甲基化,为甲基化阴性。
1.2.6 观察指标
(1)收集2组患者临床资料,包括年龄、体质量指数、肿瘤直径、外周浸润深度及FIGO分期、人乳头瘤病毒阳性、病理类型(鳞癌、腺癌、腺鳞癌、其他)、淋巴结转移、完成同步增敏化疗情况;(2)比较2组血清ZNF582mRNA相对表达量及甲基化阳性率。
1.3 统计学处理
应用SPSS25.0软件进行统计分析,计量资料以均数±标准差(x¯±s)表示,比较采用独立样本t检验;计数资料比较采用χ2检验;检验水准α=0.05。
2、结果
2.1 2组放疗联合同步增敏化疗情况
237例老年宫颈癌患者中放疗敏感207例,放疗耐受30例,放疗敏感率为87.3%(207/237),放疗时间(37.49±1.47)d。放疗敏感组放疗期间无严重放疗不良反应发生,35例同步增敏化疗期间发生化疗严重不良反应停止增敏化疗,行单纯放疗。放疗耐受组放疗期间无严重放疗不良反应发生,11例同步增敏化疗期间发生化疗严重不良反应停止增敏化疗,行单纯放疗。
2.2 2组FIGO分期、完成同步增敏化疗比率等临床资料比较
放疗敏感组FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、完成同步增敏化疗比率均高于放疗耐受组(P<0.05);2组年龄、体质量指数、肿瘤直径、浸润深度、病理类型、人乳头瘤病毒阳性、淋巴结转移比率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。见表3。
2.3 2组血清ZNF582
mRNA相对表达量及甲基化阳性率比较放疗敏感组血清ZNF582mRNA相对表达量(0.99±0.24)高于放疗耐受组(0.78±0.22)(t=4.973,P<0.001)。放疗敏感组ZNF582甲基化阳性率为58.45%(121/207),低于放疗耐受组的90.00%(27/30)(χ2=11.119,P<0.001)。
2.4 老年宫颈癌患者发生放疗耐受影响因素的多因素logistic回归分析
以放疗是否敏感为因变量,以是否完成同步增敏化疗、FIGO分期、ZNF582mRNA相对表达量、ZNF582甲基化为自变量,进行多因素logistic回归分析,结果显示ZNF582mRNA相对表达量、ZNF582甲基化是老年宫颈癌患者放疗耐受的影响因素。见表4-5。
3、讨论
采用放疗联合增敏化疗方案治疗宫颈癌患者临床敏感率可达90%以上[8]。本研究结果显示,237例老年宫颈癌患者中放疗敏感207例,放疗耐受30例,放疗敏感率为87.3%,低于上述文献报道,可能与本研究FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期患者较多有关[9]。多数恶性肿瘤患者体内恶性肿瘤细胞处于不同细胞周期,对放射线敏感性不一致,采用增敏同步化疗可干扰体内肿瘤细胞的细胞周期,提高肿瘤细胞对放射线的敏感性。有研究[10]发现,顺铂可促进休眠期细胞进入有放射敏感性的增殖周期,杀灭放疗敏感性差的乏氧细胞,改变肿瘤细胞的氧合状态,同时改变肿瘤细胞的微循环,增加放疗敏感性。FIGO分期是临床宫颈癌进展程度常用评价方式,FIGO分期晚的患者病灶体积大、浸润程度深,发生转移概率高。
有研究[11]发现,FIGO分期较晚的宫颈癌患者放疗对病灶影响程度较小,残余的宫颈癌细胞可再次分裂,导致病情复发,提示FIGO分期晚可影响宫颈癌患者放疗效果。有研究[12]发现,单纯放疗对早期宫颈癌患者疗效较好,对中晚期宫颈癌放疗联合增敏化疗可延长患者无病生存期。本研究结果显示,放疗敏感组FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、完成同步增敏化疗比率均高于放疗耐受组,表明老年宫颈癌患者放疗敏感者FIGO分期早,放疗联合同步增敏化疗可提高放疗敏感性,放疗敏感者疗效佳。
ZNF作为参与人体基因转录的重要因素,超过1/3的不同种类ZNF均含有KRBA结构,此结构是参与上皮-间质转化调控的重要因素,而ZNF582的KRAB结构域位于第19号染色体,在结肠癌、食管癌及宫颈癌细胞中呈高表达,ZNF582可能通过改善局部上皮-间质转化而干预宫颈癌的病理过程[13]。E盒结合锌指蛋白(zincfingerE-box-bindinghomebox,ZEB)作为ZNF家族结构域中重要组成部分,ZEB亚型ZEB2可与上皮钙黏附蛋白基因启动子特异性结合,抑制上皮钙黏附蛋白表达,促进癌细胞转移[14]。ZNF582作为抑制肿瘤扩散的重要因子,其对ZEB有明显抑制作用,可防止癌细胞扩散,进而增加点放疗的疗效[15]。本研究结果显示,放疗耐受组ZNF582mRNA相对表达量低于放疗敏感组,提示ZNF582表达降低可能导致患者放疗敏感性降低。
基因启动子区甲基化是影响基因表达的重要因素。研究[16]发现,宫颈癌患者病灶内ZNF582甲基化率明显高于正常组织,提示宫颈癌细胞异常增生,通过累积效应使ZNF582甲基化发生,从而导致癌细胞的扩散。本研究结果显示,放疗敏感组ZNF582甲基化阳性率低于放疗耐受组,可能是因为ZNF582甲基化导致ZNF582表达下降,引起宫颈癌细胞浸润及扩散程度加重,导致放疗不敏感。本研究多因素logistic回归分析结果显示,ZNF582mRNA相对表达量、ZNF582甲基化是老年宫颈癌患者放疗耐受的影响因素,提示血清ZNF582低表达及甲基化是老年宫颈癌患者发生放疗耐受的危险因素,临床检测宫颈癌患者ZNF582表达及甲基化情况可为早期制定放疗方案提供参考。但本研究为单中心研究,样本量小,ZNF582对宫颈癌患者放疗敏感性的影响机制有待进一步研究。
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文章来源:祁小丽,开丽曼·阿布都巴热,热伊拉·麦买提伊敏,普拉提·努尔别克.锌指蛋白582与老年宫颈癌患者放疗敏感性的相关性[J].中华实用诊断与治疗杂志,2021,35(12):1229-1232.
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宫颈癌是临床妇科中常见的一种恶性肿瘤,目前以化疗为主要治疗方式。虽然化疗对患者病情的改善与抑制具有积极意义,但化疗会对患者的正常组织造成一定破坏,进而引发患者的负性情绪,增加治疗难度,因此,需借助护理来辅助化疗顺利进行。在常规护理实施过程中,护理人员多注重对患者饮食与治疗等方面的指导,难以减轻患者因疾病与化疗产生的心理压力。
2024-03-22核磁共振成像(MRI)平扫联合扩散加权成像(DWI)在宫颈癌手术前的检测中扮演着关键角色,宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤之一,其早期诊断和准确分期对于制定有效的治疗方案至关重要[1]。传统的核磁共振成像平扫成像通过提供高分辨率的解剖学信息,可帮助医生评估宫颈癌的局部扩散和淋巴结转移,但在评估肿瘤的组织细胞特性和局部浸润情况方面存在局限[2]。
2024-03-21宫颈癌是发生在子宫颈部位的恶性肿瘤,也是女性生殖道最常见的恶性肿瘤,具有较高的发病率,且发病逐渐呈现年轻化趋势。宫颈癌患者早期并无明显的症状,随着肿瘤细胞的扩散和浸润,当患者出现明显症状时癌症已进展至中期甚至晚期,治疗难度较大。对于早期宫颈癌,子宫切除术一直是治疗的标准方法。
2024-03-18化疗是宫颈癌中晚期患者主要治疗手段之一,可通过有效抑杀癌细胞来缩小肿瘤病灶并限制其生长转移,进而改善阴道出血、坠胀感等不适病症,提高生存质量。但有相关调查发现,虽化疗可使大部分宫颈癌患者获得较好临床病理缓解,但仍有部分患者化疗效果不理想,如不能及时识别干预,则会增加宫颈癌恶化转移几率,增加不良预后发生风险。
2024-03-16宫颈癌在世界范围内癌症发病率中排名第三,在发展中国家中是女性最常见的癌症,是我国女性恶性肿瘤第二大死亡原因,严重威胁着女性生命健康。在我国中晚期宫颈癌的5年生存率平均为59.8%,如果癌症扩散到身体的远处,5年生存率仅为17%,但如果能早期发现,干预治疗及时,5年生存率可以达到90%以上。
2024-03-15宫颈癌被认为是影响女性生育能力的重要疾病,其发病率极高。宫颈癌是一种危害性极大的恶性肿瘤,在发展中国家和地区的发病率和死亡率均高于其他癌症,排名第四位。近10年来欧美主要国家采取的宫颈癌初筛、阴道镜检查和组织病理学检查三步法显著降低了宫颈癌的死亡率。
2024-03-15宫颈癌为临床妇科常见恶性肿瘤疾病,由于早期症状隐匿,致使很多患者确诊时已到中晚期,在此阶段时,会出现病情恶性程度高及转移的特点。放疗为治疗此类疾病的常见方式,可显著提高患者生存率,但是也会带来胃肠道反应及放射性直肠炎等不良问题,以致于影响患者营养状态,导致其不能耐受,直接影响治疗效果。
2024-03-14宫颈癌为临床妇科常见恶性肿瘤疾病,由于早期症状隐匿,致使很多患者确诊时已到中晚期,在此阶段时,会出现病情恶性程度高及转移的特点。放疗为治疗此类疾病的常见方式,可显著提高患者生存率,但是也会带来胃肠道反应及放射性直肠炎等不良问题,以致于影响患者营养状态,导致其不能耐受,直接影响治疗效果。
2024-03-13宫颈癌(Cervical cancer)是仅次于乳腺癌和结肠癌的全球妇女第三常见恶性肿瘤,而在发展中国家,宫颈癌在妇科肿瘤中占首位[1]。放射治疗是一种通过放射线控制癌细胞生长和增殖的局部治疗方式,是宫颈癌治疗的主要方式之一,有80%的宫颈癌患者在治疗过程中涉及放射治疗[2]。
2024-03-06宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤,全球每年约有570 000例新发病例和311 000例死亡,其中85%在发展中国家,而我国占世界的30%,严重威胁妇女的健康和安全。虽然筛查和手术联合综合治疗的防治模式已有效改善早期宫颈癌的预后,但晚期、转移及复发的宫颈癌却很难达到根治,也是患者死亡的主要危险因素,按国际妇产科联盟分期,中晚期之后的患者占59.2%。
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