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研究探索乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏在氨金黄敏颗粒中含量测定及含量均匀度技术

2020-07-21 389 上传者：管理员

摘要：目的:建立HPLC法同时测定氨金黄敏颗粒中对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的含量及马来酸氯苯那敏含量均匀度。方法:色谱柱为Grace Alltima C18(4. 6 mm×250 mm,5μm);以三乙胺溶液(取三乙胺1m L，加水1 000 m L，用磷酸调节pH值至2. 6)-乙腈(82∶18)为流动相;检测波长为222 nm(马来酸氯苯那敏)、245 nm(对乙酰氨基酚);进样量为10μL。结果:对乙酰氨基酚在6～125μg•m L-1、马来酸氯苯那敏在4～103μg•m L-1范围内与峰面积均呈良好线性关系，分别为r=1. 000 0(n=5)、r=0. 999 9(n=5);对乙酰氨基酚的平均回收率为99. 6%,RSD%为2. 17%(n=9);马来酸氯苯那敏的平均回收率为102. 6%,RSD%为1. 52%(n=9)。收集的5家生产企业10批样品，测得对乙酰氨基酚标示含量99. 4%～103. 5%，马来酸氯苯那敏标示含量84. 8%～99. 7%，马来酸氯苯那敏含量均匀度A+2. 2S为6. 0～26. 0，其中3批A+S大于15. 0。结论:本法能同时测定氨金黄敏颗粒中对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏的含量，以及马来酸氯苯那敏含量均匀度，专属、准确，为氨金黄敏颗粒质量标准的完善和提高提供依据。

关键词：
含量均匀度
含量测定
对乙酰氨基酚
氨金黄敏颗粒
马来酸氯苯那敏
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氨金黄敏颗粒为复方抗感冒药，用于缓解儿童普通感冒及流行性感冒引起的发热、头痛等症状，本品处方中每袋含对乙酰氨基酚150 mg、马来酸氯苯那敏2 mg、盐酸金刚烷胺50 mg和人工牛黄10 mg。目前国内共有5家生产企业，4个现行标准[1,2,3,4]均采用容量法测定对乙酰氨基酚，操作繁复，终点不易判定，人为误差影响较大;其中2个现行标准采用HPLC法测定马来酸氯苯那敏，但溶剂甲醇不环保，且流动相中含有易损耗色谱柱寿命的表面活性剂十二烷基硫酸钠，且仅1个现行标准对马来酸氯苯那敏进行含量均匀度检查。文献[5]采用HPLC法同时测定对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏，但马来酸氯苯那敏浓度较低，峰面积较小积分不准确，且溶剂含有机溶剂不环保。为提高本品质量，本文建立同时测定氨金黄敏颗粒中对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏含量的HPLC法，并对马来酸氯苯那敏的含量均匀度进行检查，方法简便专属，结果准确有效，可用于氨金黄敏颗粒的质量控制和改进生产工艺提供科学依据。

1、仪器与试药

1.1仪器

美国戴安公司Ultimate3000高效液相色谱仪;美国Waters Alliance e2695-2998高效液相色谱仪;瑞士梅特勒AG285电子天平;Millipore SYNSO-ROOO纯水器;Grace Alltima C18(4.6 mm×250 mm,5μm),Dikma Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)。

1.2试药

乙腈，色谱纯，Merck公司;三乙胺为色谱纯，阿拉丁产品;水，millipore，自制超纯水;对乙酰氨基酚对照品(中国食品药品检定研究院，批号:100018-200408，含量100.0%);马来酸氯苯那敏对照品(中国食品药品检定研究院，批号:100047-200606，含量99.7%);氨金黄敏颗粒样品10批，企业A，批号20121205,20130405;企业B，批号130901、130902;企业C批号120201、120202;企业D批号120506、130104;企业E批号20131001、20131002。规格均为每袋含对乙酰氨基酚150 mg、马来酸氯苯那敏2 mg、盐酸金刚烷胺50 mg和人工牛黄10 mg。

2、方法与结果

2.1溶液的制备

2.1.1含量测定供试品溶液

取本品10袋，精密称定，取内容物研细，精密称取适量(约相当于马来酸氯苯那敏2 mg)，置50 m L量瓶中，加水适量，振摇使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，作为马来酸氯苯那敏供试品溶液;精密量取马来酸氯苯那敏供试品溶液1 m L，置100 m L量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对乙酰氨基酚供试品溶液。

2.1.2含量均匀度供试品溶液

取本品10袋，每袋置50 m L量瓶中，加水适量，振摇使溶解，加水稀释至刻度，摇匀，作为含量均匀度供试品溶液。

2.1.3对照品溶液

取对乙酰氨基酚对照品、马来酸氯苯那敏对照品各适量，精密称定，分别用水溶解并定量稀释制成每1 m L中含对乙酰氨基酚约0.03 mg与马来酸氯苯那敏约0.04 mg的溶液，摇匀，作为对乙酰氨基酚对照品溶液和马来酸氯苯那敏对照品溶液。

2.1.4混合对照品溶液

取对乙酰氨基酚对照品溶液和马来酸氯苯那敏对照品溶液等量混匀。

2.2色谱条件

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以三乙胺溶液(取三乙胺1 mL，加水1 000 mL，用磷酸调节pH值至2.6)-乙腈(82∶18)为流动相;检测波长为222 nm(马来酸氯苯那敏)、245 nm(对乙酰氨基酚)。精密量取混合对照品溶液20μL注入液相色谱仪，记录色谱图(检测波长222 nm)，理论板数按氯苯那敏峰计算应不低于3 000，马来酸峰、对乙酰氨基酚峰和氯苯那敏峰的分离度应符合要求。

分别精密量取供试品溶液和对照品溶液10μL注入液相色谱仪，记录色谱图按外标法以各自对应的峰面积计算，即得。

2.3方法学验证

2.3.1系统适用性试验

混合对照品溶液按“2.2”项下色谱条件进行试验，各色谱峰峰型良好，马来酸、对乙酰氨基酚、氯苯那敏峰之间的分离度分别为7.6、24.9，理论板数按氯苯那敏峰计算为11801，均符合要求。见图1。

图1系统适用性试验图谱(222 nm)

2.3.2专属性

按处方组成分别配制空白辅料，依法溶解，按“2.2”进样10μL，色谱图见图2、图3。结果:空白辅料对主药峰均无干扰。

图2辅料对测定对乙酰氨基酚的影响(245 nm)

图3辅料对测定马来酸氯苯那敏的影响(222 nm)

2.3.3准确度

精密称取对乙酰氨基酚对照品0.948 1 g置25m L量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备溶液。精密称取批号20131001样品内容物适量(约含对乙酰氨基酚7.5 mg)各9份，分别置500 m L量瓶中，每3份分别加入对乙酰氨基酚对照品储备溶液1.00 m L、2.00 m L、3.00 m L，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过。按“2.2”项下条件测定，各进样10μL，记录色谱图，结果见表1，表明本法准确度良好。

精密称取马来酸氯苯那敏对照品0.012 92 g置25 m L量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备溶液。精密称取批号20131001样品内容物适量(约含马来酸氯苯那敏1 mg)各9份，分别置50 m L量瓶中，每3份分别加入马来酸氯苯那敏对照品储备溶液1.00 m L、2.00 m L、3.00 m L，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过。按“2.2”项下条件测定，各进样10μL，记录色谱图，结果见表1和表2，表明本法准确度良好。

2.3.4线性和范围

精密称取对乙酰氨基酚对照品0.015 61 g置50 m L量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对乙酰氨基酚对照品储备液，分别精密量取1、1、1、1、2m L分别置50 m L、25 m L、10 m L、5 m L、5 m L量瓶中，加水稀释至刻度。按“2.2”项下条件测定，各进样10μL，记录色谱图，以峰面积A对浓度C(μg·m L-1)进行线性回归，得线性方程:

公式1

结果表明，对乙酰氨基酚的浓度在6～125μg·m L-1范围内与峰面积线性关系良好。

表1对乙酰氨基酚加样回收试验结果

表2马来酸氯苯那敏加样回收试验结果

精密称取马来酸氯苯那敏对照品0.012 92 g置25 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为马来酸氯苯那敏对照品储备液，分别精密量取2、1、2、3、1 mL分别置250 mL、25 mL、25 mL、25 mL、5 mL量瓶中，加水稀释至刻度。按“2.2”项下条件测定，各进样10μL，记录色谱图，以峰面积A对浓度C(μg·mL-1)进行线性回归，得线性方程:

公式2

结果表明，马来酸氯苯那敏的浓度在4～103μg·m L-1范围内与峰面积线性关系良好。

2.3.5溶液的稳定性

按“2.1”项下配制供试品溶液，按“2.2”项下条件测定，记录色谱峰面积，考察各组分的稳定性。结果，对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏在0 h和20 h峰面积比较，RSD%分别为0.22%和0.39%，说明两种组分均在20 h内稳定。

2.3.6重复性

取批号20131002样品，配制6份100%水平的供试品溶液，按“2.2”项下条件测定，各进样10μL，记录色谱图，RSD(n=6)分别为0.41%(对乙酰氨基酚)和0.72%(马来酸氯苯那敏)，重复性均良好。

2.3.7耐用性

选用2根不同品牌的C18柱在2台仪器上测定10批样品的含量，结果一致，说明建立的方法耐用性良好。

2.3.8检出限与定量限

以信噪比为3∶1，测得系统中对乙酰氨基酚的最低检测浓度为0.01μg·m L-1，即最低检测限为0.1 ng，定量检测浓度为0.04μg·m L-1，即定量限为0.4 ng;马来酸氯苯那敏的最低检测浓度为0.1μg·m L-1，即最低检测限为1 ng，定量检测浓度为0.4μg·m L-1，即定量限为4 ng。

2.4样品测定

取氨金黄敏颗粒样品10批，照“2.2”项下的方法试验，典型的供试品溶液、对照品溶液图谱见图4，含量测定和含量均匀度结果见表3。

图4供试品和对照品溶液典型色谱图

表3样品含量及含量均匀度测定结果

3、结果与讨论

3.1样品测定结果分析

10批样品对乙酰氨基酚标示含量均在90.0%～110.0%之间;8批马来酸氯苯那敏标示含量在90.0%～110.0%之间，2批低于90%;马来酸氯苯那敏含量均匀度，若L规定为15.0，其中有3批样品(A+2.2S)值均大于15.0，且其(A+S)值均大于15.0，则不符合规定。马来酸氯苯那敏标示含量低于90%和含量均匀度(A+S)值大于15.0的两家生产企业均未设置“马来酸氯苯那敏”检查项或含量测定项。

3.2流动相的选择

选取乙腈、水、三乙胺(扫尾剂)的流动相系统进行试验。结果可见，对乙酰氨基酚对流动相系统中的有机相比例较为敏感，马来酸氯苯那敏对流动相系统中的有机相比例、扫尾剂、p H值均敏感，综合考虑选取流动相为:乙腈-三乙胺溶液(取三乙胺1 m L，加水1 000m L混匀，用磷酸调节p H为2.6)(18∶82)。见图5～7。

图6流动相中水相p H值对主峰的影响(0.1%三乙胺溶液，15%乙腈)

图7流动相中有机相的比例对主峰的影响(0.1%三乙胺，p H 2.6)

3.3检测波长的选择

在色谱仪200～350 nm全波长扫描光谱图(见图8)中可见，对乙酰氨基酚在245 nm、马来酸氯苯那敏在222 nm波长处分别有最大吸收。故分别选取最大吸收波长作为各自的检测波长。

3.4溶剂的选择

对乙酰氨基酚微溶于水，马来酸氯苯那敏易溶于水，故优先考虑用水作为溶剂，既环保又经济。结果，以水为溶剂，溶液稳定，回收率、重复性良好。

图8在200～350 nm波长内扫描图

3.5小结

本次建立的HPLC色谱系统测定氨金黄敏颗粒中对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏的含量，以及马来酸氯苯那敏含量均匀度，方法可行，经济环保，专属性强，可用于氨金黄敏颗粒的质量控制。

参考文献：

[1]国家药品标准:化学药品地方标准上升国家标准.第12册[S]. 2002:91.

[2]国家食品药品监督管理局. YBH09352009氨金黄敏颗粒[S]. 2009.