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微小核糖核酸-223在宫颈癌中的表达及意义

2024-02-28 92 上传者：管理员

摘要：目的探讨微小核糖核酸-223(miR-223)在宫颈癌患者中的表达及其临床意义。方法选取45例宫颈癌患者的宫颈癌组织为宫颈癌组，癌旁组织为对照组。采用实时荧光定量PCR技术检测miR-223的表达水平，用SPSS 22.0软件对结果进行统计学分析。结果宫颈癌组miR-223的表达量(1.848±0.630)显著高于对照组(1.027±0.359),差异有统计学意义(t=-7.591,P<0.05)。miR-223在Ⅲ～Ⅳ期患者的表达水平(2.370±0.341)显著高于Ⅰ～Ⅱ期患者的表达水平(1.301±0.311),低分化患者的表达水平(2.346±0.444)显著高于中分化和高分化患者的表达水平(1.598±0.560),有淋巴结转移患者的表达水平(2.125±0.567)显著高于无淋巴结转移组的表达水平(1.530±0.554),差异均有统计学意义(t=10.971、-4.508、3.558,均P<0.05)。miR-223对宫颈癌诊断的曲线下面积为0.825,具有较高的诊断效能。Kaplan-Meier生存曲线表明，与高表达组相比，miR-223低表达组患者的生存率明显提高(P<0.05)。结论 miR-223在宫颈癌患者中表达升高，可作为宫颈癌诊断的分子生物学标志物。

关键词：
女性生殖系统
宫颈癌
微小核糖核酸-223
手术联合综合治疗
淋巴结转移
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宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤，全球每年约有570 000例新发病例和311 000例死亡，其中85%在发展中国家，而我国占世界的30%,严重威胁妇女的健康和安全[1]。虽然筛查和手术联合综合治疗的防治模式已有效改善早期宫颈癌的预后，但晚期、转移及复发的宫颈癌却很难达到根治，也是患者死亡的主要危险因素[2],按国际妇产科联盟分期，中晚期之后的患者占59.2%。此外，20%以上的早期宫颈癌患者在根治性手术前有淋巴结转移，是宫颈癌术后复发的重要原因[3]。目前，宫颈癌的主要治疗方法包括手术、化学疗法及放射疗法。尽管现代医学在不断进步，但约有四分之一的宫颈癌患者在3年内会出现肿瘤复发、转移甚至死亡[4]。SSC-Ag、CA-125、CEA、DNA及蛋白质等代谢标记物被应用于宫颈癌的诊断，但由于其灵敏度和特异度的原因，宫颈癌早期检出率不高。因此，探索一种新的宫颈癌诊断标记物至关重要。MicroRNA(miRNA)是一类约22个核苷酸长的保守非编码RNA,miRNA是1993年首次在秀丽隐线虫中被研究人员发现，它可以与60%以上的人类蛋白质编码基因相结合而起调控作用。现在，已经有超过2 000种miRNA被证实具有调节30%以上人类基因组中的基因[5]。miRNA要么降解某些特定基因，要么通过与3'-非翻译区互补的方式结合来抑制它们的表达。miRNA生物功能广泛，包括细胞的增殖、肿瘤细胞的侵袭、转移和机体对药物的耐受[6]。本研究旨在探讨miR-223在宫颈癌中的表达及意义。现将研究结果报道如下。

1、资料与方法

1.1资料来源

选取2017年1月—2019年12月台州市第一人民医院收治的45例宫颈癌患者为研究对象，年龄35～72岁，平均年龄(58.0±12.5)岁。其中Ⅰ期13例，Ⅱ期9例，Ⅲ期15例，Ⅳ期8例，中、高分化30例，低分化15例，有淋巴结转移患者24例，无淋巴结转移患者21例。纳入标准：① 所有病例临床诊断均经病理科组织病理学证实；②术前未经过任何放疗、化疗等医学治疗；③患者未合并其他妇科肿瘤疾病；④肝功能、肾功能正常。排除标准：①非初次治疗患者；②合并其他恶性肿瘤；③心、肺功能不全者；④患有自身免疫性疾病患者；⑤依从性差患者。

1.2方法

总RNA的提取：取宫颈癌组织及癌旁组织标本，用碾磨器将其碾成粉末状，将粉末迅速转入EP管中备用。提取宫颈癌组织及癌旁组织中的总RNA,检测总RNA的质量合格后，按照逆转录试剂盒说明书，将总RNA逆转录成cDNA后，用实时荧光定量聚合酶链反应进行基因扩增，以2-ΔΔCt法计算相对表达量。PCR反应体系：2.5 mmol /L dNTPs 4μl, 25 mmol /L MgCl2 4μl, 20μmol /L引物各1μl, 5 U /μl Taq酶0.25μl,模板5.0μl, 10×Buffer 5μl,加无菌双蒸馏水至50μl。反应条件：94℃预变性5 min, 94℃ 变性1 min, 54℃ 退火1 min, 72℃1 min,共循环35次；最后延伸10 min。

1.3统计学分析

采用SPSS 22.0软件进行统计分析，计量资料用

表示，组间比较采用t检验。用受试者工作特征(ROC)曲线对诊断效能进行评价，计算曲线下面积(AUC)。用Kaplan-Meier绘制生存曲线，P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1两组患者miR-223表达水平比较

miR-223在宫颈癌组的表达水平(1.848±0.630)显著高于对照组(1.027±0.359),差异有统计学意义(t=-7.591,P<0.05)。

2.2 miR-223的表达水平与临床病理参数的关系

miR-223在Ⅲ～Ⅳ期患者的表达水平显著高于Ⅰ～Ⅱ期患者，低分化患者的表达水平显著高于中分化和高分化患者的表达水平，有淋巴结转移患者的表达水平显著高于无淋巴结转移组的表达水平(均P<0.05)。见表1。

表1 miR-223的表达水平与临床病理参数的关系

2.3 miR-223对宫颈癌的诊断效能评价

miR-223对宫颈癌诊断的曲线下面积为0.825,它有较高的诊断效能。见图1。

图1 miR-223对宫颈癌的诊断效能

2.4 miR-223表达与宫颈癌患者预后的关系

根据表达量平均值分为低表达组和高表达组，绘制生存曲线，miR-223低表达组比高表达组有更好的累积生存率(P<0.05)。见图2。

图2 Kaplan-Meier生存分析miR-223表达对宫颈癌患者预后的影响

3、讨论

宫颈癌是全球女性死亡的主要原因之一，宫颈癌起源于正常宫颈上皮，逐渐发展为低级别和高级别宫颈上皮内瘤变。宫颈癌早期没有特定的临床症状与前侵入阶段，这使得它难以在早期阶段被发现。在大多数情况下，这种疾病会在晚期(Ⅲ期或以上)诊断出宫颈癌前病变。宫颈癌的主要风险因素包括高危人乳头瘤病毒感染、口服避孕药、吸烟、分娩、年龄及饮食等。在这些不同的风险因素中，高危人乳头瘤病毒持续感染宫颈上皮导致宿主基因组改变是主要因素，其原因可能是：①高危人乳头瘤病毒感染致使肿瘤因子的活性异常；②高危人乳头瘤病毒感染导致各种肿瘤抑制因子的沉默；③各种高危人乳头瘤病毒衍生的致癌因子与宫颈上皮细胞宿主基因组整合后，细胞的生长及发育异常，进而致使细胞癌变[7,8]。

MicroRNA是18-23个核苷酸长度的非编码RNA,通过与目的基因的3'-UTR相结合，导致其去腺苷酸化、翻译及降解来调控细胞的发育、生长及分化[9,10,11]。至目前为止，人们已经发现了数百个与疾病有关的miRNAs,单个miRNA可以与几个或十几个miRNA相互作用，导致它们的表达水平异常。miRNA调控功能较为复杂，涉及机体的生物学过程，主要表现为影响细胞的分化、增殖、迁移、侵袭及细胞凋亡等。异常的miRNA表达可导致细胞无限增殖、间充质的获得、肿瘤细胞的转移、细胞凋亡抵抗及诱导血管生成等[12]。不同类型的肿瘤，miRNA的功能也不一样：在胃癌患者中，miR-1269的表达明显上调，它与RASSF9相结合，通过Bax/Bcl-2信号通路和AKT信号通路来加速细胞周期G1-S进程，进而达到其促进胃癌细胞的增殖以及抑制癌细胞凋亡。在口腔鳞癌患者中，miR-9表达显著下调，低表达的miR-9可以诱导细胞周期G0/G1停滞，并且能通过抑制细胞周期蛋白D1和蛋白依赖性激酶6来抑制口腔鳞癌细胞增殖[13]。结直肠癌患者中，miR-144通过结合PBX3,抑制结直肠癌细胞迁移和侵袭[14],miR-301b-3p在结直肠癌中为癌基因，通过抑制HOXB1表达来促进结直肠癌的增殖和转移[15]。miRNA-222-3p在前列腺癌中表达显著下调，miRNA-222-3p通过负调控SNAP91参与前列腺癌的转移[16]。miRNA-20a-5p在非小细胞肺癌中为癌基因，通过靶向KLF9加速非小细胞肺癌细胞的增殖和侵袭[17]。miRNA-96-5p作为癌基因，通过抑制FOXO3的表达促进细胞增殖而导致乳腺癌发生和发展[18]。

miRNA在宫颈癌中的作用，有的表现为癌基因，有的表现为抑癌基因。马晴晴等[19]研究发现，miRNA205-5p加强HLA-DQB1表达，从而促进癌细胞的增殖和淋巴结转移。miRNA-451可以通过阻断AKT/Bcl-2,从而实现对癌细胞增殖的抑制、诱导细胞凋亡，这样能对宫颈癌起抑制作用[20]。miRNA-41在宫颈癌组织中呈高表达，高水平的miRNA-41能够导致c-myc和Vimentin的表达升向，加速EMT的生成，促进其增殖和转移[21]。miRNA-1基因在宫颈癌中呈低表达，其对EMT有一定的促进和调节作用[22]。有研究[23]结果显示，miRNA的异常表达与高危人乳头瘤病毒持续感染机体有关，而miRNA基因座不稳定位点与HPV DNA结合，从而引起了宫颈癌的发生。

miR-223基因位于人类X染色体q12上，其生物学功能受到许多转录因子的调控。miR-223在不同肿瘤中发挥着不同的功能，有些是抑制癌细胞生长，有些则是促进癌细胞分化、增殖及凋亡[24]。miR-223基因在口腔鳞癌患者中呈高表达，高水平的miR-223能刺激癌细胞的生长，导致癌的扩散和转移[25]。miR-223在结直肠中为癌基因，通过miR-223-FBXW7-Notch途径在结直肠癌中起重要调控作用[26]。miR-223在宫颈癌中表达明显升高，可与TGFBR3基因的mRNA相连接，miR-223由转录因子STAT3介导，且受HPV E6蛋白的调控，并可经STAT3-miR-223-TGFBR3/HMGCS1阻断宫颈癌发生[27]。miR-223在宫颈癌中表达量较癌旁组织显著升高，miR-223能够靶向结合E2F转录因子1,使G0/G1期快速转至S期，缩短了癌细胞的生长周期，使其迅速分裂和增殖，能够抑制E-钙黏蛋白分化，促进波形蛋白表达，促进EMT过程，使癌细胞易于脱离原发部位而向其他正常组织器官侵袭、迁移[28]。

本研究结果显示，miR-223在宫颈癌中的表达显著增高，表明其为宫颈癌的癌基因。进一步分析其临床病理资料，发现miR-223基因高水平的患者分化程度较低，TNM的分期较高，发生淋巴结转移率较高，提示miR-223与宫颈癌患者肿瘤分化、增殖、转移及侵袭有关。miR-223对宫颈癌诊断的曲线下面积为0.825,具有较高的诊断效能。Kaplan-Meier生存曲线表明，与高表达组相比，miR-223低表达组患者的生存率明显提高。

综上所述，miR-223基因在宫颈癌中的表达水平升高与其发展和发病密切相关，可能是一种新型的生物学标记物，但其作用机制尚需深入探讨。

参考文献:

[19]马晴晴,杨主娟,郭亮生,等.探讨HLA-DQB1-AS1调控miRNA-205-5p表达对宫颈癌增殖､迁徙和侵袭的影响[J].中国妇产科临床杂志,2021,22(5):461-463.

[20]李艳,陈文玉,陈小平,等.miRNA-451在宫颈癌中的表达及对宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡影响的作用机制研究[J].癌症进展,2021,19(15):1531-1535.

[21]朱亚,张伟,柯丽娜,等.miRNA-41调控c-myc在宫颈癌上皮间质转化中的作用[J].河北医药,2020,42(1):113-115.

[22]程云,彭景贤,岳淑芬,等.miRNA -1介导的c -Met与宫颈癌进展的相关性研究[J].包头医学院学报,2020,36 (6):56-61.

[26]马藤,李晓花,丁演鹂,等.MiR-223靶向Fbxw7基因并通过Notch通路抑制结肠癌细胞凋亡[J].湖北医药学院学报,2020,39(5):443-446.

[28]张媛媛,古丽仙·吐尔逊,唐努尔·阿不力米提,等.宫颈癌组织中miR-223､EPB41L3的表达变化及临床意义[J].山东医药,2021,61 (28):51-54.

基金资助:浙江省台州市科技局项目(21ywb53);

文章来源:李康康,叶丽君,蒋亚萍.微小核糖核酸-223在宫颈癌中的表达及意义[J].中国妇幼保健,2024,39(05):910-913